ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA

INSTRUMENTACIN Y EQUIPOS DE LABORATORIO

TEMA: ESPECTOFOTOMETRIA. DOCENTE: LUIS M. BRAVO SERRANO. ALUMNO: JIMENEZ LLUEN JAMES DENG CICLO: III.

ESPECTROFOTOMETRA
Es la medida de la cantidad de energa radiante absorbida por las molculas a longitudes de ondas especificas.
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico mas usado en las investigaciones biolgicas.

TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRA
La espectrofotometra de absorcin de infrarrojos La espectrofotometra por resonancia magnetica nuclear (RMN). La espectrofotometra de fluorescencia. La espectrofotometra de emisin atmica. La espectrofotometra deabsorcion atmica. La espectrofotometra de masas. La espectrofotometra de fluorescencia de rayos X.

 Es un mtodo analtico que utiliza los

efectos de la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia (tomos y molculas) para medir la absorcin o la transmisin de luz por las sustancias.
La absorbancia y la transmitancia de una

sustancia en disolucin se miden con un aparato denominado: Espectrofotmetro.

ESPECTROFOTOMETRO
Es un equipo utilizado en la fsica ptica que permite

comprara la radiacin absorbancia o transmitancia por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia en funcin de la longitud de onda.

COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTMETRO
Fuente de luz: La fuente de luz

que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son:
lmpara

de wolframio (tambin llamado tungsteno) lmpara de arco de xenn. lmpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atmicos.

 Monocromador:

El Monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica. Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida.

 Compartimiento

de Muestra: Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de Lamber Beer en su mxima expresin, con base en sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula.

 Detector: El detector, es quien

detecta una radiacin y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos:
a) los que responden a fotones; b) los que responden al calor.

Registrador:

Convierte el fenmeno fsico, en nmeros proporcionales al analito en cuestin. Fotodetectores: En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la seal en forma simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mviles del equipo.

 Cubetas

espectrofotomtrica: Una cubeta o cubeta de espectrofotmetro es un pequeo tubo de seccin circular o cuadrada, sellado en un extremo, fabricado en plastico, vidrio o cuarzo (transparente a la luz ultravioleta ) y diseado para mantener las muestras durante los experimentos de espectroscopia. Las cubetas deben ser tan claras o transparentes como sea posible, sin impurezas que puedan afectar a una lectura espectroscpica.

Tipos de cubetas Existen diferentes tipos de cubetas para uso general, segn las diferentes longitudes de onda utilizables:
Material
Cristal ptico o vidrio borosilicatado

Rango de transmisin
(longitudes de onda)

Zona del espectro

Tolerancia en transmisin
0,5% a 365 nm

De 380 a 780 nm3 De 380 a 780 nm3

Menos de 380 nm3 185 nm,4 De 190 a 2000 nm De 220 a 3500 nm

Visible Visible
Ultravioleta Ultravioleta Ultravioleta Infrarrojo

Plstico
Cuarzo fundido Cuarzo UV Cuarzo ES (cuarzo silicatado fundido) Cuarzo IR

1% a 220 nm 1% a 220 nm 1% a 2730 nm

Absorcin de luz

Los cuerpos coloreados absorben luz de determinada longitud de onda y reflejan el resto del espectro luminoso visible e invisible(colores complementarios y color propio del cuerpo coloreado). Cada molcula absorbe luz de acuerdo a la concentracin en que se encuentre dentro de la solucin y a cada longitud de onda de luz corresponde a un distinto nivel de energa para excitar sus electrones. Si consideramos que cada molcula absorbe luz de acuerdo a la concentracin en que se encuentre dentro de la solucin, a mayor absorcin de luz es menor la luz trasmitida. Estos factores estn considerados en la

Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I0 pasa a travs de una solucin, parte de la luz es absorbida resultando que la luz emergente I es menor que I0

Luz incidente (I0)

Luz absorbida

Luz emergente (I)

a = absortividad

I0
Longitud del medio absorbente o ancho de la celda

I
c = concentracin. b
(nmero de partculas por cm3)

Longitudes de onda, absorcin de la luz y colores complementrios

LEYES FUNDAMENTALES DE ABSORCIN

Se denomina absorcin al proceso por el cual una especie, en un medio transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de radiacin electromagntica.