ANIMAIS DE EXPERIMENTAO RATO

Biomedicina - ICB/UFG
2012/2

ANIMAIS DE EXPERIMENTAO

RATO
Ordem Rodentia Espcies: Rato marrom (Rattus norvegicus) Rato preto (Rattus rattus) Rato albino (Rattus morvegicus albinus) - pesquisas Linhagem Wistar: dados sobre curvas de crescimento, crnio, esqueleto e rgos. Linhagem Long-Evans (fmeas Wistar e machos da natureza de pelagem aguti) = nova linhagem plos pretos ou cinza. Dados: fisiologia da reproduo. Linhagem Sprague-Dawley: machos hbridos com plos pretos na cabea estendendo-sepelocorpo(ratosdecapuz),grandesevigorososcom fmeas albinas Wistar = descendentes intercruzados at prole totalmente branca, fortes, vigorosos e dceis. Cabea mais larga e corpo maior do outras variedades. Suscetibilidade a doenas e agressividade variadas.

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Pesquisa
Reprodutibilidade dos dados obtidos. Modelo padronizado Cuidados: mesma origem e/ou mesmo nome com tempo, mas acumulam alteraes genticas (mutaes)que diferenciam umas das outras. Uso pesquisas comportamentais, nutricionais, toxicologia, gerontologia, cardiologia, endocrino, odonto, imuno, parasito, reproduo, neurocincia.

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Pesquisa
Rato est entre os mamferos mais utilizados. Modelo para pesquisa comportamental. Tradicionalmente escolhido em pesquisas nutricionais, limitao: hbito da coprofagia.

Uso pesquisas comportamentais, nutricionais, toxicologia, gerontologia, cardiologia, endocrino, odonto, imuno, parasito, reproduo, neurocincia.

ANIMAIS DE EXPERIMENTAO Modelo para pesquisa comportamental. Caixa de Skinner: psicologia comportamental (causa-e-efeito de neurocincia). Skinner (1930) inventou a cmara de condicionamento operante: um rato pressionando uma alavanca obtinha uma recompensa (comida) ou punio (corrente eltrica).

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Me mal nutrida, filho hipertenso Estudo: a falta de protenas durante a gestao pode levar a doenas cardacas e renais na fase adulta.
Fotos: diferentes momentos do desenvolvimento de ratos observados durante o estudo - ao nascimento, aos 7 e 21 dias de vida. Ao alto, o rato cuja me recebeu uma dieta com 5% de protena durante a gestao e amamentao; embaixo, um animal de controle, cuja me recebeu uma dieta com 23% de protena.
Fonte: cienciahoje.uol.com.br/.../2006/4224a.jpg

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O bisfenol A (BPA), substncia controversa usada, entre outras coisas, no revestimento interno de garrafas de plstico e mamadeiras, est associado feminilizao de ratos.

A pesquisa, feita por cientistas da Universidade do Missouri, mostram que os machos de ratos, expostos enquanto fetos BPA, se comportam mais como fmeas, especialmente em suas capacidades para se orientar em seu entorno. Esta observao leva os cientistas a concluir que no homem este componente qumico poderia ter efeitos nefastos no desenvolvimento e nos traos cognitivos prprios de cada sexo, que so importantes para a reproduo.
Fonte: http://www.anovaordemmundial.com/2011/06/estudo-bpa-bisfenol-deixa-ratos.html Disruption of adult expression of sexually selected traits by developmental exposure to bisphenol A

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Seleo gentica
Animais com hipertenso arterial, epilepsia geneticamente transmitidas. Linhagens menos freqentes estabelecidas por seleo ou mutao ou ainda linhagens consanguneas:

ACI: anomalias congnitas urogenitais CAR, CAS: resistncia a cries dentrias SHR: rato espontaneamente hipertenso AA, ANA: aceitao, no aceitao de lcool Brattleboro: diabetes insipidus (ausncia de vasopressina) BB: diabetes espontnea Zucker: obesidade.

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Outbred
Heterogeneidade gentica. Evita-se acasalamento entre parentes.

Cruzamentos ao acaso entre descendentes de vrios cruzamentos diferentes

Inbred
Homozigose. Cruzamentos entre um nico casal de irmos em geraes sucessivas. Depois de 20 geraes sucessivas so obtidos descendentes homozigotos.

Linhagens: King Albino ou PA e Brown Norway (BN).

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Desenvolvimento ontogentico
gestao: 20 a 23 dias Estro ps-parto: 48 horas aps o parto (50% acasalamentos so bem sucedidos).

- Trs perodos da gestao: 1- pr-implantao (1 ao 5 dia de gestao) 2- Organognico (6 ao 15 dia gestacional) 3- Fetal (16 ao 21 dia, crescimento uterino)

- Dados: estudos toxicologia da reproduo, de efeitos de embriofetotoxicidade.

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- Tamanho varia de acordo com a linhagem

Wistar: 8 a 15 filhotes: nascem com +/- 5g, cegos, muito ativos e muito dependentes at o desmame. Nas duas primeiras semanas: SN em maturao e eixo hopotlamohipfase-adrenal est hiporresponsivo ao estresse. Interferncias externas sobre o comportamento maternal e a manipulao dos filhotes podem ocasionar alteraes permanentes quando adultos.
Modificaes nas condies ambientais, mudana de ninho durante troca de maravalha, manipulao indevida da me.

Exemplo alteraes comportamento: convvio com a prole artrtica, acarreta nas ratas lactantes ansiedade. Reduo no limiar de dor e distrbios de sono.

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Sexagem:
Comparao da distncia anogenital. Distncia em machos duas vezes maior que fmea. Papila genital do macho maior. Mamilos das fmeas visveis por +/- aps 1 semana. Testculos observados na bolsa escrotal +/- aps 3 semanas.

Cuidados:

* Usar luvas * Esfregar luvas na maravalha da caixa *Esfregar luvas na rao *Segue o procedimento com filhotes: pegar de forma rpida e suave.

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Desmame
Ocorre a substituio da suco mamria pela alimentao slida dos filhotes. Diminuio de prolactina nas mes (21 dia ps-natal). Nesse perodo: filhotes com 40 a 50g. Filhotes separados por sexo evitando acasalamento precoce.

ANIMAIS DE EXPERIMENTAO Idade da puberdade varia na espcies e varia em funo de fatores ambientais: nutrio, temperatura, umidade, fotoperiodicidade, convivncia entre ambos os sexos. Puberdade (hormnio liberador de gonadotrofinas): maturao espermtica e origem do ciclo estral na fmea. Puberdade: +/- 50 dias de idade. Acasalamento: Machos jovens: +/- 3 meses ou pesar +/- 300 a 450g. Fmeas: 90 dias de idade e 200 a 275g. Acasalamento durante o ano todo, sem sazonalidade. Ninhada pode diminuir nos meses de inverno, para no diminuir, recomenda-se o uso de luz artificial para manter +/- 14 horas de luz. Tempo de vida: 24 a 36 meses, dependendo da linhagem.

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Ciclo viglia-sono
Animais de hbitos noturnos. Viglia predomina noite e o sono durante o dia. Dorme 62% de dia e 33% noite. Atividades: comendo, caminhando, explorando o ambiente, interagindo com outros ratos, procriando e formando ninho.

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Caractersticas
Pares incisivos continuamente em crescimento com esmalte somente nas suas extremidades cortantes. Cinco dgitos em cada um dos quatro membros. Cauda longa (aprox. 85% do comprimento do corpo) = termorregulao. RN no tem mecanismos termorreguladores. Modelo para estudos de adaptao ao frio. Cauda tambm estabelece equilbrio e orientao do movimento. Ausncia de receptores do paladar, de tonsilas, de glndulas sudorparas e de vescula biliar. Existe um sistema biliar periportal composto por uma rede de canalculos e que se juntam em um ducto biliar comum. PresenadeglndulasdeHaderianentreosolhosesecreoporfirnica. Olfato bem desenvolvido. Viso pobre. Necessidade de dieta protica entre 20 a 27%.

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Caractersticas: Sistema digestrio

Esfago dirige-se desde uma pequena curvatura do estmago at uma prega no sulco limitante do estmago. Estmago: grande poro aglandular (1/3 da mucosa gstrica total), rica em clulas gstricas produtoras de histamina. E uma poro glandular com glndulas pilricas. Essas duas regies so separadas por uma prega limitante que o impede de vomitar. Apndice ileocecal ajuda na digesto da celulose. No possui vescula biliar. Modelo para testes de drogas antiulcerognicas devido facilidade de observao das leses da mucosa gstrica.

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Caractersticas: Sistema urinrio e genital

Modelo: avaliao tubular in vivo, devido presena de nfrons superficiais no crtex renal. Presena de plug uretral como caracterstica normal dos machos. A ausncia associada a problemas de sade.

Plug uretral: quimicamente similar secreo da vescula seminal.

Nas fmeas: plug copulatrio da vagina se forma 3 a 8 horas aps a cpula e permanece por +/- 24 horas. Forma-se da secreo das glndulas vesiculares do macho e encontra-se no trato reprodutivo da fmea, da vulva at a crvix.

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Caractersticas: reproduo
Machos: pnis, par de testculos, glndulas sexuais acessrias (ampola, vesculas seminais, prstata, glndulas bulbouretral, coagulatria e prepucial), um conjunto de ductos seminais (epiddimos e canais deferentes) que eliminam sptz e fluido seminal durante a ejaculao. Trnsito espermtico pelo epiddimo: 8 a 10 dias.

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Caractersticas: reproduo
Fmeas: vagina, par de ovrios e um conjunto de ductos sexuais: transporte dos ocitos, desenvolvimento dos embries em caso de fertilizao e a sada do feto durante o parto.

Seis pares de glndulas mamrias:3 na regio torcica, 1 na abdominal e 2 na inguinal.

Ovulao espontnea e o estro ocorrendo por perodo de 12 a 14 horas a cada 4 ou 5 dias (animais polistricos). Ativao do corpo lteo no espontnea e depende de um input neural da estimulao mecnica da crvix uterina. Estmulo: coito ou mimetizada laboratorialmente com basto de vidro (fase exibe mesmos mecanismos endcrinos da fase inicial de uma gestao normal e dura +/- 12 horas, atrasando o prximo ciclo estral).

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Caractersticas: reproduo
Fmeas: - Estgios do ciclo: identificados em esfregaos vaginais: exame citolgico.
Ciclo estral: 4 fases: proestro, estro, diestro I (metaestro) e diestro II. Ciclo estral rpido e regular, dispensa o monitoramento citolgico. Exceto quando so necessrias gestaes programadas. O sucesso do acasalamento pode ser confirmado pela observao do plug copulatrio na fmea ou pela identificao de sptz no esfregao vaginal, presente pelo menos 12 horas. Fase anestro: ovrio inativo em termos de amadurecimento folicular. Ocorre durante gestao ou aps encerramento da vida reprodutiva das fmeas.

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Sistema de acasalamento - Monogmico: preferido em pequenas colnias de animais consangneos.

Registros so melhores e ninhadas so mais homogneas. Desvantagem: manuteno de maior nmero de gaiolas e espao para a reproduo animal.

- Poligmico (harm): um macho e um nmero de fmeas (2 a 6).

Necessrio remoo das fmeas gestantes antes do parto, evitando a interferncia do macho nos filhotes, as perdas por superlotao e a mistura de ninhadas.

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Fatores que alteram a fertilidade e a reproduo Gentico:

Grande n de variaes interferem no desempenho reprodutivo entre diferentes sublinhagens e linhagens.

Ambiental:
Flutuaes de temperatura e valores de umidade relativa (no ultrapassar 2 C). Tipo de gaiola e tamanho. Tipo de material para forrao. Superlotao (provoca hipertrofia da glndula supra-renal e atrofia gonadal). Freqncia de limpeza. Fotoperiodicidade.

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Comportamento
Curiosos e dceis. Passveis de domesticao e treinamento. Agressivos quando ameaados. Machos brigam entre si mais do que as fmeas. Superlotao disputa por territrio. Mantm a pelagem limpa e com brilho por meio do seu comportamento de limpeza: secreo oleosa produzida pelas glndulas da pele distribuda por todo o corpo. Bocejo: evento fisiolgico = involuntrio desencadeado pela reduo da oxigenao do crebro. Ocorre forte inspirao e o oxignio impulsionado para dentro do organismo, reestabelecendo o nvel ideal.

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Manipulao e conteno fsica

Adapta-se facilmente ao calor da mo com a luva de ltex. Segura-se o animal na base de sua cauda com uma mo e em seguida: Outra mo, segura por cima do dorso e costelas, de forma que o polegar e os dedos indicador e mdio estejam atrs dos cotovelos, empurrando para frente. ou Dedos indicador e polegar posicionados abaixo do pescoo atrs da mandbula, puxando a pele do animal acima da regio das orelhas, contendo o movimento da cabea do rato. ou Camilla'smethod:colocaoanimalsobreumtecidoecobrecabeaetrax (1/3 do corpo). Com uma das mos pressiona o tecido sobre o dorso do animal.

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Cuidados essenciais
No segurar com muita fora ou fazer movimentos bruscos ou repentinos. Permita ao animal cheirar sua mo. No ficar com medo, nervosismo contagioso. No apertar o trax ou ao redor da garganta do rato. No segurar um rato maior pela ponta da cauda e no percorrer uma grande distncia nessa posio. Ratos devem ser manipulados pela base da cauda e no pela extremidade distal, pois podem girar, escalar sua prpria cauda e morder. Ter a certeza que todos os animais do grupo experimental sejam manipulados na mesma freqncia que o grupo controle, assegura a obteno de resultado em condies semelhantes de estresse.