CATALISIS ENZIMATICA

Una de las principales caractersticas de las enzimas es su gran capacidad cataltica, aumentando la velocidad de las reacciones por factores que van de 10 x 10 7 a 10 x 10 12, y este lmite est dado por la velocidad de difusin de las macromolculas en disolucin

TEORIA DEL ESTADO DE TRANSICIN

La Teora del estado de transicin permite un tratamiento simple de las reacciones qumicas que hace posible comprender mejor la reactividad y la cintica de las reacciones catalizadas Esta teora fue propuesta por Wigner y Pfizer y desarrollada posteriormente por Eyring En esta Teora se ignora el proceso por el cual las molculas colisionan y tiene en cuenta solamente los reactivos en el estado basal y las especies inestables que se forman en el camino de reaccin

Presupuestos de la Teora
Al efectuarse la reaccin debe haber un desprendimiento de energa, G debe ser negativo. Es decir el potencial qumico de los reactivos debe ser mayor que el de los productos Para que los reactivos acten entre s debe formarse un complejo activado con mayor energa que la que corresponde a los reactantes en su estado basal En el estado de transicin , que corresponde al mximo de energa que alcanza el sistema, se estn rompiendo enlaces y formando otros nuevos. Es un estado muy inestable en el camino de reaccin La diferencia de energa entre el estado de transicin y los reactantes en su estado basal se denomina energa de activacin

Diagrama de coordenada de reaccin

En el diagrama de coordenada de reaccin , los picos corresponden a los estados de transicin ( formas inestables), donde los enlaces se estn rompiendo (se gasta energa) y formando (pierden energa) y los valles a los intermedios que se forman y en los cuales los enlaces estn ya formados.

Para derivar la velocidad de reaccin por un mtodo sencillo se considera que el estado de transicin y el estado basal estn en equilibrio termodinmico, de modo que la concentracin del estado de transicin se puede calcular a partir de la diferencia de energa de Gibbs
Para una reaccin unimolecular, si (X) es la concentracin del reactante y (X) la del estado de transicin , y G la diferencia de energa entre ambos (X) = (X) e G/RT La frecuencia a la cual se descompone el estado de transicin es igual a la frecuencia de vibracin del enlace que se rompe. Igualando la energa de un oscilador armnico E= h con E= kT energa promedio por molcula, tenemos

= kT/ h

k es la cte de Boltzman h es la cte de Plank

La velocidad de descomposicin ser d(X)/dT = (X)

d(X)/dt =kT/h (X) e G/RT

Luego la constante de velocidad para la reaccin de 1er orden es: k = kT/h e G/RT . y como G = H - TS

k= kT/h e

S/R

. e - H /RT

ec. de Eyring

Un tratamiento ms riguroso incluye el empleo de un factor , coeficiente de correlacin, que es la igual a la fraccin del estado de transicin que se transforman en productos. En las reacciones simples es aproximadamente 1, en reacciones complejas puede ser muy diferente a 1.

Aplicaciones del estado de transicin (TS)

Relaciona la velocidad de una reaccin con la energa de Gibbs de activacin (G), diferencia de la energa de Gibbs entre el TS y el estado basal. Permite calcular y comparar las reactividades de pares de sustrato O considerar las velocidades de una reaccin en condiciones diferentes En algunos casos se pueden realizar clculos cuantitativos, pero generalmente se emplea para estimar cualitativamente la reactividad

Relacin entre la ecuacin experimental de Arrhenius y la Teora del estado de transicin

De acuerdo a la ecuacin de Arrhenius , basada en el comportamiento experimental ln k = ln A Ea/RT Y la ecuacin de Eyring, transformada a la forma logartmica ln k = ln kB + ln T ln h - H/RT + S/R Y derivando respecto a la temperatura ambas ecuaciones, como hB, kB son constantes, y A y Ea, se consideran,independientes de T tendremos d lnk/dT = Ea/RT2 y d lnk/dT = 1/T + H/RT2 Ea/RT2 = 1/T + H/RT2 y Ea = H + RT Esta ecuacin permite calcular el valor de la entalpa de activacin a partir de la Energa de activacin que es un valor basado en datos experimentales

Clculo de la entalpa de activacin a partir de valores experimentales

Llevando el valor de H calculado en base a la ecuacin anterior H = Ea RT a la ecuacin de Eyring k = k BT/h e Ea/RT e e S/R y comparando con la ecuacin de Arrhenius, vemos que A= k BT/h e e S/R y S = R ( ln A h /kT - 1) La entalpia y la entropa de activacin proveen informacin importante sobre el estado de transicin, y en consecuencia sobre el mecanismo de reaccin

Postulado de Hammond
Si en el curso de una reaccin se forma un intermedio inestable, la estructura del estado de transicin se parecer a la de ese intermedio La aplicacin de este postulado permite tener una idea del estado de estado de transicin y as predecir los tipos de estabilizacin que requerir. Si el producto o el sustrato es muy inestable, es de esperar que el estado de transicin sea parecido a l. Se aplica a reacciones unimoleculares

Mecanismo de la accion enzimtica

En la reaccin catalizada por una enzima se debe formar al menos un intermediario de reaccin , o a veces varios , en las coordenadas de reaccin cada intermedio corresponde a un valle La gran capacidad cataltica de las enzimas comparada con los catalizadores no biolgicas ha sido siempre un tema en continua discusin . Se han propuesto varias explicaciones que por si solas no explican la gran capacidad cataltica de las enzimas Est claro que un catalizador ( y por lo tanto la enzima) reduce la barrera de la energa de activacin, y en consecuencia aumenta la fraccin de molculas que pueden alcanzar el estado de transicin.

Consideraciones energticas. La presencia de un catalizador no afecta el equilibrio, las magnitudes termodinmicas de reaccin no varan Como G = H -T S, Si se tiene un valor de H muy positivo (necesidad de gran cantidad de energa) o una conformacin poco probable del estado de transicin, S, llevarn a un valor de la energa libre de activacin muy elevado y en consecuencia pocas molculas alcanzarn ese estado ( reaccin lenta). Con frecuencia las molculas deben pasar por un estado de tensin que requiere mucha energa. En muchos casos el catalizador puede reducir esta necesidad de energa forzando el paso a travs de intermediarios. En la grfica de coordenada de reaccin se sustituye la barrera de energa inicial por dos barreras, o ms de energa ms bajas.

Factores que participan en la gran efectividad de una enzima

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Catlisis intramolecular de la aspirina

La hidrlisis de la aspirina fue uno de los primeros casos estudiados de catlisis intramolecular Estudios realizados indican que la forma aninica del grupo carboxilo(presente a una concentracin importante a pH bajo ) puede actuar mediante un mecanismo de catlisis bsica general, y en esas condiciones,se produce un aumento importante de la velocidad de reaccin

Consideraciones entrpicas
La concentracin efectiva no es una concentracin real. La velocidad del sustrato en la reaccin intramolecular se ha multiplicado por un factor, como si la concentracin del sustrato hubiera sido aumentada por el mismo factor Las enzimas actan produciendo una ganancia de entropa de la reaccin , es decir de la S de la reaccin El paso de E y S al complejo ES est entrpicamente desfavorecido pero en el paso de ES a complejo ES , activado se produce con aumento de entropa como es una reaccin intramolecular, y al considerar ambos pasos hay ganancia de entropa

Orientacin orbital
Para que se produzca una reaccin los tomos involucrados en la ruptura y formacin de enlaces deben estar en una orientacin adecuada, ya que se debe producir un solapamiento de los orbitales involucrados. La formacin del complejo enzima-sustrato favorece esta orientacin correcta, sin embargo se ha demostrado que este efecto no es tan importante. Una distorsin de 10 de la orientacin ms favorable significa una energa extra de solo 11 kJ/mol y si es de 5 %, 2,8 kJ /mol

Catlisis cido-bsica
Catlisis cida Muchas reacciones son catalizadas por la transferencia de un protn (H3O+) al sustrato. Los protones en disolucin provienen fundamentalmente de la disolucin de cidos fuertes. Es la catlisis aida especfica Sin embargo otras reacciones se pueden producir por protones que provienen tanto del in hidronio como de cidos dbiles. Se denomina entonces catlisis cida general. Es esta ltima la que tiene importancia en el mecanismo de muchas enzimas

Catlisis bsica
En la misma forma que se produce la catlisis cida, se puede tener la catlisis bsica especfica o la general. En la catlisis especfica hay transferencia del protn del sustrato hacia el in OH En la catlisis general, tanto el OH- como las bases dbiles pueden aceptar el protn

Constantes de velocidad observadas en las reacciones catalizadas

Para estudiar la catlisis se miden las velocidades de reaccin frente a catalizadores diferentes, y para un mismo catalizador a distintas concentraciones, calculndose as la k observada Al graficar la kobs vs la concentracin del catalizador, se obtendrn rectas cuya pendiente es la constante de velocidad para un sistema dado siendo k obs= ko + k cat (catal)n La ordenada en el origen es ko, que es la constante de velocidad para la reacin no catalizada, la pendiente es k cat

Eficiencia de la catlisis cido-bsica Ecuaciones de Bronsted

Se ha demostrado experimentalmente que la eficiencia de la catlisis bsica general depende de la fuerza bsica del catalizador. Bronsted propuso la siguiente ecuacin k = G ( 1/ Ka) , siendo Ka la cte. de disociacin del cido conjugado a la base considerada Tomando logaritmos queda log k = log G + pKa siendo G y constantes para el sistema estudiado mide la sensibilidad de la reaccin al pKa del cido

Estado de ionizacin del catalizador

En general un cido ser mejor catalizador cuando mayor sea la fuerza cida (menor pKa) y una base ser mejor catalizador cuanto mayor sea su fuerza bsica ( mayor pKa y menor pKb) Sin embargo un factor determinante en la eficiencia de la catlisis cido-bsica es si el catalizador est en el estado de ionizacin correcto en las condiciones en que se da la reaccin Un cido debe estar en la forma cida y una base en la forma bsica. Por ejemplo: un cido de pK 5 es mejor catalizador bsico que uno de pKa 7, sin embargo a pH 7, el segundo tendr 50 % en la forma cida y el primero slo 5 %, el resto est ionizado y ser menos efectivo

Catlisis covalente
En este tipo de catlisis el catalizador reacciona con el sustrato, unindose a l mediante un enlace covalente, para dar un compuesto intermediario que luego se descompone dando el o los productos y regenerndose la enzima. A veces el compuesto formado experimenta varias transformaciones antes de separarse el catalizador del sustrato

Tipos de catlisis covalente

Puede ser: catlisis nucleoflica o electroflica En este tipo de catlisis se forma un enlace covalente, es decir se comparte un par de electrones, si el catalizador es el aporta el par de electrones se denomina catlisis nucleoflica, y si el catlizador es el que acepta el par electrnico suministrado por el sustrato tenemos la catlisis electroflica La catlisis covalente es muy comn en los mecanismos de accin de las enzimas

Catlisis nucleoflica
El catalizador es un nuclefilo: tomo rico en electrones que ataca a otro tomo pobre en electrones (electrfilo)
El nuclefilo posee un par de electrones no compartidos que, al formar el enlace covalente comparte con el electrfilo N : + E N:E P + N:

Un catalizador nucleoflico eficaz es el que es buen nuclefilo (reacciona fcilmente con el Sustrato y se puede liberar con relativa facilidad

Estas dos caractersticas no se suelen observar simultneamente

Reactividad de los nuclefilos

Las reacciones donde participa un electrfilo pueden ser: La reactividad de un nuclefilo depende marcadamente de la naturaleza de los reactivos Ataque a un centro duro Ataque a un centro blando

Centros duros_Los grupos carbonilo, fosforilo, sulfurilo y otros se pueden considerar centros duros En este caso la valencia del tomo atacado(C o P) mantiene su valencia normal en el estado de transicin Estn en este grupo el ataque de un N: a una amida, ester o ester fosfrico Se observa una diferencia de reactividad en distintos grupos, por ej las aminas y tiolatos son ms reactivos que los oxianiones Cuando existe un tomo electronegativo cerca del nuclefilo, aumenta la reactividad del mismo (Efecto alfa)

Basicidad del nuclefilo

La reactividad de un nuclefilo est relacionada a su fuerza bsica (pKb) Cuanto mayor es su basicidad, mayor pKa, ser mejor nuclefilo Al estudiar un nuclefilo se puede emplear la ecuacin de Bronsted,para una base, pero la constante puede tener valores mayores a 1.0 Adems se mantiene la linealidad solo hasta ciertas concentraciones del catalizador

Facilidad de expulsin
La facilidad de expulsin depende de: - valor del pKa

- estado de protonacin
A menor fuerza bsica mayor facilidad de expulsin

Centros suaves:
En estos casos, el ataque del nuclefilo produce un estado de transicin donde el tomo atacado acta con valencia mayor a la normal Por ejemplo cuando un nuclefilo acta sobre un carbono saturado, en el estado de transicin el C est unido a 5 grupos. Grupos grandes y polarizables como el ioduro o sulfuro (ligandos suaves) reaccionan ms facilmente que los tomos pequeos y poco polarizables como el oxgeno o nitrgeno (ligandos duros) Los grupos con basicidad menor son ms fcilmente expulsados que los tienen mayor fuerza bsica

Grupos nulefilos en macromolculas biolgicas

Los principales grupos que actuan como nuclefilos provienen de restos de aminocidos Los intermediarios que se forman pueden ser acilderivados, fosforilderivados, adenilderivados o bases de Schiff, segn el nuclefilo y el tomo al cual se une

Grupos nuclefilos en enzimas

Nuclefilo Intermediario Enzimas serinaproteasas fosfatasas alcal. -OHde la serina Acilenzima fosforilenzima

-OH de treonina

acilenzima

amidasas

-SH de cistena acilenzima tiolproteasas,G3Pdeshidrogen. -CO2 de aspartato fosforilenzima -NH2 de lisina imidazol de la base de Schiff fosforilenzima ATPasas (K+Na+, Ca2+) enzimas de piridoxal, aldolasas,transaldolasas fosfoglicerato mutasa,

histidina
-OH de la tirosina adenilenzima

succinilCoAsintetasa
glutamina sintetasa

Catlisis electroflica
El catalizador es un electrfilo es decir un tomo que tiene dficit de electrones E + N: P + E Un catalizador eficaz es aquel que es buen electrfilo y tambin es fcil de liberar Varias coenzimas actan como catalizadores electroflicos

Catlisis por fosfato de piridoxal

El fosfato de piridoxal es una coenzima formada por un anillo de piridina con dos grupos metilo, uno de ellos unido e un fosfato, adems un grupo fenol y otro aldehido Es necesario para actividad de numerosas enzimas: transaminasas, descarboxilasas, racemasas,etc importantes en el metabolismo de aminocidos

El fosfato de piridoxal se condensa con los aminocidos para dar bases de Schiff El anillo de piridina acta como un sumidero de electrones,estabilizando una carga negativa Cada uno de los grupos alrededor del C quiral del aminocido puede ser separado formando un anin que es estabilizado por la base de Schiff formada con el anillo de la piridina Se puede producir: 1. separacin del H 2. alfa descarboxilacin

Separacin del hidrgeno alfa

El protn removido puede volverse a unir a. racemizacin el protn vuelve a unirse al C pero en una posicin espacialmente diferente b. transaminacin, la adicin del protn al carbonilo, produce la base de Schiff de una cetocido y piridoxamina. Al hidrolizarse se libera el ceetocido y la piridoxamina. Este proceso puede revertirse al reaccionar la piridoxamina con un cetocido diferente

Descarboxilacin
El anillo de la piridina al actuar como sumidero de electrones, favorece la descarboxilacin del grupo carboxilo, el resto adiciona un protn al carbono quiral y luego por hidrlisis da amina y piridoxal

Catlisis electroflica por pirofosfato de tiamina

El fosfato de tiamina es una coenzima que se une covalentemente al sustrato estabilizando una carga negativa

La carga positiva en el nitrgeno del anillo, promrgaoviendo la ionizacin del C 2 que al convertirse en carboin acta como un potente nuclefilo El tomo de nitrgeno provoca estabilizacin de cargas deslocalizando una carga negativa en el compuesto formado entre la tiamina y varios sustratos
Esta coenzima est fuertemente unida a las enzimas

Catlisis por iones

El papel de distintos iones es muy importante en muchos ejemplos de catlisis enzimtica. Los iones que participan en estas reacciones pueden estar - unidos a la enzima por enlaces de o coordinacin - disueltos en el medio en que se realiza la reaccin

Ejemplos del papel de los iones metlicos en enzimas

Enzimas Histidina desaminasa Kinasas, Liasas, Papel del in Enmascarar un nuclefilo Activacin de un electrfilo Activacin de un nuclefilo El metal acta como nuclefilo Retiro de electrones El in junta y orienta a los ligandos

Piruvato descarboxilasa
Anhidrasa carbnica Enzimas de cobalamina Carboxipeptidasa Piruvato carboxilasa Piruvato kinasa

Ferroprotenas no hmicas Donacin de electrones

Fosfotransferasa

Efecto de fatiga