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ENZIMAS: Naturaleza Qumica- Propiedades GeneralesNomenclatura y Clasificacion- Coenzimas y Grupos Prostticos. Actividad Enzimtica: Unidad de enzima- Actividad especficaActividad molecular. Complejo ES- Ecuacin de Michaelis Menten y Ecuacin de Lineweaver Burk- Significado e importancia de Km y KcatalticaInhibicin competitiva y no Competitiva. Factores que afectan la actividad enzimatica: [Enzima]- pH T[S] Regulacin Enzimtica: Enzimas alostricas (propiedades y cintica)- Zimgenos- Modulacin Covalente Isoenzimas: Propiedades e importancia.
ENZIMAS
Transformacin de nutrientes simples en molculas complejas y viceversa Extraccin de energa desde combustibles por oxidacin
subclase
1
subsubclase
1
n de orden
27
1-OXIDORREDUCTASAS
Alcohol deshidrogenasa (EC 1.1.1.1)
2. TRANSFERASAS
3. HIDROLASAS
Carboxipeptidasa A (EC 3.4.17.1)
4. LIASAS
Piruvato descarboxilasa (EC 4.1.1.1)
5. ISOMERASAS
Fumarasa malato isomerasa (EC 5.2.1.1)
6. LIGASAS
Piruvato carboxilasa
(EC 6.4.1.1)
VITAMINAS-COENZIMAS
Niacina NAD, NADP Ion Hidruro (:H -)
Electrones Aldehdos
Grupos acilo Grupos monocarbonados
Acido pantotnico
Acido flico
TH4 P-piridoxal
Piridoxina (B6)
GPT
AAC-DESC
Acido lipoico
Lipoamida
PDH
Peroxidasa
Anhidrasa carbnica Hexoquinasa Glucosa-6-fosfatasa Piruvato quinasa Piruvato quinasa K+ Mg++ Zn++
ACTIVIDAD ENZIMATICA
Unidades Internacionales Cantidad de enzima que cataliza la transformacin de 1 umol de S por minuto
1 katal = 6 x 107 U.I.E.
mmol de S transformados min
U.I.E. =
Actividad Especfica Actividad enzimtica por cada miligramo de protena U.I.E. presente en la muestra Actividad especfica =
mgr de protena
Actividad Molecular Numero de Recambio Molculas de S convertibles en P por unidad de tiempo y por molcula de enzima mmol de S transformados/min
Actividad molecular =
Mol de enzima
ACTIVIDAD ESPECIFICA
Prot.Tot:
+ +
Prot.Tot:
Prot.Tot:
+
D
Actividad = especfica
U.I.E. =
Activ. Enzimtica
mgr de protena
Prot. totales
Prot.Tot:
Modelo inducido
Sitio activo
[S]
Actividad enzimtica
pH
Actividad enzimtica
T. ptima
T(C)
ISOENZIMAS
Diferentes formas moleculares de una
misma enzima. Son sintetizadas por genes diferentes
Dos isoenzimas presentan en general diferentes valores de Km y Vmx. Se encuentran ubicadas en diferentes compartimentos de la clula en diferentes tejidos. Son utilizadas en clnica para determinar el origen del tejido daado
Glucoquinasa
Hexoquinasa
Km. hexq
Km. glucq
[glucosa mmol/l
REACCION CATALIZADA
(*)
G* reaccin no catalizada
(*)
DG* cat
ES
EP
P
Progreso de la reaccin
E + S
k1 k-1
ES
k2
E + P
k1
k2
E + S
k-1
ES
E + P
V. de Descomp.de ES = k-1 [ ES ] + k2 [ ES ]
ESTADO ESTACIONARIO
k1 ( [Et ] [ ES ] ) [S] v o= k2[ES] Km = (k-1 + k2)/k1 Vmx = k2 [Et] = k-1 [ ES ] + k2 [ ES ]
[S]
SIGNIFICADO DE Km
k1
E + S k-1 ES
k2
E + P Km = (k-1 + k2)/k1
k2<<< k-1
Km = k-1 /k1
Km =Ks
SIGNIFICADO DE Vmx
E + S k1 k-1 ES k2 E + P
E + S
k1 k-1
ES
k2
k-2
EP
k3
Vmx = k2 [Et]
Vmx = k3 [Et]
Vmx = kcat [Et]
kcat
CUANDO [S] <<<< Km La velocidad depende de la concentracin de enzima total y de la concentracin de sustrato
kcat/Km es una constante de velocidad y es el mejor parmetro para conocer la eficiencia cataltica de una enzima
Pendiente= Km/Vmx
INHIBICION ENZIMATICA
COMPETITIVA
INHIBICION REVERSIBLE
NO COMPETITIVA ACOMPETITIVA
INHIBICION IRREVERSIBLE
DIFP Penicilina
Quimotripsina Transpeptidasa
INHIBICION REVERSIBLE
INHIBICION COMPETITIVA E + S
+ I
ES
E + P
E
EI Ki = [E] [I] [EI]
KM ap = Km(1 + [I]/Ki)
Succinato + FADH2
Succinato deshidrogenasa
Fumarato + FAD+
COO(CH2)2 COOSuccinato
COOCH2
COOMalonato
Grfica de M-M
Km
Km ap
[S]
-1/Km
-1/Kmap
1/[S]
INHIBICION NO COMPETITIVA
E + S
+
I
ES
+
I
E + P
I
E
ESI
EI + S
E I
Grfica de M-M
Km 1/v
[S]
Grfica de L-B
Vmax.s/I Vmx ap.= Km(1 + [I]/Ki)
-1/Km
1/[S]
INHIBICION ACOMPETITIVA
E + S ES
+ I
E + P
E E
ESI
Inhibicin acompetitiva
1/ Vmx
C/ Inhibidor
1/Vmax. Inh.
S/ Inhibidor
1/Vmax. s/Inh.
-1/Km c/inh
-1/Km s/inh
1/[S]
Efecto s/Vmx
Ninguno
Efecto s/Km
Aumenta
COMPETITIVA
NO COMPETITIVA
Pendiente = Km / Vmx
INHIBICION IRREVERSIBLE
. Por unin covalente del inhibidor
- Acetilcolinesterasa - Quimotripsina
Enzima inactivada
Diisopropilfluorfosfato (DFP)
INHIBICION IRREVERSIBLE
. Inhibidor suicida
Se une al sitio activo de la enzima y sta cataliza la modificacin del inhibidor a otro compuesto que permanece unido a la enzima.
El ALOPURINOL es un inhibidor suicida que acta sobre la enzima xantina oxidasa (degradacin de purinas). Se forma el oxopurinol el cual queda unido a la enzima.
ENZIMAS ALOSTERICAS
REGULACION COVALENTE
ENZIMAS INDUCIBLES
ENZIMAS ALOSTERICAS
Enzima 1 Enzima 2 Enzima 3 Enzima 4
Enzima 1
ENZIMA ALOSTERICA
MODULADORES POSITIVOS
MODULADORES NEGATIVOS
Aspartato (mM)
Biosntesis de nucle tidos pirimidnicos Glutamato Deshidrogenasa Degradacin de aminocidos Citrato sintasa, isocitrato y a-cetoglutarato deshidrogenasas Ciclo de Krebs
Dominio Zinc
Dominio alostrico
Dominio carbamil fosfato
Enzima
Fosforilacion
Enzima Enzima
Fosfoadenilacion
ADP-Ribosilacin
Fosforilasa b
(menos activa)
Fosforilasa quinasa
ATP ADP
2 Pi
Fosforilasa fosfatasa
2 H2O
P -O-CH2
CH2- O- P
Fosforilasa a
ZIMOGENOS
Las enzimas digestivas: pepsingeno y quimotripsingeno se convierten en las enzimas activas pepsina y tripsina. Suele ocurrir una activacin secuencial producindose una cascada de activaciones. Ej. Coagulacin sangunea.