La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una

tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el fondo.

El uso del papel como medio de cromatografa se suele considerar como una tpica particin de sistema, donde la fase estacionaria es el agua, en poder de adsorcin de las molculas de celulosa, que a su vez se mantienen en una posicin fija por la estructura fibrosa del papel. Ahora es realidad, sin embargo, que la adsorcin de los componentes de la fase mvil y de solutos, y los efectos de intercambio de iones, tambin desempean una parte, y que el rol del papel no es simplemente la de un soporte inerte. Tcnica de separacin en la cual, los componentes de la muestra, se distribuyen entre dos fases de diferente naturaleza, como consecuencia de la variacin de velocidad que se establece al ser arrastrados por una fase mvil, lquida o gaseosa, a travs de una fase estacionaria, slida o lquida.

La mayora de la cromatografa de papel se ha llevado a cabo sobre papel de filtro estndar de material, sin embargo todava hay disponibles una serie de papeles de cromatografa. Pura celulosa. Carga de gel de slice.

De intercambio inico la celulosa. Cargados de resina. Estos se fabrican de papel a una alta especificacin con porosidad controlada, espesor y caracterstica esteras y son bajos en contenido de metal.

Diferenciacin de clorofilas

Amplitud de ondas

La mxima altura (h) alcanzada por el disolvente en su avance, se denomina frente del disolvente, y sea dA la distancia recorrida por la sustancia A. Se define Rf como el cociente entre la distancia recorrida por una sustancia desde el origen (d) y la distancia del origen al frente del disolvente (h). Para la sustancia A:

RfA = dA/h

Clnicos y bioqumicos. separacin de los aminocidos y pptidos se llev a cabo con regularidad para ayudar en la investigacin de las estructuras de las protenas. examen rutinario de orina y otros lquidos corporales de los aminocidos y azcares (esto es ms importante, ya que pueden ser utilizados para el diagnstico de una serie de patologas con el mapa de la tcnica estndar). separacin de las bases de purina y de los nucletidos en el examen de los cidos nucleicos. separacin de los esteroides.

Analtica general. Aplicaciones generales analticamente incluye anlisis de polmeros, deteccin y estimacin de metales en slidos y especmenes geolgicos, investigacin de materiales fenolicos en plantas extradas, separacin de alcaloides y separacin de componentes radio isotpicos.

FUNDAMENTO: La separacin de mezclas de molculas mediante la cromatografa de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases. En general, una cromatografa se realiza permitiendo que la mezcla de molculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase mvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de sta para "lavar" (elur) a las molculas en la muestra. Debido a que las distintas molculas en la muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase mvil "lavar" a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la fase mvil sern eludos ms rpido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria. PRINCIPIO DE REPARTO ENTRE DOS FASES:

Es especialmente til cuando se quiere determinar el nmero de componentes de una mezcla o identificar los compuestos existentes en una mezcla.

En la cromatografa de capa fina, un adsorbente est depositado formando una delgada capa sobre una placa de vidrio, papel de aluminio u otros materiales, por la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o ms sustancias que se pretenden separar o identificar.

El disolvente asciende entonces por capilaridad a lo largo de la placa, arrastrando a los compuestos a diferentes velocidades, segn el grado de adsorcin de stos producindose as su separacin.

Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina. -ter de petrleo -tolueno -dietil-ter, t-butil-ter -diclorometano -acetato de etilo -n-pentano, n-hexano -ciclohexano -tetracloruro de carbono -ter dietlico -cloroformo -acetona -iso-propanol -etanol -metanol -cido actico

ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas
Para la seleccin del adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamao de partcula a. Dimetro b. rea Superficial c) Homogeneidad d) Pureza

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIN POR CROMATOGRAFA DE CAPA FINA.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase estacionaria. b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros mtodos cromatografca (en columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que sea un mtodo adecuado para fines analticos.

La tcnica cromatografca con un enfoque al rea clnica nos sirve para identificar bacterias mediante la comparacin obtenida del Cromato grama obtenido con un patrn predispuesto, para identificar distintos tipos de: aminocidos, protenas, nucletidos, hemoglobina, esteroides etc.

Identificacin de Nucletidos

Identificacin de protenas