Morfologia e Fisiologia de Micro-organismos - PPGBBM Mestranda: Lorena Mendes Araujo

FERMENTAO

Mecanismo anaerbio de produo de energia que no envolve cadeia respiratria ou citocromos.

Obteno de ATP na ausncia de O2

GLICLISE

Glicose:
principal combustvel;
posio central no metabolismo.

Vrios destinos da glicose - oxidao a um composto de 3 carbonos (Piruvato) atravs da gliclise.

GLICLISE

Glicose degradada em um srie de reaes catalisadas por enzimas para liberar 2 molculas de piruvato.

Glicose (6 C) 2 mol de piruvato (3C) numa seqncia de 10

passos.
5 primeiras = fase preparatria ( perda de 2 ATP)
5 ltimas = fase de pagamento ( ganho de 4 ATP e 2 NADH)

Saldo (+) 2 ATP e 2 NADH Produto final 2 molculas de Piruvato

O Piruvato pode seguir 3 rotas metablicas:

organismos aerbicos respirao aerbica

Piruvato oxidado, perdendo CO2; Acetil CoA - ciclo do cido ctrico - ento totalmente

oxidado a CO2; Os eltrons originados so passados para o O2 - cadeia transportadora formando H2O. A energia liberada nas reaes de transferncia de eltrons permite a sntese de ATP nas mitocndrias.

Os organismos anaerbicos: possuem mais 2 rotas (fermentao)

Reduo do piruvato a lactato atravs da fermentao do

cido ltico. Metabolismo do piruvato, tendo como produto o etanol (fermentao alcolica)

Glicose
Gliclise cido Pirvico Etanol AcetilCoaA Ciclo de Krebs cido ltico

Cadeia Respiratria

Fosforilao Oxidativa

Fermentao

Respirao Aerbica

FERMENTAO

Transformao de uma substncia em outra, produzida a partir de microorganismos; Processo de obteno de energia utilizado por algumas bactrias e outros organismos; Quebra da glicose (ou outros substratos como o amido) em piruvato, que depois transformado em algum outro produto (lcool etlico, lactato, outros).

Este tipo de obteno de energia no necessita do O2 como aceptor final de eltrons (respirao anaerbica);
18x menos eficiente (energia) gerando 2 ATPs por molcula de glicose Efeito Pasteur

Exemplo de fermentao:
Transformao dos acares das plantas em lcool

- fabricao da cerveja, massa de po, entre outros;

Msculos - atividade fisica intensa e na ausncia de

oxigenio, com a formao de lactato ;

Modificar um material cuja modificao seria difcil

ou muito cara convencionais;

se

por

mtodos

qumicos

Histrico:

Habitantes das cavernas - carne envelhecida tem sabor mais agradvel que a carne fresca;

Vinho, cerveja, e po so to velhos quanto a agricultura. Pes foram encontrados nas pirmides egpcias; Queijo, que envolve a fermentao de leite ou creme outra comida muito antiga, sua fabricao na China e no Japo conhecida h milhares de anos; O valor medicinal de produtos fermentados conhecido h muito tempo Chineses usavam coalho de feijo-soja mofado para curar infeces de pele (3.000 anos atrs); Os ndios da America Central tratavam feridas infetadas com fungos.

A qumica das fermentaes uma cincia nova, em suas fases mais iniciais.
a base de processos industriais que convertem matrias-primas

(gros, acares, e subprodutos industriais) em produtos sintticos; Cepas cuidadosamente selecionadas de mofos, leveduras e bactrias, e so usadas.

1 indstrias a utilizarem tecnologia de fermentao foram as fbricas de cerveja final do sculo XIX e incio do sculo XX que essa tecnologia usada na indstria de bebidas e alimentos, como na indstria qumica; Na I Guerra Mundial as necessidades de acetona (na produo de explosivos) estimularam a pesquisa no potencial da tecnologia de fermentao;

Descoberta casual: melo embolorado (Penicillium) produzia 10x mais penicilina que o bolor de Fleming cultivado em meio slido. Outros antibiticos apareceram rapidamente. Importante na indstria farmacutica. A cada ano novos produtos so incorporados lista de produtos derivados da fermentao. Riboflavina(B2); Cianocobalamina(B12); cido ascrbico (Vit C);

cido ctrico - usado em limpadores de metal e como um preservativo e agente de sabor em alimentos
fermentao de melado com o mofo Aspergillus

niger.

Terramicina - raes animais para acelerar o crescimento dos animais e os proteger de doenas.

BIOTECONOLOGIA

Aplicao em grande escala dos avanos cientficos e tecnolgicos, a partir de organismos vivos (clulas e/ou molculas) para produo racionalizada de substncias, que resultam em produtos comercializveis. A biotecnologia encontra muitas aplicaes importantes em:
Indstria (qumica, petroqumica, alimentos, farmacutica) Agricultura/Pecuria Sade Preservao do meio ambiente

Crescimento a partir da dcada de 70 tecnologia do DNA recombinante.

BIOPROCESSOS

Compreendem um conjunto de operaes que incluem:

tratamento da matria prima; preparo dos meios de propagao e produo; esterilizao e a transformao do substrato em produto(s); processos de produo; processos de separao e purificao de produto(s).

Bioprocessos x Processos qumicos - natureza dos catalisadores utilizados em suas reaes. So conduzidos:
microrganismos; clulas animais ou vegetais; enzimas.

BIOPROCESSOS CATALISADOS POR ENZIMAS

ENZIMA

Protena sintetizada na clula viva que catalisa uma reao termodinamicamente possvel.
Ocorrncia universal nos materiais biolgicos. So hidrossolveis. Importncia nas reas: farmacologia, tecnologia de alimentos, toxicologia, medicina, engenharia qumica, biotecnologia, etc.

Origens:

Humana : pepsina (estmago), amilases (saliva), proteases, amilases, lipases (pncreas), renina (estmago de ruminantes); Vegetal: papaina (mamo), bromlina (abacaxi), ficina (figo); Microbianas( bactrias, leveduras, fungos ). Presena indesejvel: rancificao, etc. escurecimento de vegetais;

Classificao das enzimas:

OXIDO-REDUTASES: catalisam as reaes de xido-reduo.

Ex: desidrogenases, oxidases, peroxidades.

HIDROLASES: catalisam as reaes de hidrlise. TRANSFERASES: catalisam a transferncia de grupos.

Ex transaminases quinases, transacetilases.

ISOMERASES: catalisam diferentes tipos de isomerisao. LIGASES: catalisam reaes que unem duas molculas conjugadamente com o rompimento de uma ligao pirofosfrica. LIASES : catalisam reversivelmente a remoo de grupos do substrato no hidroliticamente.

Vantagens

Baixo consumo de energia Enzimas com alto grau de pureza Pequena produo de produtos colaterais (especificidade) Aproveitamento quase total da matria-prima Reaes de fcil controle

Desvantagens
Dificuldade de reutilizao de algumas enzimas Uso restringido de algumas enzimas pela necessidade de co-

fator Reaes susceptveis ao de substncias inibidoras

Substrato

Matrias-primas so utilizadas como fonte(s) de substrato(s) e outros nutrientes;

As matrias-primas de bioconverses podem ser agrupadas em funo da estrutura e da complexidade molecular dos substratos;
um dos componentes mais relevantes nos custos de produo; Nutrientes adequados gerao do produto de interesse est relacionada atividade metablica desenvolvida pelos microrganismos. As condies que permitem a produo mxima de massa molecular no so necessariamente as mesmas que permitem a mxima produo de um determinado produto.

Substratos solveis - facilmente extrados

produto. Ex: sacarose, glicose, frutose e lactose, provenientes de cana-de-acar, beterraba, melao, soro de leite, etc.

Substratos insolveis - precisam de tratamento

moderado para solubilizao e hidrlise, antes da converso em produto(s) como por exemplo, amido de milho, mandioca, trigo, cevada, batata, etc.

Substratos insolveis muito resistentes, que necessitam de pr-tratamento fsico, hidrlise qumica ou enzimtica para produzir substratos que sero convertidos em produto. Ex: celulose e hemicelulose.

Agentes de fermentao: Microrganismos

Bactrias
Exploradas industrialmente para acumular intermedirios e finais do metabolismo; So uma rica fonte de produo de enzimas.

produtos

Fungos:

2 grandes grupos: bolores e leveduras;

Vrus

A cultura de vrus para testar drogas antivirais e para a produo de vacinas - importante empreendimento industrial.

Fontes de microrganismos de interesse

Isolamento a partir de recursos naturais; Compra em colees de cultura; Obteno de mutantes naturais;

Obteno de mutantes induzidos por mtodos convencionais;

Obteno de microrganismos recombinantes por tcnicas de engenharia gentica.

Caractersticas desejveis de microrganismos

elevada eficincia na converso do substrato em produto;

no produzir substncias incompatveis com o produto;

apresentar constncia quanto ao comportamento fisiolgico;

no ser patognico;

no exigir condies de processo muito complexas;

no exigir substratos dispendiosos;

permitir a rpida liberao do produto para o meio.

Exemplo dos microorganismos mais utilizados na biotecnologia:

Saccharomyces cerevisiae

Lactobacillus

Aspergillus niger

Pichia pastoris

Penicilium

Acetobacter_aceti

DESENVOLVIMENTO DOS AGENTES DE FERMENTAO E ESTADO FSICO DO SUBSTRATO

Substrato lquido superfcie profundidade (submerso)

Substrato slido ou semi-slido Fermentao em estado lquido: de grande quantidade de gua; tanques de fermentao; aumento de escala para muitos produtos limitados pelo processo de fermentao em meio slido; lcool etlico; bebidas alcolicas; antibiticos; vitaminas; vacinas; enzimas; insulina e muitos outros.

Vantagens:
medio e controle de pH, temperatura, oxignio, produto

substrato; separao e purificao do produto; maior facilidade de se ter um processo contnuo e automatizado.

Meio lquido e na superfcie:

Biomassa situa-se na superfcie do meio lquido, em contato direto com o ar atmosfrico; A difuso e a relao entre a rea e o volume de meio tm papel importante em bioprocessos operados em superfcie; Operao difcil e so considerados antieconmicos; Usados em processos com fungos filamentosos;

Meio lquido submersos:

microrganismo produtor se desenvolve no interior do meio de fermentao (com agitao); A maioria das fermentaes industriais importantes;

Vantagens:

podem-se manipular, com maior facilidade; a massa fica totalmente submersa no meio nutriente de maneira uniforme; a absoro de nutrientes e excreo de metablitos so executadas com maior eficincia; menores tempos de fermentao, melhor produtividade;

Fermentao em estado slido:

a cultura de microrganismos sob ou no interior de

partculas em matriz slida;

Evoluo:

2.600 a.C. Produo de po pelos egpcios Sculo XVIII Produo de vinagre de polpas 1.900 -1920 Produo de enzimas fngicas 1.920 -1940Enzimas fngicas, c.ctrico 1.940 -1.950 Produo de penicilina 1.950 -1.960 Produo de esteris 1.960 -1980 Micotoxinas e alimentos enriquecidos 1.990 -.... Vrios outro produtos, enzimas, lcool

Suporte slido atua tambm como fonte de nutrientes; Os substratos tradicionalmente utilizados so: arroz, trigo, cevada, milho e soja; resduos agro-industriais e florestais (bagao de cana-deacar, o sabugo de milho, o farelo de trigo e a palha de arroz);

custos de produo associados diretamente; Operao pode ser realizada sem agitao mecnica, com agitao ocasional ou contnua em reatores

Vantagens:
Simplicidade dos meios de fermentao; O substrato slido pode requerer somente adio de gua,

embora outros nutrientes possam ser adicionados; No requer mquinas e equipamentos sofisticados; Demanda reduzida de energia; Baixo grau de umidade, reduzindo os problemas de contaminao; As condies de crescimento do microrganismo so similares s do seu ambiente natural; Ausncia de formao de espuma;

Fatores limitantes: Menor acessibilidade e disponibilidade de substrato; Problemas de transferncia de massa (oxignio e nutrientes), calor; Dificuldades no Controle de variveis fsico-qumicas: pH, temperatura, oxignio; Dificuldades no aumento de escala.

Biorreatores

Reatores bioqumicos, reatores biolgicos, os reatores qumicos; ocorre uma srie de reaes qumicas catalisadas por biocatalisadores;

Formas de conduo de bioprocessos

Descontnuo simples (batelada)

Com recicurlao de clulas Sem recicurlao de clulas

Descontnuo alimentado sem recirculao de clulas com recirculao de clulas Contnuo executado em um reator (com ou sem recirculao de clulas) executado em vrios reatores (com ou sem recirculao de clulas)

Descontnuo simples batelada simples

Sistema fechado e de volume constante; Na prtica dificilmente ser aplicado industrialmente; Constitui a base para as comparaes de eficincias atingidas,estimulando vias alternativas; O processo descontnuo simples (1 inculo por tanque): preparao do substrato adequado ao desenvolvimento do microrganismo;

substrato em um biorreator; adicionar o microrganismo responsvel pelo bioprocesso; aguardar que o processo ocorra; Aps o tempo necessrio, retira-se o caldo do biorreator e

executa-se as operaes unitrias recuperao e purificao do produto.

necessrias

para

Problema: fenmenos de inibio pelo substrato, produto, ou outros metablitos. Concentraes elevadas de substrato inibem o agente biolgico represso na sntese de enzimas desidratao dos sistemas enzimticos (perda de H2O ou inibio do transporte de nutrientes)

Vantagens: Fcil operao; Menor risco de contaminao; Construo e instrumentao simples e barata; Processo adequado para curtos perodos de tempo; Versatilidade de usos.

Desvantagens:
Esgotamento do meio de cultivo e acmulo de compostos txicos ou degradao do produto; Menor produtividade volumtrica; Preparo do reator entre uma batelada e outra reduz tempo til e aumenta custos.

Descontnuo com recirculao de clula

H o reaproveitamento como inculo, o microrganismo da batelada anterior (comum em destilarias de lcool);

Sedimentao no fermentador (cervejarias); Centrifugao do meio fermentado;

Tendncia em aumentar o nmero de contaminantes a cada nova batelada

Leite de lvedo (suspenso altamente concentrada) com gua e cido sulfrico 2 a 3h sob agitao: elimina contaminantes e clulas que j se apresentem em fase de degenerao

Descontnuo alimentado
Manuteno da concentrao dos inibidores/repressores em nveis sub-inibitrios/sub-repressores, com implicaes diretas no desempenho da clula. Modo de operao na qual um ou mais nutrientes necessrios ao crescimento celular so adicionados ao biorreator, intermitentemente ou continuamente, sem que ocorra retirada de material durante a operao; Usado na produo de vrias enzimas e antibiticos;