Cromatografa Plana

Tipos:
En capa fina En papel

Cromatografa en Capa Fina Se realiza en placas horizontales de vidrio o plstico que se recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente divididas Placas: Tamao de 5 x 20 cm, 10 x 20 cm o 20 x 20 cm

Caractersticas
Grosor Tamao de partcula

Convencionales
200 250 m > 20 m

Alta resolucin
100 m < 5 m

Nro de platos
Tiempo elucin

2000 en 12 cm
25 mn

4000 en 3 cm
10 min

Pasos de la cromatografa en capa fina

1. Aplicacin de la muestra 3. Localizacin de los analitos en la placa (visualizacin o revelado)

2. Desarrollo de la placa

Parmetros caractersticos
Factor de retraso
R F = d R / dM

Factor de capacidad k = (dM dR) / dR k = (1 RF) / RF Altura de plato y Nmero de platos N = 16 (dR/W)2 H = dR / N

 Variables que afectan a RF

Grosor de la fase estacionaria Humedad de las fases mvil y estacionaria Temperatura Grado de saturacin de la cmara de desarrollo con los vapores de la fase mvil Tamao de la muestra Como no es posible controlar absolutamente estas variables, se aplica un factor de retencin relativo

Rx = (Distancia recorrida por el analito) (Distancia recorrida por la referencia)

Aplicaciones de la cromatografa en capa fina

Cualitativas

Cuantitativas

Electroforesis
Electroforesis convencional
Se realiza sobre una capa delgada y plana o placa de un gel semislido y poroso que contiene un tampn acuoso en el interior de sus poros. Es la tcnica de separacin ms ampliamente empleada por bilogos y bioqumicos. No es una tcnica instrumental

Electroforesis capilar
EN LA ELECTROFORESIS LA SEPARACIN OCURRE EN UNA SOLA FASE

Electrofresis Capilar
Es un proceso en el cual las especies cargadas se separan en funcin de su distinta velocidad de migracin, en el seno de una solucin amortiguadora a travs de la cual se aplica un campo elctrico. Instrumentacin

 La velocidad de una especie dada depende de su carga y de su tamao, es decir la separacin se basa en las diferencias en la relacin carga-tamao entre las especies presentes en la muestra. Cuanto mayor es esta relacin ms rpido migra el in en el seno del campo elctrico v = o E
E: campo elctrico

La movilidad electrofortica ( o) es directamente proporcional a la carga elctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento

 Instrumentacin
Longitud del capilar: 40 - 100 cm Dimetro interno: 10 100 m Material : slice fundida Capacidad del capilar 4 a 5 L Volumen de muestra: pocos l

Flujo de fase mvil = flujo electroosmtico

Se caracteriza por tener un perfil casi plano Esta caracterstica del flujo electroosmtico hace que no contribuya de manera significativa al ensanchamiento de banda La velocidad del flujo electroosmtico es mayor a la velocidad de migracin electrofortica de los iones individuales

 Existen variaciones de la electroforesis capilar como la cromatografa micelar electrocintica capilar que se aplica a analitos neutros