MEIOS DE CULTURA

MEIO DE CULTURA

DEFINIO
- So preparados especiais com finalidade de cultura e isolamento de microrganismos.

- Uma grande variedade de processo e de preparaes nutrientes utilizada para induzir o crescimento e as reprodues de microorganismos.

MEIOS DE CULTURA

- No existe um meio de cultura universal para o crescimento de todos os microrganismos.

Ex: no existe meio de cultura para microrganismos como Treponema pallidum e Micobacterium leprae.

- Estes microrganismos s podem ser cultivados em animais de laboratrio.

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NATURAIS
- Lagos - Oceanos - Solo ARTIFICIAIS OU SINTTICOS

- So nutrientes preparados no laboratrio para o crescimento de microrganismos.

MEIOS DE CULTURA
APRESENTAO

Ps

MEIOS DE CULTURA

PREPARAO
- De acordo com o fabricante. - Tcnica de preparao vem especificada no rtulo dos frascos. - Pesar e hidratar o meio conforme as instrues do fabricante.

MEIOS DE CULTURA

PREPARAO

MEIOS DE CULTURA

MTODOS DE ESTERILIZAO
1 - Autoclave (calor mido) 121C por 15 a 20 minutos. - Vapor fluente

MEIOS DE CULTURA
MTODOS ESTERILIZAO 2 FILTRAGEM DE

- Produtos termo sensveis

- Membranas de acetato de celulose (0,22 m).

RECIPIENTES PARA OS MEIOS DE CULTURA. - Placas de petri, tubos de ensaio, garrafas, frascos, etc...

CONSTITUINTES CULTURA - gua: nutrientes. Principal

DO

MEIO

DE dos

solvente

- Fontes de Carbono: pode ser do CO2 ou de nutrientes orgnicos (carboidratos, lipdeos e protenas).

- Fonte de energia: Carboidratos como amido, glicognio, monossacardeos

CONSTITUINTES DO MEIO DE CULTURA - Fonte de Nitrognio base aminoprotena: peptidase: Aminocidos, peptdeos, protenas complexas e peptona. - Fontes de oxignio, hidrognio, fsforo (fosfatos) e enxofre (sulfatos)
- Vitaminas: Complexo B ( biotina e

cido pantotnico).

CONSTITUINTES DO MEIO DE CULTURA - Sais tamponados: Fsforo (fosfatos), enxofre (sulfato) e citrato. - Sais minerais: Clcio, Ferro, Magnsio - Fatores de crescimento: sangue, soro e extrato de levedura.

MEIOS DE CULTURA - Agentes seletivos: Qumicos, Corantes, e Antimicrobianos - Indicadores de pH: feno vermelho - Agentes de gelificao para meios slidos: gar

CLASSIFICAO DOS MEIOS DE CULTURA

1 DE ACORDO COM A CONSISTNCIA

SLIDOS - Usa gar, um polmero de galactose como agente solidificante na concentrao de 1,35 a 2,0%. - Funde-se 100C, Lquido 40C e slido 37C. - So feitos em frascos, placas de petri e tubos de ensaio.

1 DE ACORDO CONSISTNCIA SEMI-SLIDOS

COM

- Usa gar, como agente solidificante na concentrao de 0,2 0,75%.

- Funde-se 100C, Lquido 40C e Semi-slido 37C. - So feitos em tubos de ensaio

1 DE ACORDO CONSISTNCIA

COM

LQUIDOS
- So os meios isentos de gar. - So sempre lquidos mesmo at a 37C e em temperaturas inferiores. - So feitos em tubos de ensaio

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SLIDO: o crescimento de bactrias visualizado pela formao de colnias.

MEIO SEMI-SLIDO: o crescimento de bactrias visualizado pela turvao. Meio muito utilizado para verificar a motilidade (movimento) da bactria. MEIO LQUIDO: o crescimento de bactrias visualizado pela turvao do meio.

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SLIDO

COLNIAS: so milhares de clulas bacterianas derivadas de uma nica clula bacteriana semeada na superfcie do gar. TEMPO PARA VISUALIZAO DAS COLNIAS: - Maioria dos microrganismos cresce de 12 48 horas. - Outros exigem semanas e at mses.

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SLIDO: COLNIAS

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SEMI-SLIDO E LQUIDO : TURVAO

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SLIDO
Exemplos: gar Sangue, gar chocolate, gar MacConkey, gar SS (Salmonela, Shigella), gar VB (VerdeBrilhante), gar CLED (Cistena Lactose Eletrlitos Deficientes), gar Base, gar Citrato de Simmons, gar Nutriente, gar TSI (Triplice Acar e Ferro), gar Mller Hinton), etc....

CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SLIDO

gar Sangue

gar chocolate

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SEMI-SLIDO
Exemplos: gar SIM (Motilidade Indol Sulfeto) etc....

MEIO LQUIDO:

Exemplos: BHI (Infuso de crebro e corao), Tetrationato, Selenito, Uria, etc...

CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SLIDO X MEIO LQUIDO

- Meio lquido impossvel afirmar a existncia de mais de uma espcie de bactrias ou at mesmo quantificar.

- Meio slido pode-se afirmar a presena de vrias espcies bacterianas.

CLASSIFICAO CULTURA

DO

MEIO

DE

2 TIPOS ou FUNO

MEIOS COMPLEXOS
So meios quimicamente indefinidos, mas tem como funo similar ao ambiente natural da bactria.

Ex: gar sangue, gar chocolate.

CLASSIFICAO CULTURA 2 TIPOS

DO

MEIO

DE

MEIOS SINTTICOS
- So meios de composio qumica conhecida. So utilizados para estudo de necessidades nutricionais de determinadas bactrias. Ex: Meio para micobactrias.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS

- So meios que permitem a distino (diferenciao) entre dois ou mais tipos de bactrias pelas simples observao das caractersticas apresentadas pelas suas colnias que neles se desenvolvem. - Os meios diferenciais permitem o crescimento de vrias espcies ao mesmo tempo, que facilita a discriminao entre os diferentes microrganismos.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS

MEIOS DIFERENCIAIS Ex: Mac Conkey - Permite a distino entre bactrias fermentadoras da lactose (lactose positiva apresenta colnias rosa) e bactrias no fermentadora da lactose (lactose negativa apresenta colnias incolores).

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS SELETIVOS

- So meios cuja composio promovem e/ou inibem o crescimento de um determinado microrganismo ou grupo de microrganismos.
- Os meios seletivos proporcionam o meio pelo qual podemos isolar uma determinada espcie ou categoria de bactrias.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS SELETIVOS

- So usadas substncias seletivas como os corantes tais como cristal violeta, azul de metileno, eosina e verde brilhante.
Ex. Mac Conkey alm de seus nutrientes contm cristal violeta e sais biliares que inibe o crescimento de bactrias Gram- positivas e permitindo o crescimento de Gram-negativas.

CLASSIFICAO CULTURA 2 TIPOS

DO

MEIO

DE

OSERVAO
- ALGUNS MEIOS SO TANTO DIFERENCIAIS COMO SELETIVOS. Ex: gar Mac Conkey

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO - So meios utilizados para isolar um microrganismo de um meio em que est presente em pequena quantidade. - So meios enriquecidos sangue, soro ou outros nutrientes. com

Ex: gar sangue, gar chocolate.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO

Ex: Tetrationato e Selenito

- So meios usados para amostras fecais (coprocultura) inibindo o crescimento da microbiota (bactrias normais das fezes) e permitindo o crescimento de Salmonella e Shigella que so patognicas.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE - So meios utilizados para o transporte e manuteno de amostras biolgicas como fezes e secrees. - So meios inertes, pois, permitem a viabilidade da maioria dos patgenos sem alterar a sua concentrao.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE Ex: Meio de Stuart ou Amies usado para o transporte com swabs. Ex: Meio Cary-Blair e salina glicerinada tamponada til no transporte de fezes para o isolamento de shigella e Salmonella.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

MEIOS DE TRANSPORTE

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE MANUTENO - So meios utilizados para a preservao das bactrias para a realizao de exames complementares para estudos futuros como pesquisa clnica, epidemiolgica ou educacional. Ex: Caldo TSB, caldo nutriente, gua destilada.

MEIOS DE MANUTENO

Mtodos de preservao:
Curto perodo de tempo: temperaturas de 2 a 8 C ou de 4 10C (refrigerador): durao por semanas. Fazer subculturas em caldo TSB ou caldo nutriente. Longo perodo de tempo: temperaturas de -70 -196C. Durao por anos (1 at 10 anos). - Nitrognio lquido: (-196C) - Freezers: (-70 -120C) temperatura ultra baixa. - Liofilizao: congelamento seco.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

2 TIPOS
MEIOS DE IDENTIFICAO - So meios utilizados na identificao das bactrias Gram-positivas e Gramnegativas. Ex: EPM e MILI para identificao de Enterobactrias (Gram-negativas) e Rugai gar Bile esculina. Identificao de Gram-positivas.

CLASSIFICAO DO MEIO DE CULTURA

MEIOS DE IDENTIFICAO
EPM E MILI RUGAI

CONDIES FSICAS PARA CULTURA DAS BACTRIAS - TEMPERATURA - pH - ATMOSFERA GASOSA - PRESSO OSMTICA

- PRESSO HIDROSTTICA
- LUZ

CONDIES FSICAS PARA A CULTURA DAS BACTRIAS

PRESSO OSMTICA

- Meios hipertnicos: as bactrias perdem gua e sofrem plasmlise ou enrugamento da clula.

- Meios isotnicos: concentraes iguais, o mais recomendado. - Meios hipotnicos: ganham gua e sofrem lise. as clulas

CONDIOES FSICAS PARA CRESCIMENTO.

TEMPERATURA
- Psicotrficos: 0 7C - Psicrfilos: 0 20C. - Mesfilos: 20 45C. - Termfilos: 45 90C.

A maioria so mesfilas.
- Temperatura tima: 36,5 a 37C em estufa bacteriolgica.

CRESCIMENTOS DAS BACTRIAS

pH
- Acidfilos: pH 0,1 5,4

- Neutrfilos: pH 5,4 8,5

- Alcalfilas: ph 7,0 11,5

A maioria na faixa de 4,0 a 9,0.

- Ideal: prximo da neutralidade 6,8 a 7,2. - pH prximo do neutro (7,0) para a maioria das bactrias.

CRESCIMENTOS BACTRIAS LUZ - Bactrias fotossintetizantes - Bactrias inibidas pela luz.

DAS

CRESCIMENTO DAS BACTRIAS

PRESSO HIDROSTTICA

- gua dos oceanos e lagos exercem presso hidrosttica. - Bactrias barfilas: vivem alta presso profundidade. em

CRESCIMENTOS DAS BACTRIAS

ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos aerbios: 21% de oxignio. - Jarra de microaerofilia para microrganismos que necessitam de CO2.

CRESCIMENTOS BACTRIAS ATMOSFERA GASOSA

DAS

Microrganimos anaerbios facultativos: crescem na presena de ar ou anaerbiose. Microrganimos microaerfilos: No resistem nveis de oxignio (115%). -

CRESCIMENTOS DAS BACTRIAS ATMOSFERA GASOSA Microrganismos anaerbios: Morrem em presena de oxignio, no crescem em presena de ar e no utilizam oxignio para reaes de produo de energia. - Jarra de anaerobiose.

CRESCIMENTOS DAS BACTRIAS

TEMPO
- Aumento no nmero da populao na cultura: 124816 Progresso geomtrica? 121222324.2n n = nmero de geraes 2n = nmero total de clulas em uma cultura.

CRESCIMENTOS BACTRIAS TEMPO DE BACTRIAS. GERAO

DAS DAS

- De 30 em 30 minutos. - PERODO DE INCUBAO - 24 a 48 horas em estufa bacterilgica.

CRESCIMENTOS DAS BACTRIAS INCUBAO: Estufa bacterilgica.

MEIOS DE UTILIZADOS.

CULTURA

MAIS

gar sangue de carneiro a 5,0% - Meio no seletivo e diferencial que permite o crescimento de bactrias Gram-positivas e Gram-negativas, alm de permitir a visualizao de hemlise.

MEIOS UTILIZADOS.

DE

CULTURA

MAIS

gar sangue de carneiro a 5,0%

MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.

gar Mac Conkey

- Meio seletivo e diferencial que permite o crescimento de bactrias (bacilos) Gram-negativas, diferenciando as bactrias em lactose positiva e lactose negativa. Inibe o crescimento de bacctrias Gram-positivas.

MEIOS DE CULTURA MAISUTILIZADOS.

gar Mac Conkey - utilizado para o isolamento de Enterobactrias (Escherichia coli, Proteus sp, etc.. e bacilos entricos no fermentadores (Shigella e Salmonella). - Amostras utilizadas: fezes, urina, gua de esgoto, alimentos , etc...

MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.

gar Mac Conkey

- Sua composio contm cristal violeta e sais biliares que inibe o crescimento de bactrias Gram-positivas.

- Utiliza a lactose como nico carboidrato como fonte de energia e carbono.

MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.

gar Mac Conkey

- Bactrias fermentadoras de lactose produzem enzimas como a beta-galactosidase e lactose permease que produzem cido diminuindo o pH e produzem colnias rosas chamadas de colnias lactose positiva. Ex: Escherichia coli

MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.

gar Mac Conkey

- Bactrias no fermentadoras de lactose no produzem enzimas portanto no produzem cidos, aumenta o pH do meio, produzindo colnias incolores, transparentes ou ambar chamadas de colnias lactose negativa. Ex: Salmonella dysenteriae. typhi, Shigella

MEIO DE CULTURA Mac Conkey

Lactose positiva

Lactose negativa

IDENTIFICAO DAS COLNIAS

1 - CARACTERSTICAS COLNIAS TAMANHO (mm)

DAS

- Grande: maior que 1 mm de tamanho - Mdia: 1 mm de dimetro - Pequena: menor que 1 mm de dimetro.

IDENTIFICAO DAS COLNIAS

COR
Amarela, Branca, Brancaacinzentada, Cinza, Rosa, Esverdeada, Preta, Alaranjada, Creme, Incolor, etc...

ODOR
- Uva, gua sanitria, Fermento de po, Vinagre, Queijo, Terra molhada, Peixe, Caramelo, etc...

IDENTIFICAO DAS COLNIAS

DENSIDADE
- Opaca, Translcida, Transparente CONSISTNCIA - Brilhante, Cremosa, Seca, Mucide

PIGMENTO
- Amarelo, Vermelho, Mostarda

IDENTIFICAO DAS COLNIAS

BORDA OU FORMA
- Circular (redonda), puntiforme, ondulada irregular,

ELEVAO

- Convexa, Achatada, Umbilicada, centro elevado

Elevada,

IDENTIFICAO DAS COLNIAS

HEMLISE: a rompimento) da hemcia.

lise

(quebra,

Total (beta- hemlise): zona clara ao redor das colnias.

Parcial (alfa-hemlise): h formao de um halo esverdeado em volta da colnia, indicando hemlise parcial das hemcias.

Ausncia de hemlise (gamahemlise): o meio permanece ntegro em volta das colnias.

gar sangue de carneiro a 5,0% Hemlise

gar sangue de carneiro a 5,0%

Tipos de hemlise (alfa, beta e gama)

MEIOS DE CULTURA

CONTROLE DE QUALIADE
- Cepas padro

MEIOS DE CULTURA

TCNICAS DE SEMEADURA
1 - Semeadura quantitativa com ala calibrada.

MEIOS DE CULTURA

TCNICAS DE SEMEADURA
2 - Semeadura por esgotamento.

MEIOS DE CULTURA

Inoculao dos meios de cultura.

- INCULO: quando os microrganismos so colocados em um meio de cultura para iniciar o crescimento. Inocular primeiramente os meios menos seletivos para evitar que substncias inibidoras sejam transferidas de um meio para o outro. Ex: semear primeiro no gar sangue ou gar chocolate em seguida no mac Conkey.

CULTURA: quando os microrganismos cresecem e se multiplicam no meio de cultura.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BARBOSA, H. R.; TORRES, B. B. Microbiologia bsica. So Paulo: Atheneu, 2005. BLACK, J. G. Microbiologia fundamentos e aplicaes. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. KONEMAN, E. W.; ALLEN, S. D.; JANDA, W. M.; SCHRECKENBERGER, P. C.; WINN JNIOR, W. C. Diagnstico microbiolgico. Texto e atlas colorido. 5. ed. Rio de Janeiro: MEDSI Ed. Mdica e Cientfica, 2001. LEVINSON, W.; JAWETZ, E. Microbiologia mdica e imunologia. 7. ed. Porto Alegre: Artmed, 2005. MINS, C.; PLAYFAIR, J.; RITT, I. WAKELIN, D.; WILLIAMS. R. Microbiologia mdica. 2. ed. So Paulo: Manole, 1999. PELCZAR Jr., M. J.; CHAN, E. C. S. KRIEG, N. R. Microbiologia conceitos e aplicaes. 2. ed. v. 1 e 2. So Paulo: Makron Books do Brasil, 1997. SPICER, W. J. Bacteriologia, micologia e parasitologia clnicas um texto ilustrado em cores. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000. THOMAS, C. L. Dicionrio mdico enciclopdico Taber. 17. ed. So Paulo: Manole, 2000. TORTURA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. H. Microbiologia. 8. ed. So Paulo: Artmed, 2005. TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM. Microbiologia. 4. ed. So Paulo: Atheneu,