Fosforilación oxidativa y transporte de electrones

SNTESIS DE ATP
- La fosforilacin oxidativa se refiere a la sntesis

qumica de ATP impulsada por el proceso
exergnico de transferencia de electrones desde
el NADH al O
2

- La fosforilacin oxidativa junto con la
fotofosforilacin (sntesis de ATP impulsada por luz)
son los dos procesos transductores de energa ms
importante en la bisfera
- La mayor parte del ATP sintetizado por los organismos
aerbicos es consecuencia de la fosforilacin
oxidativa y de la fotofosforilacin

PROCESOS TRANSDUCTORES DE ENERGA
qumicade ATP impulsada por el proceso exergnico
de transferencia de electrones desde el NADH al O
2

- La fosforilacin oxidativa junto con la fotofosforilacin
(sntesis de ATP impulsada por luz) son los dos procesos
transductores de energa ms importante en la bisfera
- La mayor parte del ATP sintetizado por los organismos
aerbicos es consecuencia de la fosforilacin oxidativa
y de la fotofosforilacin

FOSFORILACIN OXIDATIVA
qumica de ATP impulsada por el proceso
exergnico de transferencia de electrones desde el
NADH al O
2

Ocurre en la mitocondria
Mitocondria
sitio donde ocurre la fosforilacin oxidativa en
clulas eucariotas (1948)
Albert L. Lehninger
1917-1986
- Es consecuencia de la evolucin, cuando
bacterias aerbicas adoptaron una
residencia simbitica dentro de una clula
husped anaerbica primitiva
- Posee DNA (mtDNA)
- Doble membrana: la membrana externa,
rodea a la organela; la interna, presenta
invaginaciones (crestas) que proporciona
una gran superficie
- La membrana externa es permeable a
pequeas molculas (PM < 5000 Da) e
iones. Presencia de canales transmembrana
- La membrana interna es impermeable a la
mayora de molculas e iones (H
+
, O
2
-
, etc)
Mitocondria
- Las nicas molculas que cruzan la
membrana interna son aquellas para
las que hay protenas transportadoras
especficas. La membrana interna
posee transportadores de metabolitos
esenciales (ADP, ATP, cidos
carboxlicos, Ca
2+
, aminocidos, etc.)
- La membrana interna aloja a las
protenas pertenecientes de los
componentes de la cadena
respiratoria y el complejo enzimtico
responsable de la sntesis de ATP
(ATP sintasa)
Mitocondria
- La fosforilacin oxidativa se refiere a la sntesis qumica
de ATP impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el NADH al O
2

La fosforilacin oxidativa comienza con la entrada de e- en la cadena
respiratoria
- Transportadores universales de electrones
- Nucletidos de piridina (NAD y NADP)
- Nucletidos de flavina (FMN y FAD)

- Otros grupos transportadores de electrones
- Ubiquinona Coenzima Q (benzoquinona)
- Citocromos
- Protenas ferro-sulfuradas
Cadena respiratoria mitocondrial
cadena de transporte de electrones
protenas
- Transportadores universales de electrones
- Nucletidos de piridina (NAD y NADP)
- Nucletidos de flavina (FMN y FAD)

- Otros grupos transportadores de electrones
- Ubiquinona Coenzima Q (benzoquinona)
- Citocromos
- Protenas ferro-sulfuradas
protenas
Sustrato reducido + NAD
+
Sustrato oxidado + NADH + H
+

Sustrato reducido + NADP
+
Sustrato oxidado + NADPH + H
+

Los electrones son canalizados hacia
aceptores universales de electrones
- La mayor parte de los e- que entran en la cadena respiratoria
proviene de la accin de deshidrogenasas que capturan e-
provenientes de reacciones catablicas, canalizndolos en forma
de pares de e- hacia aceptores universales
- Aceptores universales de e-: NAD, NADP, FMN FAD
- Las deshidrogenasas ligadas a nucletidos de piridina, catalizan:
- Las deshidrogenasas ligadas al NAD eliminan dos tomos de
hidrgeno de sus sustratos (:H- y H
+
)
- El NADH y el NADPH son transportadores electrnicos
hidrosolubles, asociados reversiblemente con deshidrogenasas
- El NADH acta como transportador de difusin, llevando e- que
provienen de reacciones catablicas a su punto de entrada en la
cadena respiratoria, el complejo NADH deshidrogenasa (Complejo I)
- La flavoprotenas contienen nucletidos de flavina (FAD o FMN)
fuertemente unido, a veces covalentemente. El nucletido oxidado
puede aceptar un e- (dando la forma semiquinona) o dos e- dando
FADH
2
o FMNH
2

NADPH + NAD
+
NADP
+
+ NADH
- El NAD
+
puede colectar equivalentes de reduccin a partir del NADPH.
Esta reaccin es catalizada por las enzimas transhidrogenasas:
Los electrones son canalizados hacia
aceptores universales de electrones
2

respiratoria
Los e- pasan a travs de una serie de transportadores incluidos en la
membrana interna mitocondrial
- La cadena respiratoria consta de una serie de transportadores
electrnicos, la mayora protenas integrales de membrana, con
grupos prostticos capaces de aceptar y donar 1 2 e-
- Cada componente de la cadena acepta e- del transportador
precedente y se los transfiere al siguiente en una secuencia
especfica
- Tipos de transferencia de e- (equivalentes de reduccin) en la
cadena respiratoria:
(1) transferencia directa de e- (Fe
3+
/Fe
2+
)
(2) transferencia de un H
+
(1 e-)
(3) transferencia de un hidruro (:H-) portador de 2 e-
Otros grupos transportadores de electrones
Ubiquinona o Coenzima Q
- La reduccin completa (UQH
2
)
requiere 2 e- y 2 H
+
y se produce
en 2 pasos sucesivos
- La UQ puede aceptar 1 e-
formndose radical semiquinona
(UQH
-
)
- Capaz de actuar como unin
entre un dador de 2 e- y un
aceptor de 1 e-
- Debido a que es pequea e
hidrofbica difunde a travs de la
membrana interna, actuando de
lanzadera de equivalentes de
reduccin entre otros
transportadores electrnicos de la
membrana, menos mviles
Citocromos
- Son protenas que contienen el grupo
prosttico hemo: 4 anillos penta-atmicos
nitrogenados en una estructura cclica llamada
porfirina. Los 4 N estn coordinados con un
Fe
2+
(cit reducido) o Fe
3+
(cit oxidado)
- Hemo de cit c est unido covalentemente a su
protena, a diferencia de hemos de cit a y b
- El cit c mitocondrial es una protena soluble
(excepcin), asociada a MI por interacciones
electrostticas
a b
c
Protenas ferro-sulfuradas
- En las protenas ferro-sulfuradas, el hierro est presente no en forma de hemo,
sino en asociacin con tomos de azufre inorgnico o con azufre de residuos
Cys de la protena, o con los dos simultneamente
- Centros (Fe-S): estructuras sencillas a complejas
- Participan en reacciones de transferencia de 1 e- en la que se oxida o reduce
uno de los tomos de Fe
- Al menos, 8 protenas Fe-S intervienen en la cadena e transporte de e-
- Potenciales de reduccin: -0.65V a + 0.45 V
E
o
(mV)

NADH

- 320
FMNH

- 290

Fe-S (Complejo I) - 270
FADH

- 10
Fe-S (Complejo II) 20
Ubiquinol (UQH
2
) 50
Citocromo b
k
77

Citocromo b
T
190
Citocromo c (+c
1
) 230
Citocromo a+a
3
380

Oxigeno 816
Potenciales de reduccin estndar de los transportadores de la cadena
respiratoria mitocondrial
Los e- fluyen espontneamente desde los transportadores de E
o
ms
bajo hacia los transportadores con E
o
ms elevado.
En la tabla, los de ms arriba reducen a los de mas abajo
- Una serie de molculas con grupos prostticos redox con potenciales
de reduccin estndar crecientes desde el NADH (-320 mV) al
O
2
(+ 816 mV)
- Transporte de e- mitocondrial: reaccin global
NADH Fp(FMN) UQ cit b
K
b
T
cit c,c
1
cit aa
3
O
2
2

respiratoria
Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan dentro de
complejos proteicos ordenados en serie
Componentes de la cadena respiratoria mitocondrial
pH = 7.0
Espacio intermembranas (Lado P)
pH = 7.8
Matriz (Lado N)
Reacciones de transferencia
de e- se realiza a alta
velocidad por estar los
transportadores de e-
incorporados en la membrana
interna (restringidos en sus
movimientos) y asociados
entre s (uniones
intermoleculares)
2

respiratoria
Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan dentro de
complejos proteicos ordenados en serie
La cadena de transporte de e- es un proceso exergnico, que libera
energa suficiente para la sntesis de ATP
La transferencia de electrones es un
proceso exergnico
- En la cadena de transporte de e-, pasan 2 e- desde el NADH al O
2

NADH + H
+
+ 1/2 O
2
H
2
O + NAD
+
- La reaccin neta es altamente exergnica
Teniendo en cuenta NAD
+
/NADH E
o
= -0.320 V
O
2
/H
2
O E
o
= + 0.816 V
El cambio de energa libre:
DG
o
= - n F DE
DG
o
= - 2 x 96500 x 1.14 V = - 220 kJ/mol NADH (c/2e-)
- En mitocondrias respirando activamente, la relacin NADH/NAD es mayor
que 1, y el DG
o
es mucho mayor (ms negativo) que -220 kJ/mol
- Para el succinato DG
o
= - 150 kJ/mol
- En las condiciones celulares, la oxidacin mitocondrial del NADH
o del succinato libera una energa superior a la necesaria para la
sntesis de ATP
A E
o
= 1.14 V
Energa necesaria para la sntesis de ATP?
- La sntesis de ATP, a partir de ADP y Pi, es un proceso endergnico:
ADP + P
i
ATP + H
2
O DG
o
= 30.5 kJ/mol
En condiciones fisiolgicas, en eritrocitos
[ATP] = 2.25 mM
[ADP] = 0.25 mM y [P
i
] = 1.65 mM
A 25
o
C, pH = 7.0 DG
= 51.8 kJ/mol
La cadena de transporte de e- libera energa ms que
suficiente para sintetizar ATP
qumica de ATP impulsada por el proceso exergnico
de transferencia de electrones desde el NADH al O
2

respiratoria
Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan dentro de complejos
proteicos ordenados en serie
La cadena de transporte de e- es un proceso exergnico, que libera energa
suficiente para la sntesis de ATP
Existe una translocacin de H
+
desde la matriz hacia el EIM (fuerza protomotriz)
Translocacin de H
+
asociada al flujo de electrones
pH = 7.0 Espacio intermembranas (Lado P)
pH = 7.8
Matriz (Lado N)
- Por cada par de e- transferidos al O
2
, 4 H
+
son bombeados por el
Complejo I, 4 H
+
por el Complejo III y 2 H
+
por el complejo IV; todos
ellos desde la matriz mitocondrial (Lado N), hacia el espacio
intermembranas (Lado P)
NADH + 11 H
+
(N)
+ 1/2 O
2
H
2
O + NAD
+
+ 10 H
+
(P)

- La membrana mitocondrial
interna separa 2
compartimientos de
diferente pH, generando
diferencias tanto en la
concentracin de H
+
(ApH)
como en la distribucin de
cargas (A).
- El efecto neto de esta
diferencia es la fuerza
proto-motriz
Fuerza proto-motriz
Gradiente electroqumico de H
+

Potencial electroqumico para el H
+

~
m
H+(2)
= m
H+
+ RT ln a
H
+
(2)
+ z F A
(2)

~
m
H+(1)
= m
H+
+ RT ln a
H
+
(1)
+ z F A
(1)

Dm
H+(2-1)
= RT ln (a
H
+
(2)
/ a
H
+
(1)
) + z F A
(2-1)

~
(1) Matriz
(2) EIM
~
Am
(2-1)

= RT ln (C
2
/C
1
) + z F A
(2-1)

Aplicando el concepto de potencial electroqumico de
Guggenheim (1924)

A 25
o
C
ln (C
2
/C
1
) = 2.3 (log [H
+
]
2
-

log [H
+
]
1
)

= 2.3 (pH
1
- pH
2
) = 2.3 ApH

+

~

Am
(2-1)

= RT ln (C
2
/C
1
) + z F A
(2-1)

~

Am
(2-1)

= 2.3 RT ApH + F A
(2-1)

~

Am
(2-1)

= 5.7 kJ/mol ApH + (96.5 kJ/V mol) A
(2-1)

~

Am
(2-1)

= 5.7 kJ/mol (0.8) + (96.5 kJ/V mol) (0.15 V)
~

Am
(2-1)

= 20
kJ/mol
*
ApH = 0.75-0.8
A = 0.15-0.2 V
En mitocondrias
respirando
+

~

Am
(2-1)

= 20
kJ/mol
NADH + 11 H
+
(N)
+ 1/2 O
2
H
2
O + NAD
+
+ 10 H
+
(P)

Para 10 H
+
que translocan a travs de la membrana

- Aproximadamente, 200 kJ/mol de los 220 kJ liberados por la
oxidacin de 1 mol de NADH son conservados en el
gradiente electroqumico de H
+
(fuerza proto-motriz)

- Cuando los H
+
vuelvan espontneamente a travs de su
gradiente electroqumico, hacia la matriz mitocondrial, la
energa estar disponible para realizar trabajo
+

Ap = A + 59 ApH
- En mitocondrias en estado de reposo (estado 4) (pH
M
= 7.8; pH
EIM
= 7.0):
Ap = A + 59 ApH = 170 mV + 50 mV = 220 mV
- La fuerza proto-motriz (Ap), expresa en mV (220-230 mV) el potencial
electroqumico del H
+
que es utilizado en la sntesis endergnica de
ATP a partir de ADP y P
i
Considerando Ap = Am/F
~
Ap = 2.3 RT/F ApH + A
(2-1)

2.3 RT/F = 59 mV
~

Am
(2-1)

= 2.3 RT ApH + F A
(2-1)

*
2

respiratoria
Los e- pasan a travs de una serie de transportadores incluidos en la membrana
interna mitocondrial
+
Sntesis de ATP por ATP sintasa
La fosforilacin oxidativa se refiere a la sntesis qumica de ATP impulsada
por el proceso exergnico de transferencia de electrones desde el NADH al
O
2
Fosforilacin oxidativa
Sntesis de ATP acoplada al flujo de electrones
La fosforilacin oxidativa, no plantea un problema
termodinmico
- Cmo el gradiente electroqumico de H
+
, se transforma en ATP?
- Cul es el mecanismo que acopla la cadena de transporte de e-
con la sntesis de ATP?
La teora quimiosmtica mitocondrial
(P. Mitchell, 1961)
Peter Mitchell
1920-1992
The Nobel Prize in Chemistry 1978
"for his contribution to the understanding
of biological energy transfer through the
formulation of the chemiosmotic theory"
El gradiente electroqumico de protones a travs de la
membrana interna mitocondrial (fuerza proto-motriz)
es crucial para los procesos de transduccin de energa
y sntesis de ATP
Membrana
mitocondrial
interna
Matriz
mitocondrial (N)
Espacio
intermembrana (P)
ADP + Pi ATP
O
2

FP b c a a
3

H
+
H
+
H
+

pH = 7.0
pH = 7.8
ATPasa
H
+

La teora quimiosmtica mitocondrial
(P. Mitchell, 1961)
La fuerza proto-motriz, lleva a la sntesis de ATP, como
consecuencia del flujo pasivo de H
+
hacia la matriz mitocondrial, a
travs de un poro de H
+
(F
0
) asociado a la ATP sintasa (Complejo V)
ADP + Pi + nH
+
(p)
ATP + H
2
O + nH
+
(N)

Cadena respiratoria y Fosforilacin oxidativa
Fosforilacin oxidativa
Sntesis de ATP acoplada al flujo de electrones
- Cuando se suspenden mitocondrias en una solucin
amortiguadora, que contiene un sustrato oxidable, ADP y
Pi, ocurren 3 procesos:
(1) se oxida el sustrato
(2) se consume O
2
(hay respiracin)
(3) se sintetiza ATP
- Si el dador de e- es el NADH, las mitocondrias sintetizan 3
ATP por cada par de e- pasados al O
2

- Si el dador es succinato, se sintetizan 2 ATP
- El consumo de O
2
y la sntesis de ATP son dependientes
de la presencia de un sustrato oxidable y de ADP y Pi
Regulacin del consumo de O
2
mitocondrial
Efecto del ADP
- El ADP aumenta el consumo de O
2

- Control respiratorio

Consumo de O
2
en presencia de ADP (Est. 3)
Consumo de O
2
en ausencia de ADP (Est. 4)
El control respiratorio, usualmente de 4 a 10,
es el ndice mas sensible para juzgar la
integridad y el acoplamiento mitocondrial y,
por lo tanto, la calidad de las mitocondrias
aisladas.
Postulados de la teora quimiosmtica mitocondrial
(P. Mitchell, 1961)
- El transporte de e- a travs de la cadena respiratoria est asociado al
transporte de H
+
desde la matriz hacia el espacio intermembranas
- La membrana interna es impermeable a los H
+

- Se conserva la energa de oxidacin de los procesos metablicos en
forma de potencial electroqumico, ya que se genera un gradiente
electroqumico de H
+

- La cadena respiratoria est acoplada a la sntesis de ATP
- El flujo de H
+
a favor de su gradiente electroqumico proporciona la
energa libre para la sntesis de ATP. Las concentraciones de H
+
en
las 2 fases acuosas (EIM y M) separadas por la membrana interna,
constituyen la fuerza responsable (fuerza proto-motriz) de la formacin
de ATP a partir de ADP y de Pi, por accin de la F1-ATPasa de la
membrana mitocondrial
John Walker
The Nobel Prize in Chemistry 1997
"for their elucidation of the enzymatic
mechanism underlying the synthesis of
adenosine triphosphate (ATP)"
Paul Boyer
ATP sintasa, ATPasa o Complejo V
- Gran complejo enzimtico, que cataliza la sntesis de ATP a partir de
ADP y Pi, acompaado del flujo de H
+
desde el lado P al N
- Est formado por dos componentes:
F
1
, una protena perifrica de membrana (o
3
|
3
oc)
F
0
, una protena integral (poro de H
+
) (ab
2
c
10-12
)
- Sub. c (de F
0
) forman 2 crculos
concntricos
- La subunidad pasa a travs del
centro esfrico o
3
|
3

- Sub. y c (de F
1
) se unen
firmemente al anillo de sub. c.
F
1

F
0

Matriz
EIM
- Las translocacin de H
+
a travs del poro F
0
provoca que el cilindro de
sub. c y la subunidad adjunta, roten alrededor del eje de g
(perpendicular al plano de la membrana)
ATP sintasa, ATPasa o Complejo V
|-ADP |-ATP |-vaco

Alta afinidad
por ATP
Baja afinidad
por ATP
- El pasaje de H
+
a travs de F
0
llevan
a cambios conformacionales de la
subunidad | de la F
1
-ATPasa
- El proceso endergnico de rotacin
de la sub. es impulsado por el
proceso exergnico de la
translocacin de H
+
del lado P al N
F
1
-ATPasa = Rotor molecular

El acoplamiento no es qumico,
sino electroqumico y fsico
2

respiratoria
Los e- pasan a travs de una serie de transportadores incluidos en la membrana
interna mitocondrial
+
- Los animales (y todos los seres vivos) son mquinas qumicas
- La energa qumica (AG) de los sustratos (alimentos) que se
oxidan genera un gradiente electroqumico de H
+
a travs de
la membrana interna mitocondrial
- El gradiente electroqumico de H
+
(AG) se utiliza para la
produccin de ATP (la F
1
-ATPasa es un rotor molecular)
- La energa qumica del ATP (AG) se utiliza para que puedan
ocurrir las reacciones endergnicas

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