Modalidades y Clasificacin

CROMATOGRAFIA

FM = Lquido

Cromatografia Lquida
Cromatografia Gaseosa (CG)

FM = Gas

Slida
En CG la FE puede ser:

Cromatografia Gas-Slido (CGS)

Lquida

Cromatografia Gas-Lquido (CGL)

CROMATOGRAFIA GASEOSA
Aplicabilidad
Qu mezclas pueden ser separadas por CG ? la sustancia debe poder ser arrastrada por el flujo de un gas en el que se disuelva - por lo menos parcialmente -

Mezclas cuyos constituyentes sean

VOLTILES
DE FORMA GENERAL: CG es aplicable para separaciones y anlisis de mezclas cuyos constituyentes tengan PUNTOS DE EBULLICION de hasta 300o y que sean trmicamente estables.

Cromatgrafo Gaseoso
1 2 6

5 3
1 - Reservorio de Gas y Controles de Presin. 2 - Inyector (Vaporizador) de muestra. 3 - Columna Cromatogrfica y horno. 4 - Detector. 5 - Electrnica de Tratamiento (Amplificacin) de Seal. 6 - Registro de Seal (Registrador del Computador).

INSTRUMENTACION
Parmetros de Inyeccin
TEMPERATURA DEL INYECTOR Debe ser suficientemente elevada para que la muestra vaporice inmediatamente sin descomponerse. Regla Gral: Tiny = 50oC encima de la temperatura de ebulicin del componente menos voltil VOLUMEN INYECTADO Depende del tipo de columna y del estado fsico de la muestra
COLUMNA

muestras lquidas
0,2 L ... 20 L 0,01 L ... 3 L

muestras gaseosas
0,1 ml ... 50 mL

empacada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm

0,001 ml ... 0,1 mL

Slidos: convencionalmente se disuelven en un solvente adecuado y se inyecta la solucin

Microjeringas para Inyeccin

LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10 L
Microjeringa de 10 L:
mbolo aguja (inox 316)

INSTRUMENTACION

cuerpo (pirex)

INSTRUMENTACION
Columnas: Definiciones

EMPACADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Rellena con slido pulverizado (FE slida o FE lquida depositada sobre las partculas de relleno)

CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Paredes internas recubiertas con un film fino (fraccin de m) de FE lquida o slida

Temperatura de la Columna
La interaccin con la FE y el tiempo que un analito demora para recorrer la columna depende de su PRESIN DE VAPOR (p0). Estructura qumica del analito

INSTRUMENTACIN

p0 = f

Temperatura de la columna

Temperatura de columna

Presin de vapor

Velocidad de migracin

EL ANALITO ELUYE MAS RAPIDAMENTE (MENOR RETENCIN)

Temperatura de la Columna

INSTRUMENTACION

EL CONTROL CONFIABLE DE LA TEMPERATURA DE COLUMNA ES ESENCIAL PARA OBTENER UNA BUENA SEPARACION EN CG

TEMPERATURA DE COLUMNA

INSTRUMENTACION
Horno de la Columna
Caractersticas Deseables de un Horno: AMPLIO RANGO DE TEMPERATURA DE USO Por lo menos de Tambiente hasta 400oC. Sistemas criognicos (T < Tambiente) pueden ser necesarios en casos especiales.

TEMPERATURA INDEPENDIENTE DE LOS DEMAS MDULOS No debe ser afectado por la temperatura del inyector y del detector.
TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR Sistemas de ventilacin interna muy eficientes para mantener la temperatura homognea en todo el horno.

INSTRUMENTACION
Horno de la Columna
Caractersticas Deseables de un Horno: FCIL ACCESO A COLUMNA La operacin de cambio de columna puede ser frecuente. CALENTAMIENTO Y ENFRIAMIENTO RPIDO Importante tanto en anlisis de rutina como durante el desenvolvimiento de metodologias analticas nuevas.

TEMPERATURA ESTABLE Y REPRODUCIBLE

La temperatura debe ser mantenida con exactitud y precisin de 0,1C. En cromatgrafos modernos (despus de 1980), el control de temperatura del horno es totalmente operado por microprocesadores.

Programacin Lineal de Temperatura

Mezclas complejas (constituyentes con volatilidades muy diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE: TCOL BAJA:
- Los componentes ms voltiles son separados

INSTRUMENTACION

- Los componentes menos voltiles demoran en eluir, saliendo como picos mal definidos

TCOL ALTA:
- Los componentes ms voltiles no son separados - Los componentes menos voltiles eluyen ms rpidamente

Programacin Lineal de Temperatura

La temperatura del horno puede modificarse linealmente durante la separacin:
Se consiguen buenas separaciones de los componentes de la muestra en menor tiempo
Parmetros de una programacin de temperatura:
TEMPERATURA

INSTRUMENTACION

TINI Temperatura Inicial TFIN Temperatura Final tINI Tiempo Isotrmico Inicial tFIN Tiempo Final del Programa R Velocidad de calentamiento

TFIN R TINI

tINI
TIEMPO

tFIN

Programacin Lineal de Temperatura

Posibles problemas asociados a PLT:
VARIACIONES DEL CAUDAL DEL GAS DE

INSTRUMENTACION

La viscosidad de un gas aumenta con la temperatura.

ARRASTRE

viscosidad

caudal

DERIVA DE LA LINEA DE BASE Debido al

aumento de volatilizacin de FE lquida

INSTRUMENTACION
Detectores
Dispositivos que examinan continuamente el material eluido, generando la seal al pasar el analito

Grfico Seal x Tiempo = CROMATOGRAMA Idealmente: cada sustancia separada aparece como un PICO en el cromatograma.

INSTRUMENTACION
Detectores
Ms Importantes:
DETECTOR POR CONDUCTIVIDAD TRMICA
(DCT O TCD) Variacin de conductividad

trmica del gas de arrastre.

DETECTOR POR IONIZACION EN LLAMA ( FID)

Iones generados durante la combustin de los eluatos en una llama de H2 + aire.

DETECTOR POR CAPTURA DE ELECTRONES (DCE O ECD)

Supresin de corriente causada por la absorcin de electrones por eluatos altamente electroflicos.

TEORIA BSICA
Eficiencia de Sistemas Cromatogrficos
La migracin de un analito por la columna provoca inevitablemente el ensanchamiento de su banda:

TIEMPO

Efectos del ensanchamiento excesivo de picos: Picos ms largos y Separacin deficiente de analitos con retenciones menos intensos = menor detectabilidad prximas.

EFICIENCIA Capacidad de elucin con el mnimo de dispersin del analito.

TEORIA BSICA
Cuantificacin de la Eficiencia
Supondo la columna cromatogrfica como una serie de etapas separadas donde ocurre un equilbrio entre el analito, la FE y el gas de arrastre:

Cada etapa de equilbrio se denomina PLATO TERICO

El nmero de platos tericos de una columna (N) puede ser calculado por:

tR

N
wb

Columna ms eficiente

TEORIA BSICA
Cuantificacin de la Eficiencia
ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO TERICO (H) Tamao de cada etapa de equilbrio
(L = longitud de la columna)

Valores tpicos de H e N:
dC 0.10 0.25 0.32 0.32 0.32 0.32 0.53 0.53 2.16 2.16 df 0.25 0.25 0.32 0.50 1.00 5.00 1.00 5.00 10% 5% H 0.081 0.156 0.200 0.228 0.294 0.435 0.426 0.683 0.549 0.500 N 370370 192308 150000 131579 102041 68966 70423 43924 3643 4000

Capilares, L = 30 m

Empacadas, L = 2 m

Valores de H para columnas capilares y empacadas son parecidos, pero como L para capilares es MUCHO mayor tipicamente ellas son ms eficientes

TEORIA BSICA
Optimizacin de la eficiencia
La altura equivalente de un plato terico es funcin de la velocidad lineal media del gas de arrastre u:
El valor de H puede ser minimizado optimizandose la velocidad del gas de arrastre

HMIN uMAX

Relaciones algebraicas entre H y u:

- Columnas Empacadas: Ecuacin de van Deemter

(A, B, C = constantes)
- Columnas Capilares: Ecuacin de Golay

(B, CM, CS = constantes)

FASES ESTACIONARIAS
Conceptos Generales
LQUIDOS depositados sobre una superfcie de: slidos porosos inertes (columnas empacadas) o de tubos finos de materiales inertes (columnas capilares)
FE lquida SOPORTE Slido inerte poroso Tubo capilar de material inerte

Para minimizar la prdida de FE lquida por volatilizacin, normalmente ella es:

Entrecruzada: las cadenas polimricas estn qumicamente ligadas entre s

Qumicamente ligadas: las cadenas polimricas estn ligadas al soporte por enlaces qumicos

SLIDOS Columnas rellenas con material finamente

granulado (empacadas) o depositado sobre la superfcie interna del tubo (capilar)

FASES ESTACIONARIAS
Caractersticas de una FE ideal
SELECTIVA Debe interactuar
diferencialmente con los componentes de la muestra.

FE Selectiva: separacin adecuada de los constituyentes de la muestra

FE poco Selectiva: poca resolucin aun con columna de buena eficiencia

Regla gral: la FE debe tener caractersticas que permitan la separacin de dos solutos a ser separados (polar, apolar, aromtico ...)

FASES ESTACIONARIAS
Caractersticas de una FE ideal
AMPLIO RANGO DE TEMPERATURAS DE USO Mayor flexibilidad en la optimizacin
de la separacin.

BUENA ESTABILIDAD QUMICA Y TRMICA Mayor durabilidad de la

columna, no reacciona con los componentes de la muestra

POCO VISCOSA Columnas ms

eficientes (menor resistencia a la transferencia del analito entre fases)

DISPONIBLE EN ELEVADO GRADO DE PUREZA Columnas reproducibles;

ausencia de picos fantasma en los cromatogramas.

FASES ESTACIONARIAS
FE Slidas: Adsorcin
El fenmemo fsico-qumico responsable de la interaccin entre el analito + FE slida es la

ADSORCIN

La adsorcin ocurre en la interfase entre el gas de arrastre y la FE slida Slidos con grandes reas superficiales (partculas finas, poros)
Solutos polares Slidos con gran nmero de stios activos (hidroxilos, pares de electrones...)

ADSORCIN

FASES ESTACIONARIAS
FE Slidas
Caractersticas Generales:
- Slidos finamente granulados (dimetros de partculas tpicos de 105 m a 420 m). - Grandes reas superficiales (hasta 102 m2/g).

Ms usados:
Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divinilbenceno), Tenax (polixido de difenileno) Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carbones activos grafitizados), Alumina

Principales Aplicaciones:

- Separacin de gases - Compuestos livianos - Series homlogas

Columna:Carboxen-1000 60-80 mesh; 15 x 1/8 TCOL: 35oC a 225oC / 20oC. min-1 Gas de Arrastre: He @ 30 ml.min1

Detector: TCD

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
POLIGLICOLES Muy polares; sensibles a la
oxidacin. Principales: Polietilenglicol (nombres comerciales: Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.) Estructura Qumica:

O CH2 CH2

OH n

AMINAS ALIFTICAS Columna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH TCOL: 200oC (isotrmico) Gas de Arrastre: N2 @ 20 mL.min-1 Detector: FID Muestra: 0,01 L de mezcla de aminas

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Mayor parte de las aplicaciones en CG moderna Cuatro grandes grupos estructurales:

PARAFINAS No polares; alta inercia

qumica. Principal: escualeno (C30H62)

POLISTERES steres de dialcoholes con

di-cidos. Polares; altamente sensibles a la humedad y a la oxidacin.

STERES METLICOS DE CIDOS GRAsOS Columna:5%DEGS-PS s/ Supelcoport 100/120 mesh; 6 x 1/8 TCOL: 200oC (isotrmico) Gas de Arrastre: N2 @ 20 ml.min-1 Detector: FID Muestra: 0,5 L de solucin en cloroformo conteniendo 0,5 g de cada ster

FASES ESTACIONARIAS
FE Lquidas: Absorcin
El fenmeno fsico-qumico responsable de la interaccin analito + FE lquida es la

ABSORCIN

La absorcin ocurre en el interior del film de FE lquida (fenmeno INTRAfase) Films espesos de FE lquida
Gran superficie lquida expuesta al gas de arrastre Interaccin fuerte entre la FE lquida y el analito (gran solubilidad)

ABSORCION

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
SILICONAS (polisiloxanos) Las FE ms empleadas en CG. Cubren amplia rango de polaridades y de propiedades qumicas diversas.
CH3 H3C Si CH3 R1 O Si R2 CH3 O Si CH3 n CH3

R1, R2 = qualquier radical orgnico

- Unin Si-O extremadamente estable = elevada estabilidad trmica y qumica de la FE.

- Las siliconas son fabricadas en amplia escala para diversas aplicaciones = minimizacin del costo del producto + tecnologia de producin y purificacin ampliamente estudiada y conocida. - Practicamente cualquier radical orgnico o inorgnico puede ser unido a la cadena polimrica = FE ajustables a separaciones especficas + facilidad de inmobilizacin por entrecruzamiento de uniones qumica al soporte

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de pesticidas - FE = 100 % PDMS
1 - TCNB 2 - Dichloram 3 - Lindano 4 - PCNB 5 - Pentacloroanilina 6 - Ronilano 7 - Antor 8 - pp-DDE 9 - Rovral 10 - Cypermetrin 11 - Decametrin

17 min

Columna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 m) TCOL:195oC (6,5 min) / 195oC a 275oC (10oC.min-1) Gas de Arrastre: He @ 35 cm.min-1 Detector: FID Muestra: 2L de solucin de pesticidas on-column

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de piridinas - FE = 100 %CNpropilsilicone
1 - piridina 2 - 2-metilpiridina 3 - 2,6-dimetilpiridina 4 - 2-etilpiridina 5 - 3-metilpiridina 6 - 4-metilpiridina

Columna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x 0,2 m) TCOL:110oC (isotrmico) Gas de Arrastre: N2 @ 16 cm.min-1 Detector: FID

3 min

Muestra: 0,1L de solucin 1-2% de piridinas en 3-metilpiridina

FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de fenoles - FE = fenilmetilsiliconas

50% Ph 50% Me

5% Ph 95% Me

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
Separacin de ismeros pticos:

PRODUCTOS BIOLGICOS Distincin entre

productos de origen sinttico y natural (natural = normalmente sustancias pticamente puras; sinttico = muchas veces son mezclas racmicas).

FRMACOS En muchos frmacos apenas

dos ismeros pticos tienen actividad farmacolgica. Las propiedades fsico-qumicas de los ismeros pticos son MUY SIMILARES

Las FE convencionales no interaccionan diferencialmente con ismeros pticos

La separacin de mezclas de ismeros pticos slo es posible con FE opticamente activas

FE Quirales

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
FE pticamente activas ms importantes:
CH3 O Si CH3 CH3 O CH3 Si CH2

Derivados de aminocidos:

n
C

CH3 NH C CH3 H CH3

CH O C O N H

Mezclas de compuestos formadores de puentes de hidrogeno.

C*

CH CH3 CH3

Chiralsil-Val

CH3 O Si CH3 O

CH3 Si CH2 CH2 O Ni O C3F7

Organometlicos: Separacin de enantimeros formadores de complejos.

/2

Chiralsil-Metal

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:
b-ciclodextrina:
oligosacrdos cclicos quirales

Chiralsil-Dex

- Introducidas en 1983 - ligadas a cadenas de polisiloxano: su uso es extremamente favorable como FE lquida (viscosidad baja, estabilidad ...) - Pueden ser qumicamente inmobilizadas en las columnas - Columnas disponibles comercialmente

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Aceite esencial artificial de limn: separacin de terpenos primarios

1 - (+/-) a-pineno 2 - sabineno 3 - (+/-) b-pineno 4 - (+/-) limoneno

Columna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 2C min-1 / 3 min a 200C Gas de Arrastre: H2 @ 80 cm.min1

Detector: FID

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Aroma de bergamota: distincin entre aroma natural y artificial

Aceite esencial natural

Esencia artificial

Columna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 4C min-1 / 200C
Gas de Arrastre: He @ 80 cm.min-1

Detector: MS

FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Anfetaminas: resolucin de ismeros

Columna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m)

TCOL: 1 min a 120C / 1,5C min-1 / 3 min A 175C Gas de Arrastre: He @ 25 cm.min1

Detector: MS

COLUMNAS EMPACADAS
Definiciones Bsicas
Tubo de material inerte relleno con FE slida granulada o FE lquida depositada sobre soporte slido.
ac. inox

MATERIAL DEL TUBO

vidro pirex nquel TEFLON

= 3 mm a 6 mm L = 0,5 m a 5 m

MESH

dp 177 - 250 m 149 - 177 m 125 - 149 m

Granulometria del relleno

60 - 80 mesh 80 - 100 mesh 100 - 120 mesh

Eficiencia maximizada con: - Disminuc. de dC - Disminuc. de dp - Relleno regular

Limitados por la resistencia al pasaje de gas de arrastre

COLUMNAS EMPACADAS
FE Lquidas: Soporte
rea superficial entre 0,5 e 10 m2.g-1

La FE lquida debe ser dispuesta sobre un SOPORTE slido

microporos regulares (~ 1 m) NO interactuar con la muestra

buena resistencia mecnica

Uso casi universal: TIERRA DE DIATOMEAS

secado calcinacin

Esqueletos fsiles (SiO2 + xidos metlicos) de algas microscpicas

fusin con NaOH lavado con cido silanizacin

Chromosorb Anachrom Supelcoport ...

COLUMNAS EMPACADAS
FE Lquidas: Soporte
Chromosorb - caractersticas generales Chromosorb P muy activo. Chromosorb W mas inerte que el P.
Chromosorb G Similar al W, mayor resistencia mecnica
Orden cresciente de inercia
Densidade Aparente Tamanho de Poro rea Superficial

NOME
Chromosorb P Chromosorb W Chromosorb G

m 2 .g -1

g.ml

-1

4,0 1,0 0,5

0,47 0,24 0,58

0,4 - 2 8-9 -

30 15 5

AW

Tratamientos especiales:
Lavado con cido, para remover metales

NAW Sin lavado con cido HP o DMCS o HDMS Silanizados (menor adsorcin)

% Mx. de FE

COLUMNAS EMPACADAS
FE Lquidas: Carga de FE
df = f (% FE en relleno)
Mayor eficiencia (d f = N) Menor sangria de FE con temperatura programada Separaciones rpidas con temperaturas menores

% FE
Mayores vol. de muestra Mejor reproducibilidad en la preparacin del relleno

TIPICAMENTE % FE = 1 % a 30 % de relleno

COLUMNAS CAPILARES
Definiciones Bsicas
Tubo fino de material inerte con FE lquida o slida depositada sobre las paredes internas.
MATERIAL DEL TUBO
slica fundida vidro pirex ac. inox Nylon Silcosteel

= 0,1 mm a 0,5 mm L=5m a 100 m

Las columnas de slica estn revestidas externamente con pelcula de polmero (poliimida) para aumentar resistencia mecnica y qumica

Columnas Capilares vs Empacadas:

CAPILARES L = N ms eficientes FC = 1 ... 10 mL.min-1 Control de elusin ms difcil Vi Dispositivos especiales de inyeccin

Familias de Columnas Capilares :

WCOT (Wall coated open tube) FE liquida depositada (ligada //

entrecruzada) sobre las paredes internas.

PLOT (Porous layer open tube) Pelcula de FE slida adherida

a las paredes internas

SCOT (Support coated open tube) Paredes internas revestidas

con material de relleno similar a las columnas empacadas

COLUMNAS CAPILARES
Dimetro Interno
dC =

Eficiencia
0,53 mm

0,10 mm

0,25 mm 0,32 mm

Columnas de altsima eficiencia (muestras complejas, Fast GC); limitada capacidad volumtrica de procesamiento de la muestra

Dimetros ms comunes; limitada capacidad volumtrica de la muestra

Columnas megabore: menor eficiencia, pero mayor capacidad de procesamiento, permite el uso de inyectores convencionales

COLUMNAS CAPILARES
Fast GC: Columnas Capilares Finas
Necesario control exacto flujo (control electrnico de presin) y altas velocidades de calentamiento de la columna. Destilacin simulada de leo diesel:

Columna: HP-1 (1 m x 0.10 mm x 0.40 m)

TCOL: 35C / 40C min-1 / 0,75 min A 310C Gas de Arrastre: He @ 90 ml.min1

Detector: FID

COLUMNAS CAPILARES
Columnas Capilares: Inyeccin
Baja capacidad de procesamiento de la muestra (sub-microlitro)

La inyeccin directa con microjeringa es muy difcil

Inyectores con divisin (splitters) 1 2 3 4 5

1 - Septo; 2 - Entrada de gas de arrastre; 3 - Liner (mezclador); 4 - Columna Capilar 5 - Purga de gas de arraste; 6 - Vlvula de control de purga.

6
- Menor sensibilidad (buena parte de la muestra es despreciada) - Divisin de muestra raramente es uniforme (la fraccin purgada de los constituyentes menos voltiles es siempre menor)

COLUMNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Separacin de PAH con LVI (Viny = 25 L, solucin 400 ppb en CH2Cl2)

Columna: HP-5 (30 m x 0.25 mm x 0.25 m) TCOL: 5 min a 50C / 20C min-1 / 2 min A 320C Gas de Arrastre: He @ 2 ml.min-1 Detector: FID

COLUMNAS CAPILARES
Columnas Multicapilares
Lneas paralelas de columnas capilares con dC convencional

- Eficiencia prxima a las columnas convencionales - Capacidad similar a las columnas empacadas - Columnas ms cortas: anlisis ms rpidos

Separacin de explosivos en columna multicapilar (OV-17, 1000 capilares x 6 m)

1 - 2,6-DNT 2 - 2,4-DNT 3 - 2,4,6-TNT 4 - 3,4,5-TNT 5 - 2,3,4-TNT 6 - RDX ? 7 - tetryl

DETECTORES
Definicin General
Dispositivos que generan una seal elctrica proporcional a la cantidad eluda de un analito ~ 60 detectores usados en CG

~ 15 equipados en cromatgrafos comerciales 4 responden para la mayor parte de las aplicaciones

DCT TCD
Detector por Condutividad Trmica

DIC FID
Detector por Ionizacin en llama

DCE ECD
Detector por Captura de Eletrones

EM MS
Detector Espectromtrico de Masas

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempeo
CANTIDAD MNIMA DETECTABLE Masa de un
analito que genera un pico con altura igual a tres veces el nvel de rudo

SINAL (S)

S =3 N
RUDO (N)

RUIDO cualquier componente de la seal generada por el detector que no es originado por la muestra

Contaminantes en los gases Fuentes de Rudo Impurezas acumuladas en detector Descarga a tierra deficiente

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempeo
LIMITE DE DETECCION Cantidad de analito que
genera un pico con S/N = 3 y w b = 1 unidad de tiempo
Mismo detector, nvel de ruido y masa de analito PERO diferentes anchos de base:

wb Detector (seal generada, ruido) QMD = f Ancho del pico cromatogrfico Definiendo lmite de detecin como: LD es independente de la eficiencia del sistema cromatogrfico !
[QMD] = masa (ng, pg ...) [LD] = masa / tiempo (ng.s-1, pg.s-1 ...)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempeo
VELOCIDAD DE RESPUESTA Tiempo recorrido
entre la entrada del analito a la celda del detector y la generacin de la seal elctrica.

t
Constante de Tiempo, t : tiempo necesario para que la seal llegue a 63,2 % FSD (full scale deflection) luego de la entrada de la muestra
SEAL

63,2% FSD

TIEMPO

La constante de tiempo del sistema (detector + dispositivos de registro de seal) igual o menor a 10% del ancho de banda a media altura (w0.5 ) del pico ms estrecho del cromatograma

t R medido > t R real

t >> w0.5

w medida > w real Deformacin del pico Disminuicin del ruido (damping)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempeo
SENSIBILIDAD Relacin entre el incremento de
rea del pico y el incremento de masa del analito

Factor de Respuesta, S: pendiente de la recta rea del pico x Masa del analito
MASA

REA

Sensibilidad

el mismo incremento de masa causa un mayor incremento de rea

En ausencia de errores determinados: A = rea del pico cromatogrfico m = masa del analito

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempeo
RANGO LINEAL DINAMICO Intervalo de masas
dentro del cual la respuesta del detector es lineal

A partir de cierto punto la seal no aumenta linearmente

REA

MASA El fin de la zona de linearidad puede ser detectado cuando la razn (rea / Masa) diverge en ms de 5 % de la inclinacin de la recta en la regin lineal: 1,05 S
REA / MASA

0,95 S
MASA

DETECTORES
Clasificacin

UNIVERSALES:
Generan seal para cualquier sustancia eluida.

SELECTIVOS:
Detectan solamente sustancias con determinada propiedad fsico-qumica.

ESPECFICOS:
Detectan sustancias que poseen determinado elemento o grupo funcional en sus estructuras

DETECTORES
Detector por Condutividad Trmica
PRINCIPIO Variacin de la conductividad trmica
del gas cuando eluye un analito.
La cantidad de transferencia de calor entre un cuerpo caliente y un cuerpo frio depende de la condutividad trmica del gas en el espacio que separa los cuerpos

Si la condutividad trmica del gas disminuye, la cantidad de calor transferido tambin disminuye - el cuerpo caliente se enfra.

i
5

Celda de Deteccin de DCT: 1 Bloque metlico 2 Entrada de gas de arrastre

3 4

3 Salida del gas de arrastre 4 Filamento metlico ( W-Re) 5 Alimentacin de corriente

elctrica para calentar el filamento

DETECTORES
Detector por Condutividad Trmica
Configuracin tradicional del DCT: bloque metlico con cuatro celdas interligadas en par - por dos pasa el efluente de la columna y por dos el gas de arrastre puro:
CELDAS DE MUESTRA CELDAS DE MUESTRA

CORTE SUPERIOR

CELDAS DE REFERENCIA

CORTE LATERAL

CELDAS DE REFERENCIA

Cuando eluye un compuesto con condutividad trmica menor que la del gas de arrastre puro:
Filamentos de las celdas de la muestra se enfrian
Resistencia elctrica de los filamentos de las celdas de la muestra aumenta Resistencia elctrica de los filamentos de las celdas de referencia se mantiene constante

Filamentos de las celdas de refencia no se enfrian

Diferencia de resistencia elctrica entre los filamentos de la muestra y la referencia

DETECTORES
Detector por Condutividad Trmica
Los filamentos del DCT estn montados sobre un puente de Wheatstone que transforma la diferencia de resistencia cuando la elucin de la muestra produce una diferencia de voltaje:

V Fuente de CC / Bateria (18 V a 36 V, tpico)

F Ajuste de la corriente de los

filamentos

I Medida de la corriente de los filamentos (100 mA - 200 mA, tpico)

B1 B2

Ajuste de cero

R1 R2 Filamentos de las celdas de referencia A1 A2 Filamentos de las celdas de la muestra

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCT
SELECTIVIDAD Se observa seal para cualquier sustancia eluida diferente del gas de arrastre = UNIVERSAL

SENSIBILIDAD / LINEALIDAD Dependiendo de la configuracin particular y del analito: QMD = 0,4 ng a 1 ng con linealidad de 104 (ng - decenas de g)

CAUDAL DE GAS DE ARRASTRE La seal es proporcional a la concentracin del analito en el gas de arrastre que pasa por la celda.

Fc = 0

CAUDAL DE GAS DE ARRASTRE CONSTANTE DURANTE LA ELUCIN

VARIACION DEL CAUDAL DEL GAS DE ARRASTRE DURANTE LA ELUCION

Con DCT, el rea de los picos cromatogrficos es MUy dependiente del caudal del gas de arrastre !!!

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCT
FACTORES DE RESPUESTA Cuanto menor es la
condutividad trmica del analito, mayor es la seal. Los factores de respuesta dependen de la condutividad trmica del analito Cantidades iguales de sustancias diferentes generan picos cromatogrficos con reas diferentes !!!

lX
CHCl3 Mezclas de cantidades equimolares de:
Etano l = 17,5 Clorofrmio l = 6,0 Etanol l = 12,7

Dl

C2H5OH C2H6

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCT
TEMPERATURAS DE OPERACION Cuanto mayor es la
diferencia entre la temperatura de los filamentos y del bloque metlico mayor es la respuesta. Temperatura del filamento, TF: entre 300oC y 350oC. Es funcin de la corriente de alimentacin de los filamentos, i.

TF
Limitaciones:

Seal

- Corrientes excesivas pueden fundir el filamento ( tpicos del filamento = 20 m) - Disminucin del tiempo de vida til de los filamentos (oxidacin por trazas de O2 en gas de arrastre)

Temperatura del bloque, TB: mantenerla tan baja como sea posible

TB
Limitacin:

Seal

- Temperaturas excesivamente bajas pueden provocar a condensacin de analitos en las celdas (error analtico, daos a los filamentos)

DETECTORES
DCT: Aplicaciones
1 Separaciones de cuantificacin de los compuestos que
no generan seal en otros detectores (gases nobles, gases )

Separacin de Gases y Carbohidratos:

Columna: CP Sil 5CB (50 m x 0.32 mm x 5 m) Gas de Arrastre: He @ 3 ml.min1

TCOL: 40C Detector: DCT

1 N2
3 CO2 5 NH3 7 i-C4

2 CH4
4 n-C2 6 n-C3 8 n-C4

2 Por ser un detector no-destructivo, puede ser usado en

CG preparativa o deteccin secuencial con dos detectores en tandem

DETECTORES
Detector por Ionizacin en llama
PRINCPIO Formacin de iones cuando un
compuesto se quema en una llama de hidrgeno y oxgeno

El efluente de la columna se mezcla con H2 y O2 y se quema. Como en una llama de H2 + O2 no existen ones, no conduce corriente elctrica.

Cuando un compuesto orgnico eluye, l tambin se quema. Como en su combustin se forman ones, la llama pasa a conducir la corriente elctrica

DETECTORES
Detector por Ionizacin de llama
Qumica de la llama de Hidrgeno:
Incandescencia

Estructura de la llama tres regiones bsicas

Reaccin

Combus tin
Regin de combustin Mezcla de los gases, precalentados, inicio de la ruptura de las molculas de H2, O2 y de los analitos.

Zona de reaccin Reacciones exotrmicas con produccin y/o consumo de radicales H, O, OH, HO2 (provenientes del H2), CH e C2 (provenientes del analito) e ones CHO+ (analito). Zona de incandescencia Emisin de luz por decaimiento de especies excitadas: OH (luz UV), CH e C2 (visble).

Combustin de sustancias con uniones C-H Combustin de H2

CH + O CHO+ + e1 on formado de cada ~105 tomos de C quemados

Apenas se forman radicales !!!

DETECTORES
Detector por Ionizacin de llama
SELECTIVIDAD Selectivo para sustancias que contienen uniones C-H en su estructura qumica.
(como virtualmente todas las sustancias analizables por CG son orgnicas, en la prctica el detector por ionizacin de llama es UNIVERSAL)

Compuestos que NO producen respuesta:

Gases nobles H2, O2, N2 CO, CO2, CS2 CCl4, perhalogenados NH3, NxOy SiX4 (X = halgeno) H2O HCOOH, HCHO *

DIC

CH4 CO2 O2

DCT

N2

SENSIBILIDAD / LINEALIDAD QMD tpicas = 10 pg a 100 pg com linealidade entre 107 e 108 (pg a mg)

DETECTORES
Caractersticas Operacionales de DIC
FLUJO DE GASES Segn el gas de arrastre, las variaciones de alimentacin de aire (comburente) e hidrogeno (combustble) deben ser optimizadas.
Grficos Seal x Flujo de Gases tpicos:

SEA L

AR

H2

150

300

450

600

15

30

45

60

La seal se mantiene aproximadamente constante en un amplio rango de flujos de aire e H2

VARIACIONES EN LOS FLUJOS DE AIRE E H2 AFECTAN APENAS MARGINALMENTE LA SEAL = MAYOR REPRODUTIBILIDAD Y REPETIBILIDAD

DETECTORES
Caractersticas Operacionales del DIC
TEMPERATURA DE OPERACION El efecto de la temperatura sobre la seal del DIC es despreciable. TRATAMENTO DE LA SEAL Por causa de la baja magnitud de la corriente elctrica generada (pA a nA) sta debe ser amplificada para poder ser registrada.
2 3 Diagrama eletrnico simplificado de un DIC 1 4

Llama / Colector
Voltajes de operacin de

2 Batera o Fuente de CC
no ms de 200 V a 300 V

Debe amplificar una seal y convertir una corriente variable en un voltaje variable (pA mV).

Amplificador Electromtrico

4 Salida de Registro de Seal

DETECTORES
Caractersticas Operacionales del DIC
FACTORES DE RESPUESTA El factor de respuesta de
determinado compuesto es aproximadamente proporcional al nmero de tomos de carbono. La presencia de heteroelementos diminuye el factor de respuesta.

Nmero Efectivo de Carbonos (NEC) Preve con ~20% de

aproximacin el factor de respuesta de un compuesto.
tomo C aliftico C aromtico C olefinco C carbonila O lcool prim. Cl aliftico X +1,00 +1,00 +0,95 +0,00 -0,60 -0,12

(X = Contribuicin de cada tomo al NEC)

Mezcla con cantidades equimolares de: C2H6 NEC = 2,00 C2H5OH NEC = 1,40 CH3CHO NEC = 1,00

DETECTORES
Detector de Nitrgeno - Fsforo
Modificacin de un DIC altamente selectiva para compuestos orgnicos nitrogenados y fosforados
cuenta de vidrio que contiene sal de metal alcalino:

RbCl (normal), KCl Rb2SO4

QMD = 0,4 pg a 10 pg (N) y 0,1 a 1 pg (P)

Pesticidas Triaznicos usando DNP:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Desetilatrazina Desisopropilatrazina Atraton Atrazina Trietazina Secbumeton Sebutilazina Simetrin Dipropretrina Dimetametrina Metroprotrina

(100 pg cada)

DETECTORES
Detector por Captura de Electrones
PRINCIPIO Supresin de un flujo de electrones
lentos causada por la absorcin de stos por especies electroflicas Un flujo contnuo de electrones lentos se establece entre un nodo (fuente radioativa b -emisora) y un ctodo.

Al pasaje de una substancia electroflica algunos electrones son absorbidos, resultando una supresin de corriente eltrica.

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrones
1

1 Anodo (fuente radioativa b - emisora) 2

Salida de gases

3 Ctodo 5
Columna cromatogrfica

4 Cavidad

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrones
Mecanismo de Captura de Eletrones

Generacin de electrones lentos por la interaccin entre la radiacin b, molculas del gas de arrastre G y molculas de bloqueador Q b - + G G + + e - + e* energia b - + G G* + Q G + e - + Q energia

Los electrones lentos son capturados por la especie eletroflica AB AB + e - AB - + energa La disminucin de corriente elctrica que fluye por la celda de deteccin es proporcional a la concentracin a de la especie absorbente del gas de arrastre

Ib corriente de repuesta Ie corriente en la elucin del analito K constante de captura

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCE
FUENTE RADIOACTIVA Electrones de alta energa (rayos b ) que se emiten desde una lmina delgada que contiene Ni o H radiactivos
Empleo universal en DCE comerciales:
3H

(b-, 0,02 MeV)

63Ni

(b-, 0,06 MeV)

Con la forma de Ta3H3

Usado como 63Ni 0

Mayor linearidad

Mayor sensibilidad Tdet debe ser < 225oC

til hasta ~400oC

El 63Ni es el
preferido en equipamientos modernos

- Mayor durabilidad (t1/2 = 100 a x 12 a para 3H) - Mayor estabilidad trmica - Menor riesgo de uso (radioactividad)

Raramente usados:

85Kr, 90Sr, 99Tc, 147Pm, 241Am, 226Ra

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCE
GAS DE ARRASTRE El funcionamiento del DCE es muy dependiente de la natureza del gas de arrastre MAS USADOS:

N2 Ar + 5% CH4

Generan electrones lentos cuando son bombardeados con b -

El gas debe ser lo ms puro posible!!! (trazas de H2O y O2 comprometen la seal del DCE)

La adsorcin de contaminantes sobre los electrodos causa deformacin en los picos

FLUJO DEL GAS DE ARRASTRE La seal depende directamente del flujo de gas en el detector

Seal

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCE
SENSIBILIDAD / LINEAlIDAD QMD = 0,01 pg a 1 pg (organoclorados), linearidad ~ 104 (pg a ng)

10 fg Lindano (C6H6) -ECD HP-6890

~250 fg cada analito

PESTICIDAS 1 tetracloro-m-xileno 2 a - BHC 3 Lindano 4 Heptachlor 5 Endosulfan 6 Dieldrin 7 Endrin 8 DDD 9 DDT 10 Metoxychlor 10 decaclorobifenila

EL DCE ES EL DETECTOR DE ELECCIN PARA ANLISIS DE TRAZAS DE ORGANOHALOGENADOS Y SIMILARES

DETECTORES
Caractersticas Operacionales DCE
SELECTIVIDAD / FACTORES DE RESPUESTA Valores de S maximizados para compuestos electroflicos S tpicos (clorobenzeno: S = 1)
hidrocarburos y steres alifticos, dienos

alcoholes, cetonas y aldehdos alifticos, aminas, nitrilos, mono - Cl, mono - F

enoles, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F tri - Cl, alquil - Pb, anhidridos mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS2 di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 - dicetonas, fumaratos, organo - Hg

I > Br > Cl > F Comparandose organoalogenados: a>b>g Terc > Sec > Prim trans > cis Tri > Di > Mono

ANLISIS CUALITATIVO
Conceptos Generales
Identificacin individual de las especies presentes en la muestra Determinacin de la identidad de la muestra propiamente dicha

Aplicaciones cualitativas de CG

Fuentes de Informacin Cualitativas

RETENCIN Uso de datos de retencin de un analito
para su identificacin

DETECCIN Detectores que generan informacin

estructural sobre las sustancias eludas

Para un anlisis cualitativo confiable por CG se recomienda la combinacin de datos provenientes de por lo menos dos fuentes

ANLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retencin
Interacciones analito / FE

tR = f

Presin de vapor del analito Condiciones operacionales (TCOL, FC ...)

Fijadas las condiciones operacionales, el tiempo de retencin ajustado de un analito es una constante
MUESTRA

PATRN

Comparacin de cromatogramas de la muestra y de una solucin patrn del analito buscado

ANLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retencin
La identificacin por tR es poco confiable: Dependencia con FC y TCOL Variaciones en estas condiciones afectan sensiblemente los tR
VARIACIN DE 1% EN EL tR

DTCOL = 0,1% DFC = 1%

Sobrecarga en la columna Aumento excesivo en la masa de material eludo deforma el pico cromatogrfico y altera su tR

Saturacin de la columna cromatogrfica con aumento de la masa eluda provoca cada frontal en el pico

MASA

ANLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retencin
Comparacin de tR usando agregado (spiking) en la muestra del analito sospechado: aumento en la confiabilidad de identificacin.

Muestra compleja: incerteza en los tR medidos puede llevar a una identificacin errnea

Comparacin con cromatogramas de la muestra con el agregado del analito de inters permite una identificacin ms confiable del mismo

ANLISIS CUALITATIVO
ndice de Retencin de Kovts
FUNDAMENTO Los tR isotrmicos para una serie homloga de compuestos dependen logaritmicamente del nmero de tomos de carbono de la cadena.

Separacin isotrmica de una mezcla de n-alcanos (n-C4, n-C5, ... n-C16)

Un grfico de log(tR) en funcin del nmero de tomos de carbono del analito nC es LINEAL

ANLISIS CUALITATIVO
ndice de Retencin de Kovts
El ndice de retencin de Kovts I para un analito se define por:

tR (A) Tiempo de retencin ajustado del analito A tR (N) Tiempo de retencin ajustado de n-alcano con N carbonos tR (n) Tiempo de retencin ajustado de n-alcano con n carbonos (n = N + 1)

Interpolacin logartmica de los

tR

Ej.: un analito con I = 874 tendra un tiempo de retencin ajustado equivalente al de un n-alcano hipottico con una cadena de 8,74 tomos de carbono

ANLISIS CUALITATIVO
ndice de Retencin de Kovts
REPETITIBILIDAD - REPRODUCIBILIDAD Los efectos de TCOL y FC en los ndices de Kovts son pequeos

ANALITO
CHCl3 CH3CH2OH CH3CHO CH3(CO)CH3

DI/DT
+0,02 % -0,12 % -0,05 % -0,04 %

Dependencia de I para algunas sustancias en una columna apolar en el rango de TCOL = 70oC a TCOl = 130oC

La identificacin por ndices de retencin es ms confiable que comparaciones basadas en tR

NDICE DE RETENCIN DE KRATZ Para programacin lineal de temperatura la relacin entre tR y nC es lineal: clculo en los ndices de retencin se modifica

ANLISIS CUALITATIVO
Retention Time Locking (RTL)
PRINCIPIO En cromatgrafos con: controles pneumticos y trmicos con microprocesadores, inyectores automticos y columnas cromatogrficas de calidad excepcional es posible lograr alta repetibilidad de los tR
CORRIDA #1 TCOL (1) CORRIDA #2 TCOL (2)

FC (1)
Columna A

FC (2)
Columna B

Los software RTL (Hewlett-Packard) automaticamente ajustan las condiciones operacionales en un segundo CG para reproducir los tR obtenidos en un primer equipamento

Cromatogramas obtenidos en diferentes equipamientos y columnas con condiciones operacionales de la segunda corrida ajustadas por el software de RTL

ANLISIS CUALITATIVO
Mtodos de Deteccin Cualitativos
Mtodos de deteccin que aportan informaciones cualitativas sobre los analitos eludos:

Cromatografa Gaseosa con Deteccin Espectromtrica de Masas (CG-EM)

Cromatografa Gaseosa con Deteccin Espectromtrica por Emisin Atmica (CG-EA)

Cromatografa Gaseosa con Deteccin Espectromtrica por Absorcin en el Infra-rojo (CG-EIR)

Identificacin confiable cuando se combinan a tcnicas de identificacin basadas en retencin

ANLISIS CUALITATIVO
Espectrometra de Masas
PRINCIPIO La muestra se fragmenta y ioniza en un patrn caracterstico de la especie qumica. 1 Molculas de la muestra son bombardeadas por
electrones (electron impact = EI) o ones (chemical ionization = CI): ABCDE + e- ABCDE.+ + 2 e-

2 El n formado se fragmenta: ABCDE.+ AB. + CDE+ ABCDE.+ AB+ + CDE. ABCDE.+ A+ + BCDE.
3
Los fragmentos inicos formados son separados magneticamente de acuerdo con sus masas moleculares y contados:

ABUNDANCIA

El grfico del nmero de ones formados en funcin de la razn Masa / Carga de los ones es el ESPECTRO DE MASAS del analito MASA / CARGA

ANLISIS CUALITATIVO
Espectrmetro de Masas
1 3

Cmara de Ionizacin Los electrones generados por

un filamento enriquecido bombardean la muestra. Los fragmentos ionizados (carga +1) son repelidos por el electrodo positivo y conducidos al separador magntico.

2 3 4

Salida de Vaco

Todo el interior del EM debe estar con

alto vaco. La accin del campo magntico deja ones con determinada relacin Masa / Carga atravesar esta zona del equipo. Una vlvula fotomultiplicadora o un fotodiodo genera una seal elctrica proporcional al nmero de ones que incide sobre el elemento.

Separador Magntico

Detector

ANLISIS CUALITATIVO
Espectro de Masas

20

40

60

80

100

120

m/Z
- CO

m/Z = 80

m/Z = 118

- (CO + H)

m/Z = 79

m/Z = 90

ANLISIS CUALITATIVO
Acoplamiento CG - EM
Interfaz cromatgrafo - espectrmetro:

CG

Separador Molecular EM El gas de arrastre liviano (He) difunde ms rapidamente que el analito y tiende a ser drenado para el vacio.

Vacio