Mutao e Reparao do DNA

Mutao e Reparao do DNA

Aspectos Conceituais e Rotas Metablicas

Aspectos Conceituais e Rotas Metablicas

Prof. Henrique Santana Costa, M.Sc. Prof. Antonio Mrcio Teodoro Cordeiro Silva, M.Sc.

Mutao
Mutaes modificao sbita e hereditria no conjunto gnico de um organismo no explicvel pela recombinao da variabilidade gentica pr-existente. Mutante organismo possuidor de uma forma alterada como resultado da presena de uma mutao.

# Tipos
aneuploidias mudanas no nmero cromossmico. aberraes cromossmicas cromossomos. mudanas grosseiras na estrutura dos

mudanas dos genes individuais.

1. Atualmente, o termo mutao tem sido utilizado quando da presena de alteraes detectadas em nvel de genes individuais.

Mutao

Mutao
# Geralmente, organismos portadores de uma mutao num determinado gene apresentam problemas em sua sobrevivncia (sendo, assim, eliminados por seleo natural). # Contudo, nem toda mutao resulta numa conseqncias deletria para seu portador. # mutao fonte bsica de toda variabilidade gentica (matria-prima para a evoluo) Sem a mutao, todos genes existiriam apenas em uma forma.

mutaes espontneas resultam de funes celulares normais ou interaes aleatrias com o ambiente.

podem ser aumentadas pelo tratamento com determinados compostos (agentes mutagnicos mutaes induzidas)

atuam diretamente no DNA.

Mutao
Sntese de Protena

Mutao pode alterar a sntese protica

Mutaes
Classificao Geral
Mutao Cromossmica: Nmero ou Estrutura Mutaes Gnicas: Genes individuais

Mutao: Bom ou Ruim?

A mutao a fonte bsica de toda variabilidade gentica, fornecendo a matria-prima para a evoluo

Processo Evolutivo
Mutao como fonte de variabilidade
1. Recombinao: Rearranjos Novas combinaes 2. Seleo Natural Preserva as combinaes mais adaptadas 3. Ausncia de Mutao Genes com apenas uma forma

Classificao das Mutaes

Quanto Natureza
1. Mutao espontnea 2. Mutao induzida

Mutagnese x Clastognese x Teratognese x Carcinognese

Mutaes Cromossmicas
Euploidia
1. 2. 3. 4. Conjunto de cromossomo de uma espcie

Monoploidia: n cromossomos Diploidia: 2n cromossomos Triploidia: 3n cromossomos Poliploidia: mais de dois conjuntos

Aneuploidia

Nmero de cromossomos difere da espcie

1. Monossomia: 2n 1 2. Trissomia: 2n + 1 3. Nulissomia: 2n 2

Mutao
# Mutao de ponto modificao num nico par de base (substituio, adio ou deleo) mau funcionamento do sistema replicativo mau funcionamento do sistema de reparo interferncia qumica direta sobre uma das bases do DNA

# Mutao letal condicional letal num determinado ambiente (condies restritivas)

Classes
Mutantes auxotrficos incapazes de sintetizar um metablito essencial (aminocido, purina, pirimidina, etc.)

crescem e se reproduzem quando o metablito fornecido pelo meio (condio permissiva) no crescem quando o metablito est ausente (condio restritiva)

Mutao

mutantes sensveis temperatura crescero numa determinada temperatura

aumento da labilidade ao calor ou ao frio do produto gnico mutado.

mutantes sensveis ao supressor viveis quando um segundo fator gentico (supressor) est presente - mas inviveis na ausncia deste.

# Mutaes transmitidas descendncia clulas germinativas # Mutaes perpetuadas em clulas que descenderam da clula original na qual a mutao ocorreu (podendo no afetar o organismo inteiro) clulas somticas

Rearranjos Cromossmicos
1. Inverses: Paracntricas ou Pericntricas

Rearranjos Cromossmicos
2. Deleo: Terminal ou Intersticial

Rearranjos Cromossmicos
3. Translocao: Recproca ou Robertisoniana

Rearranjos Cromossmicos
4. Duplicao x Replicao

Mutantes em nvel molecular

modificaes tautomricas flutuaes qumicas decorrentes de mudanas nas posies dos tomos (purinas, pirimidinas, grupamento amino, anel nitrogenado, etc.)

alteram o pareamento de bases normal. # Envolvem a substituio de um par de bases por outro tipo mais comum de mutao

# Transio substituio de uma purina por outra purina, ou de uma pirimidina por outra pirimidina. # Transverso substituio de uma purina por uma pirimidina ou vice-versa.

mutaes que modificam a estrutura da leitura envolve a adio ou deleo de um ou alguns pares de bases.

alteram a estrutura de leitura de todas as trincas de pares de bases no gene depois da mutao.

Mutao Molecular
Modificaes Tautomricas

Mutao em Nvel Molecular

Transio

Transverso

AT CG

TA GC

AT
CG

TA
GC

Taxas de Mutaes
procariotos 10-5 a 10-6 evento/locus/gerao (mutao espontnea) eucariotos estimativa semelhante encontrada nos procariotos.

# mutaes silenciosas sem efeito aparente # Hotspots stios de pares de bases mais susceptveis mutao.

Envolvem a troca de bases do DNA mas no causam a troca do aminocido presente na protena correspondente. Levam troca do aminocido, mas a substituio no afeta a atividade da protena (mutaes neutras).

Mutao em Nvel Molecular

Mutao em Nvel Molecular

Alterao do Quadro de Leitura (Frameshift)

Mutao em Nvel Molecular

Deleo

Mutao em Nvel Molecular

Insero

Mutao em Nvel Molecular

Sentido Trocado (Missense)

Mutao em Nvel Molecular

Sem Sentido (Nonsense)

Mutao em Nvel Molecular

Expanso de Repetio

Radiao
poro do espectro eletromagntico que contm comprimentos de onda menores e de maior energia que a luz visvel (0,1m). Tipos

ionizante raios X, raios gama e raios csmicos (teis no diagnstico mdico pelo fato de poderem penetrar nos tecidos vivos). no-ionizante luz ultravioleta.

No processo de penetrao, a radiao ionizante colide com tomos da matria causando a liberao de eltrons (formando radicais livres positivamente carregados ons). Quimicamente mais reativos quando comparados tomos em seu estado estvel normal.

# a reatividade aumentada dos tomos presentes nas molculas de DNA a base dos efeitos mutagnicos da luz ultravioleta e da radiao ionizante.

Mutao por Radiao

Radiao ionizante no envolve uma extenso de tempo. # a mesma dosagem de irradiao pode ser obtida por um longo perodo de tempo, ou uma alta intensidade num curto perodo.

# mutaes de ponto diretamente proporcionais dose de irradiao. # Teoria da cintica de coliso nica toda ionizao tem uma probabilidade de induzir uma mutao.

Mutao por Radiao

Radiao ionizante Efeito direto

Efeito indireto Radiao ionizante H2O H + OH

Acidentes Radioativos

Aberraes Estruturais
Caritipo - Metfase

Mutao por Radiao

Radiao no-ionizante (luz ultravioleta) no possui energia suficiente para induzir ionizaes.
# so absorvidos por purinas e pirimidinas (tornando-se mais reativas). multicelulares atingem apenas camadas de clulas superficiais. unicelulares potente agente mutagnico Formao de hidratos de pirimidina e dmeros de pirimidinas. # a relao entre a taxa de mutao e a dose de UV muito varivel, dependendo do tipo de mutao do organismo e das condies empregadas.

Mutao por Radiao

Mecanismos de reparo do DNA

Um mutante sobrevive quando sua troca gentica no prejudicial ou, mais raramente, benfica.

A maioria das mutaes, contudo, so desvantajosas impedindo a sobrevida celular.

mecanismos de reparo revertem os efeitos de processos mutagnicos artificiais ou naturais sob o DNA.

muitos dos danos sofridos pelo DNA podem ser reparados porque a informao gentica preservada em ambas as fitas da dupla-hlice.

a informao perdida em uma fita pode ser recuperada atravs da fita complementar

APLICAES PRTICAS DAS MUTAES

Apesar da maioria das mutaes tornarem o organismo menos adaptado e serem, portanto, desvantajosas, h a possibilidade das mesmas desenvolverem novas caractersticas desejveis.

Mutantes induzidos de cevada, trigo, aveia, soja, tomate podem melhorar as linhagens cultivadas.

resistncia ferrugem, maior produo, maior quantidade de protena, sementes sem casca, ente outro.

elucidam as vias pelas quais os processos biolgicos ocorrem (isolamento e estudo das mutaes nos genes que codificam enzimas envolvidas nas mais diversas atividades metablicas)

disseco de processos biolgicos

Reparao do DNA
Tipos de Reparao do DNA

1. Reparao por fotorreatividade enzimtica

2. Reparao de bases alteradas

3. Reparao por exciso de base 4. Reparao por exciso de nucleotdeos 5. Reparao de bases malpareadas 6. Sistema de reparao por resgate

Reparao do DNA
Reparao por Fotorreatividade Enzimtica
# dmeros de pirimidina impedem a replicao e a expresso gnica Fotoliase catalisa uma 2 reao fotoqumica, na presena de luz visvel, desfazendo a mutao e refazendo as bases pirimdicas individuais.

ETAPAS 1 reconhecimento da enzima ao dmero na ausncia de luz. 2 aps a absoro de luz, energia fornecida para a converso do dmero em monmeros de pirimidina. 3 dissociao da enzima do DNA.

Reparao do DNA
Reparao por Fotorreatividade Enzimtica
Fotorreativao
1. Fotoliase reconhece e se liga ao dmero 2. Absoro de luz Converso em monmeros

Reparao do DNA
Reparao de Bases Alquiladas
Ao de enzimas especficas: O6-Metilguanina-metiltransferase

CH3-Cys-Enzima

No h meios de recuperar a enzima metilada (necessidade de novas enzimas para cada grupamento metil removido).

Reparao do DNA
Reparo por exciso
# A remoo de uma base defeituosa (ou no habitual) pode ocorrer a partir da:

clivagem da ligao base-acar (exciso de base) inciso endonucleoltica nos dois lados da leso liberao de nucleotdeos preenchimento da regio pela ao da DNA-polimerase I e posterior ligao

Reparao do DNA
Reparao por exciso de base
# A citosina do DNA desaminada espontaneamente sendo, portanto, percebida pela uracil. evento mutagnico potencial

formao de filamento apresentando pares de bases errneos (AU no lugar de GC)

Etapas de reparo
1. Hidrlise da ligao glicosdica entre uracil e as molculas de desoxirribose pela enzima uracil-DNA-glicosilase 2. Liberao da base nitrogenada errnea (formao do stio AP)

3. Exciso da cadeia em regies adjacentes base perdida pela enzima AP endonuclease

Reparao do DNA
Reparao por exciso de base
Etapas de reparo 1. Hidrlise da ligao glicosdica entre uracil e as molculas de desoxirribose pela enzima uracil-DNA-glicosilase 2. Liberao da base nitrogenada errnea (formao do stio AP) 3. Exciso da cadeia em regies adjacentes base perdida pela enzima AP endonuclease 4. Insero de citosina no local mutado pela enzima DNA-polimerase I 5. Ligao da fita corrigida pela enzima DNA-ligase

Reparao do DNA

Reparao do DNA
Reparao por Exciso de Base

Reparao do DNA
Reparo por exciso de nucleotdeos
Um dos mais importantes e gerais mecanismos de reparo (REN)

ETAPAS
1. Reconhecimento da leso 2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso e a alguma distncia desta 3. Exciso do segmento (oligonucleotdeo) contendo a leso 4. Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita no-danificada como molde 5. Ligao

# reao, a princpio, livre de erro

Reparao do DNA
Reparao por Exciso de Nucleotdeo (REN)
1. Reconhecimento da leso 2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso 3. Exciso do seguimento contendo a leso 4. Sntese do novo seguimento de DNA e Ligao

Reparao do DNA
REN: Sistema Uvr (E. coli)
ATP

Helicase 5 3

3 (4 a 5nt) 5 (8nt)

Exciso de 12 a 13nt UvrD

Enzimas de correo de erro

Algumas bases incorretamente pareadas escapam da correo realizada pela DNApolimerase

# Remoo de bases mal pareadas Qual das fitas contm o erro? Qual das bases a errada? Um dos mais importantes e gerais mecanismos de reparo (REN) enzima de correo de erro ETAPAS 1. Reconhecimento da leso 2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso e a alguma distncia desta 3. Exciso do segmento (oligonucleotdeo) contendo a leso 4. Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita no-danificada como molde 5. Ligao # sinal que direciona o sistema de exciso do erro exclusivamente para a fita recm-sintetizada seqncias GATC prximas ao erro

Reparao do DNA

Sinalizao por metilao de stios especficos

Reparao do DNA
1. Enzima de correo de erro liga-se seqncia GATC no modificada e ao par de bases mal pareadas da mesma fita de DNA.

2. Enzima de correo de erro remove o segmento de DNA que inclui o erro da fita que contm a seqncia GATC no metilada.

3. DNA-polimerase substituindo a correta.

preenche a fenda, base mal pareada pela

# Modificaes na adenina da seqncia GATC por metilases faro com que a enzima de correo no mais atue (no ocorrendo a exciso).

Reparo sujeito ao erro

Existem ocasies em que o dano no DNA to extremo que no h maneira de os mecanismos celulares de reparo corrigirem de forma precisa o erro

perda completa de um par de bases

# Qual base deve ser inserida no local lesado?

Sistema de Reparo Sujeito ao Erro

qualquer uma das bases inserida no local lesado a fim de garantir a continuidade do processo replicativo # possvel indutor mutagnico (3/4 75%) Ainda assim, mais vantajoso para a clula a incorporao de uma base errada do que no replicar mais.

Reparao do DNA
Reparao de Bases Malpareadas
N6-Metiladenina (GATC)

Padro de metilao

Replicao

Diviso Celular Metiltransferase de Manuteno

Metilao

Reparao do DNA
Reparao de Bases Malpareadas: Sistema Mut
1. MutS pb malpareado 2. Reconhece stio do erro 3. MutL se liga a MutS 4. Deslizamento at GATC (ATP) 5. MutH Reconhece GATC 6. Cliva: GATC at o malpareamento 7. Remoo da fita clivada (SSB)

8. Sntese e ligao da nova fita

Reparao do DNA
Sistema de Reparao por Resgate
1. Dano impede a replicao 2. Cpias com lacuna no stio lesado 3. Resgata-se a seqncia da fita normal 4. A lacuna da fita lesada preenchida 5. A lacuna da fita normal repolimerizada

Concluso
Mutao: Alterao do cdigo gentico Efeito benfico x Efeito malfico Mutaes cromossmicas numricas/estruturais Mutaes gnicas (Nvel molecular) Mecanismos de reparao de erros Sistemas enzimticos complexos que removem vrios tipos de erros Manuteno da integridade do DNA