CENTRO UNIVERSITRIO UNA

INSTITUTO POLITCNICO CURSO: ENGENHARIA QUMICA

Engenharia Bioqumica.
Processos de Fermentao Celular

Prof(a) Bernadete de Souza Santos. bernadete.santos@prof.una.br

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Fermentao
Produo de energia sob a forma de ATP = BIOENERGIA fermentao ou processo fermentativo caracteriza qualquer transformao intermediada por um micro-organismo atravs de uma sequencia de reaes bioqumicas. Assim, so considerados, tambm, processos fermentativos, as transformaes envolvendo respirao microbiana, biossntese, fotossntese e respirao com substratos inorgnicos. (BARROS, 2002, p. 53)

1. MICRO- ORGANISMOS INDUSTRIAIS

Entre os microorganismos com aplicao industrial em processos fermentativos, incluem-se, principalmente, as bactrias, os bolores ou fungos filamentosos e as leveduras ou fungos unicelulares. (BARROS, 2002, p. 48). Para a execuo com sucesso de um processo fermentativo, necessrio que sejam respeitadas as caractersticas do agente fermentativo. Dependendo de cada grupo, gnero, espcie e linhagem microbiana, tanto em termos de crescimento quanto de formao de produtos, haver a necessidade da formulao de um meio de cultura com a adequada proporo de nutrientes. (BARROS, 2002, p. 48)

2. PRINCIPAIS FASES DE UM PROCESSO FERMENTATIVO

Preparo do Inculo: inculo, p-de-cuba ou p-defermentao um volume de suspenso de microorganismo de concentrao adequada capaz de garantir, em condies econmicas, a fermentao de um dado volume de mosto. Para que se obtenha um inculo com capacidade produtiva elevada, deve-se dar condies para que o microorganismo desejado seja propagado, que incluem desde sua manuteno at a propagao propriamente dita. (SCHMIDELL, 2001, p. 194)

2.1.Preparo do inculo
O preparo do inculo consiste de uma srie de passos at ser adicionada ao meio do fermentador principal, para iniciar a fermentao. 1. partir de culturas puras estocadas em laboratrio e aumentar gradativamente o volume da suspenso microbiana, atravs de transferncias sucessivas para frascos maiores. 2. Micro-organismos utilizados numa batelada so recuperados por centrifugao ou filtrao, tratados para a eliminao de contaminantes, e reutilizados na batelada seguinte. 3. A opo pela forma de preparo o inculo depende de cada processo. Se um micro-organismo muito suscetvel a mutaes ou alteraes de comportamento, ou ainda, se o nvel de contaminao por agentes externos da planta industrial for muito elevado, a reutilizao do cultivo deve ser evitada. (BARROS, 2002, p.58 - 59)

2.2. Volume do inculo

O volume de inculo introduzido no fermentador de produo est comumente ao redor de 10% de sua capacidade til. (SCHMIDELL, 2001, p. 195)

3. Matrias primas do meio de cultivo industrial

Na indstria o meio de cultivo chamado de mosto ou meio de fermentao. Nutrientes: a) Fontes dos elementos principais C, H, O e N; b) Fonte dos elementos secundrios P, K, S, Mg; c) Vitaminas e hormnios; d) Fontes de traos de elementos, ou seja, requerimentos de elementos em quantidades mnimas para o crescimento microbiano: Ca, Mn, Fe, Co, Cu, Zn

3.1. Substratos
Alguns dos substratos e/ou matrias-primas, possveis para utilizao em cultivos microbianos, so: acares, melaos, soro de leite, celulose, amido, resduos como liquor sulftico e gua de macerao de milho, metanol, etanol, alcanos, leos e gorduras, etc. (SCHMIDELL, 2001, p. 198

4. Recuperao e purificao de produtos

A recuperao e a purificao dos produtos presentes no biorreator fazem parte dos chamados tratamentos finais em processos biotecnolgicos. Em geral, essa a etapa mais complexa e onerosa de um processo fermentativo. (BARROS, 2002, p. 61)

4.1 Recuperao e purificao

Na recuperao e purificao de produtos so usadas muitas tcnicas comuns nos processos qumicos, dependendo das caractersticas de cada produto e do meio em que ele est contido. Atravs de mtodos fsicos: a sedimentao, a filtrao e a centrifugao.

Fluxograma de um processo fermentativo

BIORREATORES
Denominam-se biorreatores, reatores bioqumicos, ou ainda, reatores biolgicos, os reatores qumicos nos quais ocorrem uma srie de reaes qumicas catalisadas por biocatalisadores, os quais podem ser enzimas ou clulas vivas. Assim, logo de incio, pode-se classificar os biorreatores em dois grandes grupos: (PORTO, 2005)

Grupos de Reatores
Grupo 1: Biorreatores nos quais as reaes ocorrem na ausncia de clulas vivas, ou seja, so tipicamente os reatores enzimticos. Grupo 2: Biorreatores nos quais as reaes se processam na presena de clulas vivas.

Reatores
Em qualquer processo biotecnolgico industrial, o elemento central o reator, pois nele se desenvolvem, devidamente controlados, as transformaes de interesse. Outros dois conjuntos operacionais so importantes:Up Stream e o Down Stream

Conjuntos operacionais
1. Up Stream : tratamento inicial - antecede a
operao no reator e tem a finalidade de colocar no sistema nas condies previamente escolhidas, para que as transformaes, no reator, se desenvolvam. 2. Down Stream: tratamento final: - que englobam a separao e a purificao dos produtos e subprodutos obtidos, bem como o tratamento dos resduos formados.

Observao
Se os agentes das transformaes so microorganismos vivos, de modo que as reaes que se desenvolvem no reator so conseqncias da atividade vital das clulas microbianas, o processo denominado processo fermentativo. Neste caso,o reator , muito frequentemente, chamado de fermentador ou dorna. (BORZANI, 2001, p. 250)

Classificao dos biorreatores

1. quanto ao tipo de biocatalisador (clulas ou enzimas); 2. quanto configurao de biocatalisador (cel/enzimas livres ou imobilizadas); 3. quanto a forma de se agitar o lquido no biorreator.

CLASSIFICAO DOS BIORREATORES

1. Reatores em fase aquosa (fermentao submersa): a) Clulas ou enzimas livres: reatores agitados mecanicamente (STR: stirred tank reactors)reatores agitados pneumaticamente:coluna de bolhas (bubble column)reatores air-lift. b)clulas ou enzimas imobilizadas em suportes: reatores com leito fixo; reatores com leito fluidizado

Reatores de fase no aquosa (fermentao semi-slida)

reatores estticos (bandejas) reatores com agitao (tambor rotativo) reatores com leito fixo reatores com leito fluidizado gs-slido.

Configuraes de biorreatores (a) STR; (b) coluna de bolhas; (c) air-lift; (d) plug-flow; (e) com clulas imobilizadas (leito fixo); (f) com clulas imobilizadas (leito fluidizado); (g) reator com membranas planas; (h) hollow-fiber

PROCESSOS FERMENTATIVOS
a) descontnuo b) descontnuo alimentado: c) semicontnuo: d) contnuo: e) em estado slido

Fermentao Descontnua= Batelada

As fermentaes descontnuas clssicas, ou simplesmente, fermentaes descontnuas, vm sendo utilizadas pelo homem desde a Antiguidade e, ainda hoje, so as mais empregadas para obteno de vrios produtos fermentados. So tambm conhecidas por fermentaes por batelada ou processo descontnuo de fermentao

Operacional da fermentao descontnua

no instante inicial a soluo nutriente esterilizada no fermentador inoculada com microorganismos e incubada, de modo a permitir que a fermentao ocorra sob condies timas. No decorrer do processo fermentativo nada adicionado, exceto oxignio, no caso de processos aerbicos (na forma de ar), antiespumante, e cido ou base para controle do pH. Terminada a fermentao, descarrega-se a dorna, e o meio fermentado segue para os tratamentos finais. Ento, deve-se lavar a dorna, esteriliz-la e recarreg-la com mosto e inculo. (SCHMIDELL, 2001, p. 193 - 204)

Vantagens da fermentao descontnua

Menores riscos de contaminao (se comparados com processos contnuos de fermentao) assim como grande flexibilidade de operao,devido ao fato de poder utilizar os fermentadores para diferentes produtos. Utilizado na indstria de alimentos como iogurte, chucrute, picles, cerveja, vinho entre outros.

Desvantagens da fermentao descontnua

baixos rendimentos e/ou produtividades substrato adicionado de uma s vez no incio da fermentao exerce efeitos de inibio, represso, ou desvia o metabolismo celular a produtos que no interessam.

Fermentao Descontnua Alimentada

escala industrial como em nvel de pesquisa, o processo descontnuo alimentado, tambm conhecido como processo por batelada alimentada ou, simplesmente, fermentao descontnua alimentada. o processo descontnuo alimentado definido como uma tcnica em processos microbianos, onde um ou mais nutrientes so adicionados ao fermentador durante o cultivo e em que os produtos a permanecem at o final da fermentao. (SCHMIDELL, 2001, p. 205 - 218). produo de glicerol, acetona, butanol, cido ltico

Fermentao Semicontnua
Obedece os seguintes passos:
Operao n 1 Aguarda-se o trmino da fermentao. Operao n 2 Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o restante de mosto fermentado. Operao n 3 Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentao igual ao volume de meio fermentado retirado na Operao n 2.

Fermentao Semicontnua
O meio de fermentao adicionado na Operao n 3 encontra, no reator as clulas microbianas existentes no meio fermentado que nele foi mantido. Em outras palavras, o meio fermentado no retirado do fermentador na Operao n 2 seve de inculo ao meio de fermentao adicionado na Operao n 3. Reinicia-se, desse modo, a seqncia de operaes acima descrita, que ser repetida enquanto no houver queda da produtividade do processo

Semi-contnuo
Um processo como o aqui descrito chama-se semicontnuo, porque so intermitentes tanto o fluxo de entrada do meio no reator quanto o de sada de material fermentado. O antigo processo de fabricao de vinagres a partir do vinho, conhecido como processo lento, um exemplo tpico de processo semicontnuo.

Vantagens
possibilidade de operar o fermentador por longos perodos (s vezes, alguns meses) sem que seja necessrio preparar um novo inculo; possibilidade de aumentar a produtividade do reator apenas modificando se o cronograma de trabalho; possibilidade de, uma vez conhecidas as melhores condies de operao, conseguir produtividade significativamente maior do que a obtida em processo descontnuo.

Fermentao Contnua
O processo de fermentao contnua caracteriza-se por possuir uma alimentao continua de meio de cultura a uma determinada vazo constante, sendo o volume de reao mantido constante atravs da retirada contnua de caldo fermentado. A manuteno de volume constante de lquido no reator de primordial importncia, a fim de que o sistema atinja a condio de estado estacionrio ou regime permanente, condio na qual as variveis de estado (concentrao de clulas, de substrato limitante e de produto) permanecem constantes ao longo do tempo de operao do sistema. (SCHMIDELL, 2001, p. 223 - 246)

Vantagens da fermentao contnua

aumento da produtividade do processo, em virtude de uma reduo dos tempos mortos ou no-produtivos; obteno de caldo fermentado uniforme, o que facilita o projeto das operaes de recuperao do produto de interesse; possibilidade de associao com outras operaes contnuas na linha de produo; maior facilidade no emprego de controles avanados; menor necessidade de mo-de-obra.

Desvantagens
maior investimento inicial na planta; possibilidade de ocorrncia de mutaes genticas espontneas, resultando na seleo de mutantes menos produtivos; maior possibilidade de ocorrncia de contaminaes, por se tratar de um sistema essencialmente aberto, necessitando pois, de manuteno de condies de assepsia nos sistemas de alimentao e retirada de meio; dificuldades de manuteno de homogeneidade no reator, quando se trabalha com baixas vazes.

Aplicaes do processo contnuo

exemplo tpico a fermentao alcolica, onde se utiliza normalmente, em escala industrial, o processo contnuo com reciclo de clulas. tratamento biolgico de resduos, em reatores de fluxo ascendente, empregados para o tratamento de uma grande variedade de efluentes industriais, tais como os oriundos de fbricas de cervejas e refrigerantes, de fbricas de laticnios e de indstrias alimentcias de um modo geral. (SCHMIDELL, 2001, p. 223 - 246)

Fermentao em Estado Slido

A fermentao em estado slido pode ser definida como processos que referem-se a cultura de microorganismos sobre ou dentro de partculas em matriz slida (substrato ou material inerte), onde o contedo de lquido (substrato ou meio umidificante) ligado a ela est a um nvel de atividade de gua que, por um lado, assegure o crescimento e metabolismo das clulas e, por outro, no exceda mxima capacidade de ligao da gua com a matriz slida

BIOQUMICA DA FERMENTAO
O metabolismo pode ser definido como o conjunto de transformaes qumicas necessrias para manter as atividades vitais (nutricionais e funcionais) de um organismo. De uma forma simplificada, o metabolismo pode ser dividido em dois tipos: catabolismo, (produo de energia)anabolismo (utilizao de energia produzida)

METABOLISMO
1. catabolismo ou desassimilao tem como finalidade a produo de energia, ocorrendo a degradao de substncias mais complexas para formar outras mais simples; 2. anabolismo ou assimilao utiliza a energia produzida no catabolismo para a biossntese de molculas mais complexas responsveis pela produo e demais atividades da clula.

Consideraes finais
De um modo geral, os micro-organismos so capazes de obter energia para seu desenvolvimento e manuteno a partir de diferentes fontes, como carboidrato, protenas e at, em alguns casos, de substncias inorgnicas. Os diferentes micro-organismos apresentam semelhanas e diferenas com respeito s suas formas de obteno de energia e formao de produtos de biossntese.

Exemplo clssico
no catabolismo, a clula promove a degradao de um certo composto, como carboidratos, obtendo, nesse processo, a energia necessria para sua manuteno e reproduo. Essa energia armazenada na forma de adenosina trifosfato,(ATP), que contm trs ons fosfato. Cada vez que um desses ons liberado, formando adenosina difosfato (ADP), h uma concomitante liberao de energia qumica, que ser usada pela clula. H, portanto, a necessidade de produo de mais ATP, o que torna necessrio o reincio do ciclo.