Mutantes del AgHBs Opciones monoclonales

Qu son los mutantes del AgHBs? Dnde se han encontrado mutantes del AgHBs? Con qu frecuencia se han encontrado los mutantes de escape del AgHBs? Por qu son importantes los mutantes del AgHBs? Opciones monoclonales El Control del Diseo y el Sistema de Calidad

Dogma central de la Biologa Molecular

ADNbc

+ARNmc

Protena

Dogma central de la Biologa Molecular modificado por la virologa moderna

-ARN mc Delta

ADN bc/+ARN mc CMVH

ARN bc Orbi ADN mc Picodna

ADN bc Hep. B *

+ARN mc VHC Hep. A Hep. E (Hep. B)* Retrovirus

Protena

* La Hep. B tiene actividad de transcriptasa inversa

Partcula Dane de la Hepatitis

AgHBs AgHBc AgHBe ADN bc Polimerasa

VHB
De Hunt, et al. 2000. Clinical relevance of hepatitis B viral mutations. Hepatology 31:1037 1044

Qu son los mutantes del AgHBs?

Las mutaciones ocurren naturalmente durante una replicacin viral en la que cambios en la secuencia bsica del cido nucleico pueden conducir a un cambio de los aminocidos en una protena Un resultado comn de estos cambios en el AgHBs es un cambio en el eptopo de la regin inmunodominante del determinante a
Referencias: Coleman, P.F., et al. 1999. Immunoassay detection of hepatitis surface antigen mutants. J. Med. Virol. 59:19 24. Oon, C-J., et al. 1995 Molecular epidemiology of hepatitis B virus vaccine variants in Singapore. Vaccine 13:699 702. Hunt, C.M., et al. 2000. Clinical relevance of hepatitis B viral mutations. Hepatology 31:1037 1034.

Qu son los mutantes del AgHBs?

Los mutantes ms comunes del AgHBs se concentran cerca de los aa 141 a 145. De estas mutaciones, la que ms predomina es la gly-145-arg Las ilustraciones siguientes muestran los cambios en la superficie de este eptopo en aa 145, usando el modelo del AgHBs de Chen, et al. 1996. Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 1997-2001.
Referencias: Coleman, P.F., et al. 1999. Immunoassay detection of hepatitis B surface antigen mutants. J. Med. Virol. 59:19 24. Ijaz, S. et al. Novel immunoassay for the detection of hepatitis B surface escape mutants and its application in liver transplant recipients. J. Med. Virol. 63:210 216.

Gly natural en 145

Arg mutante en 145

Lys natural en 141

Glu mutante en 141

Dnde se han encontrado mutantes del AgHBs?

Se han encontrado en por lo menos tres situaciones:
1. el diagnstico del VHB en personas negativas al AgHBs 2. el fracaso de la vacunacin en neonatos nacidos de madres positivas al AgHBs 3. fracasos inmunoprofilcticos en receptores de trasplantes hepticos ortotpicos (THO)
Referencia: Locarnini, S.A. 1998. Hepatitis B virus surface antigen and polymerase gene variants: potential virological and clinical significance. Hepatology 27:294 297.

Referencias: Locarnini, S.A. 1998. Hepatitis B virus surface antigen and polymerase gene variants: potential virological and clinical significance. Hepatology 27:294 297. Hunt, C.M. 2000. Clinical relevance of hepatitis B viral mutations. Hepatology 31: 1037 1044.

Mutantes del AgHBs que se producen naturalmente y permanecen con el paciente despus del tratamiento con IGHB y/o la vacunacin Se presentan principalmente en casos de fracaso de la vacunacin en neonatos nacidos de madres positivas al AgHBs y de fracaso inmunoprofilctico en receptores de trasplantes hepticos ortotpicos (THO)

Qu son los mutantes de escape del AgHBs?

Con qu frecuencia se han encontrado los mutantes de escape del AgHBs? Se ha informado de los mutantes de
escape del AgHBs y se les ha identificado como tal en la literatura especializada desde 1990 Se ha informado de la aparicin del fenmeno en todo el mundo
Referencias: Carman, W.F., et al. 1990. Vaccine-induced escape mutant of hepatitis B virus. Lancet 336:325 329. Hunt, C.M., et al. 2000, Clinical Relevance of Hepatitis B Viral Mutations. Hepatology 31:1037 1034. Oon, C-J., et al. 1995 Molecular epidemiology of hepatitis B virus vaccine variants in Singapore. Vaccine 13:699 702

Con qu frecuencia se han encontrado los mutantes de escape del AgHBs? Se ha informado de tasas de mutantes
de escape en neonatos vacunados nacidos de madres positivas al AgHBs tan altas como de 4.6 % (16 de 345) Las tasas de reactivacin de la infeccin debido a mutantes de escape de la IGHB en trasplantes hepticos ortotpicos (THO) varan de 8.3%

Referencias: Oon, C-J. et al. 1995. Molecular epidemiology of hepatitis B virus vaccine variants in Singapore. Vaccine 13:699 702. Terrault, N.A., et al. 1998. Incidence and clinical consequences of surface and polymerase gene mutations in liver transplant recipients on hepatitis B immunoglobulin. Hepatology 28:555 561. Protzer-Knolle, U. et al. 1998. Hepatitis B virus with antigenically altered hepatitis B surface antigen is selected by high-dose hepatitis B immune globulin after liver transplantation. Hepatology 27:254 236.

Por qu son importantes los mutantes del AgHBs?

Las variantes de escape a la vacuna en los aminocidos 144/145 pueden establecer una infeccin persistente en los nios. Adems, se ha informado que los receptores de trasplantes con la variante del AgHBs en 144/145 exhiben un resultado clnico menos favorable en cuanto a la supervivencia del injerto luego de un THO que aquellos infectados predominantemente con el VHB natural
Locarnini, S.A. 1998. Hepatitis B virus surface antigen and polymerase gene variants: potential virological and clinical significance. Hepatology 27:294 297.

Por qu son importantes los mutantes del AgHBs?

Kalinina et al. han presentado las primeras pruebas de que los genes mutantes VHB S aislados durante una hepatitis fulminante causaron un defecto severo en la secrecin viral. Este fenmeno podra haber provocado una muerte celular rpida y causado insuficiencia heptica. Gly 145 arg fue una de las mutaciones involucradas en este caso de hepatitis fulminante

Kalinina, et al. 2001. A dominant hepatitis B virus population defective in virus secretion because of several S-gene mutations from a patient with fulminant hepatitis. Hepatology 34:385 394.

Por qu son importantes los mutantes del AgHBs?

La importancia de no detectar los mutantes en 144/145 es evidente desde la perspectiva del diseo de los ensayos diagnsticos del AgHBs
Los resultados negativos falsos pueden complicar o retrasar innecesariamente el diagnstico de una infeccin con el VHB en dos grupos importantes de pacientes

 El Control del Diseo es una subparte del Sistema de Calidad. El Cdigo de Reglamentos Federales 21 CFR - Parte 820 Subparte C - Sec. 820.30 (c), Informacin sobre el Diseo, exige que los fabricantes se aseguren de que un dispositivo cumpla con su uso previsto e incluya las necesidades del usuario y del paciente

Opciones monoclonales El Control del Diseo y el Sistema de Calidad

Referencia: Saw, S.L. y T.C. Aw. 2000. Hepatitis B surface antigen mutant detection on four immunoassay analysers. Clin. Chem. 46 Supl.: A53.

La FDA (Direccin de Alimentos y Frmacos de EE.UU.) ha empezado a solicitar que los fabricantes den informacin sobre la deteccin de mutantes y a proporcionar advertencias en los encartes de los envases en caso de que no se incluyan los mutantes Los clnicos ya estn tratando el tema de los mutantes en la literatura especializada: Saw y Aw han sealado que Ms

Control del Diseo una consideracin importante en la eleccin de un ensayo

AgHBs subtipo ad Gln129-His Pro142-Ser + Gly145-Arg Met133-Leu Thr126-Ser Gly145-Arg Asp144-Ala + Gly145-Arg Thr126-Ser + Gly145-Arg Asp144-Ala Pro142-Leu + Gly145-Arg Tipo natural adw2 AgHBs subtipo ay Control negativo Unidades

Saw, S.L. y T.C. Aw, 2000. Hepatitis B Surface Antigen Mutant Detection on Four Immunoassay Analysers. Clin. Ensayo Ensayo Ensayo Ensayo Muestra de mutante de AgHBsR a 1 ng/mL A B C D Chem. 46 Supl.: A53
0.237 0.182 0.177 0.255 0.214 0.161 0.143 0.135 0.202 0.375 0.337 0.427 0.000 IU/mL 3.52 3.20 4.94 4.18 2.93 3.63 5.27 3.99 5.23 8.08 5.36 4.41 1.09 S/N 3.28 2.61 0.454 3.08 2.78 0.518 0.580 0.601 3.67 0.542 4.37 5.34 0.456 S/CO 4.08 3.50 0.19 3.47 3.05 0.20 0.23 0.16 0.28 0.15 6.51 8.99 0.13 S/CO

 Los eptopos del antgeno de superficie con altos ndices de mutacin se deben evitar al disear ensayos robustos frente a la mutacin Se deben evitar los motivos monoclonales individuales de captura y deteccin, salvo que estn dirigidos a eptopos del antgeno de superficie que tienen tasas bajas de mutacin o mutaciones que no afectan la fijacin de

Opciones monoclonales El Control del Diseo y el Sistema de Calidad

Gly natural en 145

 Los ensayos robustos frente a la mutacin del AgHBs contienen: anticuerpos monoclonales y/o policlonales mltiples para la captura y deteccin o anticuerpos que evitan los eptopos que mutan con frecuencia Los ensayos de confirmacin (neutralizacin policlonal) son slo tan eficaces para detectar mutantes como lo es el ensayo de base

Opciones monoclonales El Control del Diseo y el Sistema de Calidad

 La mutacin del AgHBs ocurre en funcin del virus Ciertas presiones selectivas pueden aumentar el nmero de observaciones de mutantes Se pueden obtener resultados negativos falsos con los sistemas de ensayo que no dan cuenta de las mutaciones del AgHBs El diseo de los ensayos es importante para hacer que los ensayos sean robustos

Mutantes del AgHBs Opciones monoclonales: Resumen