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Cultivo e crescimento de microorganismos

Aula 7

SCA

8/04/2011

Introduo
A

importncia do cultivo;
cultivados em meios que contenham

So

nutrientes;
Deve

ser fornecido o meio fsico apropriado;

Divergncias nas necessidades fsica

O2 necessrio para alguns, mas no para todos

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8/04/2011

Introduo

As condies fsicas devem ser ajustadas;


Quando as necessidades so satisfeitas, vivel cultivar;

Mas ....o comportamento de uma espcie em cultura pura de laboratrio pode no ser igual ao seu crescimento na natureza!

No h fatores limitantes!!!

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Condies fsicas para o cultivo dos micro-organismos


Quatro

condies principais:

Temperatura pH Atmosfera gasosa

e Presso osmtica

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Temperatura

Tem grande influncia no crescimento


Afinal ... Todos os processos de crescimento so afetados pela temperatura

Os micro-organismos podem crescer em uma ampla faixa de temperatura

Os humanos, por exemplo, crescem em torno de 37 C (faixa pequena)

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Temperatura
A

faixa pode ser maior para alguns e menor

para outros

Bacillus subtilis 8 53 C (45) Neisseria gonorrhoeae 30 40 C (10)

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Temperatura
Taxa

de crescimento

Nmero de divises celulares por hora

Geralmente

dobra em temperaturas para cada

aumento de 10C

Comportamento similar as reaes enzimticas

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Temperatura

Temperatura tima de crescimento

Cresce mais rapidamente

Temperaturas importantes

Mnima tima

Cardinais

Mxima

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Temperatura

T. Cardinais:

Podem variar dependendo da estgio de vida do organismo e do contedo nutricional

A temperatura tima no a temperatura mediana entre a mnima e a


mxima.

Ela mais prxima do limite superior Porqu???

velocidade das reaes enzimticas aumentam com o aumento da

temperatura, at certo ponto.

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Temperatura
De

acordo com a temperatura tima

Psicrfilos: crescem em baixas temperaturas (15 20 C)


Bactrias, Maioria

fungos, algas e protozorios

dos marinhos

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Temperatura
...De

acordo com a temperatura tima

Mesfilos: temperaturas moderadas (25-40 C)


Bactrias,

fungos, algas e protozorios ao homem

Patognicos

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Temperatura
...De

acordo com a temperatura tima

Termfilos: altas temperaturas (40 -85 C)


reas

vulcnicas, em mistura de

fertilizantes

nascentes quentes
Maioria

procariota

Produo

rpida de enzimas

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Atmosfera Gasosa

Necessitam de quantidades variadas de gases

Oxignio, dixido de carbono, nitrognio e metano

So divididos em:

Aerbios Facultativos Anaerbios Micro-erfilos

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Aerbios
Requerem

oxignio

Exp.: fungos filamentosos, bactrias do gnero Mycobacterium e Legionella

Uso

de agitadores magnticos para manter a cultura

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Facultativos
Crescem

na presena do ar atmosfrico mas

tambm pode viver em anaerobiose

Leveduras

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Anaerbios
Mortos

pelo oxignio

Micro-aerfilos
Podem

utilizar oxignio em suas reaes qumicas, mas no resistem a nveis atmosfricos

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pH
timo

est como valor mediano


4 < pH >9 e leveduras possuem variao mais

Maioria= Bolores

extensa que as bactrias

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Psicrfilas (12 a 17 graus C) TEMPERATURA

Mesfilas (28 a 37 graus C) Termfilas (57 a 90 graus C)


Termfilas extremas (>100 graus C)

pH

Acidfilas (ph<5) Alcalfilas (pH>10) Aerbicas (patgenos respiratrios e de mucosa), Anaerbicas (trato gastrointestinal e ambiente esporos), Facultativas Bactrias Halfitas

Oxigenao

Salinidade

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Reproduo e Crescimento

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Introduo
Em

meio de cultura a populao mxima pode ser atingida em 24h


= aumento no nmero total de clulas devido a reproduo

Crescimento

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Introduo
Dois

fenmenos

Crescimento ou reproduo das clulas individuais Crescimento ou aumento na populao de uma cultura microbiana

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Introduo

Tempo de gerao: o intervalo de tempo necessrio para que uma clula se duplique.

O tempo de gerao varivel para os diferentes organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos at dias, sendo que em muitos dos organismos conhecidos, este varia de 1 a 3 horas. O tempo de gerao no corresponde a um parmetro absoluto, uma vez que dependente de fatores genticos e nutricionais, indicando o estado fisiolgico da cultura.

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Introduo
Taxa

de crescimento (velocidade especfica de crescimento):

a variao no nmero ou massa microrganismos por unidade de tempo.

de

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A reproduo em Microorganismos eucariticos


Vida

produo de organismos semelhantes


reproduo sexuada e assexuada

Natureza

Assexuada: novas clulas idnticas as originais Sexuada: permite a troca de material gentico (ser nico)

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Reproduo Assexuada
No

envolve a unio de ncleos, cl. sexuais ou rgos sexuais


implica em variao gentica

No Mais

eficiente que a sexuada quando se fala em propagar espcies

*Novos

indivduos so produzidos por uma clula

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Nas bactrias....
Fisso

binria

Uma nica clula parental se divide em duas clulas-filhas idnticas

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Nas bactrias....
Fisso

binria

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MULTIPLICAO BACTERIANA
Fisso Binria Transversa

Cultura Bacteriana duplica a cada 20 minutos Ex: Escherichia coli massa = 1x10 -12 g 48 horas 2144 bactrias / massa = 2,2 x1031 g (4.000 vezes a massa do planeta Terra!!!!!!!!!!!)

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Crescimento Bacteriano Autolimitante

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Reproduo assexuada

Precedida de MITOSE

Forma de diviso nuclear na qual todos os cromossomos da clula so duplicados e os dois novos conjuntos se separam para formar os ncleos-filhos idnticos A clula se divide em duas cada uma recebendo um ncleo A clula-filha tem o mesmo nmero de cromossomos e mesma composio gentica

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Entre as Mitoses
Interfase

Fase de repouso Os cromossomos so duplicados

Mitose

Prfase, metfase, anfase e telfase

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Mitose
Prfase
1. 2.

3.
4. 5. 6.

Cromossomos condensam em estruturas em forma de fita Duplicam-se Unem-se por meio do centrmero Presena do fuso mittico Centrolos movem-se para os plos opostos Desintegrao da membrana nuclear

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Mitose
Metfase
1. 2. 3. 4. 5.

Desaparecimento da membrana nuclear Cromossomos completamente condensados Alinhados na regio equatorial Separao dos cromossomos Incio da movimentao para oposta

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Mitose
Anfase
1. 2.

Estgio mais curto Movimentao dos cromossomos-filhos para lados opostos

Telfase
1. 2. 3.

Formao da membrana nuclear Cromossomo de alonga em fitas Diviso do citoplasma da clula (citocinese)

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Mitose

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Mitose
Resultados

Duas clulas-filhas Recebem o exato nmero de cromossomos Recebem o mesmo tipo de cromossomos

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Mitose
Resultados

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Reproduo Sexuada

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Reproduo Sexuada
Novo

indivduo formado pela fuso de duas

clulas sexuais diferentes

Gametas

Procedentes de dois pais de sexo diferentes fuso dos gametas FERTILIZAO

Clula

resultante Zigoto*

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Reproduo Sexuada

Gmeta Masculino

Gmeta Feminino

Fecundao

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Reproduo sexual
Clulas

corporais comuns

Somticas dobro de cromossomos do gametas Exp.: clula de fgado Espermatozoide - macho vulos - fmea

Clulas

somticas formadas por mitose (2n diplides)

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MEIOSE
A meiose ocorre apenas nas clulas das linhagens germinativas masculina e feminina e constituda por duas divises celulares: Meiose I e Meiose II. Durante esse perodo cada cromossomo se duplica apenas uma vez.

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MEIOSE: Importncia e Finalidades


Reduo

metade.

do

nmero

de

cromossomos

Produo Produo

de gametas em animais. de esporos em plantas.

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MEIOSE
Diviso I Reducional
Profase I Metafase I

Diviso II Equacional
Profase II Metafase II Anafase II Telofase II

Anafase I
Telofase I

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Duplicao do DNA

Div 1: Separao dos cromossomos homlogos.

Div 2: Separao das cromtides irms.

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1 Diviso da Meiose
Importncia

Separao
Dividido

dos cromossomos homlogos

Prfase

1 Metfase 1 Anfase 1 Telfase 1

em:

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Prfase 1
Fase

mais demorada. Muito importante crossing over Condensao dos cromossomos Desaparecimento da carioteca Desaparecimento do nuclolo Duplicao e migrao dos centrolos para os plos da clula.

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Crossing over
Importncia:

Aumento da variabilidade gentica.

Troca

de seqncias de DNA entre cromossomos homlogos.


chamado de recombinao ou permutao gnica.

Tambm

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Cromossomos Homlogos

Quiasma

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SUB-FASES DA PRFASE 1
LEPTTENO
ZIGTENO

PAQUTENO
DIPLTENO DIACINESE

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Leptteno
Os cromossomos condensam-se e tornam-se visveis.

Zigteno
Ocorre a sinapse (pareamento dos cromossomos homlogos)

Paquteno
Ocorre o crossing-over

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Diplteno
Melhor visualizao dos quiasmas (pontos de contato entre as cromtides)

Diacinese
Os cromossomos migram para o equador da clula

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Prfase 1
Leptteno Os cromossomos condensam-se e tornam-se visveis

Zigteno

Ocorre a sinapse (pareamento dos cromossomas homlogos). Ocorre crossing-over troca de informao gentica nos pontos de quiasma. Melhor visualizao dos quiasmas (pontos de contato entre as cromtides). Os cromossomas migram para o equador da clula.

Paquteno Diplteno Diacinese

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Metfase 1
Pareamento

cromossomos homlogos na placa equatorial da clula.

dos

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Anfase 1
Migrao

cromossomos homlogos para os plos da clula.

dos

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Telfase 1
Descondensao

cromossomos

dos

Reaparecimento

do nuclolo e carioteca

Desaparecimento

fibras do fuso

das

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Aps a telofase I ocorre:

Citocinese

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INTERCINESE
Intervalo

entre a 1 e a 2 diviso da meiose.

muito curto e no ocorre outra duplicao do DNA. cromossomo duplicado se separa em dois cromossomos simples.

Cada

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2 Diviso da Meiose

Importncia:
Separao

das cromtides irms

Dividido em:
Prfase

2 Metfase 2 Anfase 2 Telfase 2

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Prfase 2
Duplicao

e migrao dos centrolos para os plos opostos da clula da carioteca e nuclolos dos

Desaparecimento

Condensao

cromossomos

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Metfase 2
Cromossomos

localizados na placa equatorial da clula. do fuso ligadas aos centrmeros das

Fibras

Separao

cromtides irms

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Anfase 2
Migrao

das cromtides irms para os plos opostos da clula.

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Telfase 2
Reaparecimento

carioteca e nuclolo

da

Descondensao

dos cromossomos

Citocinese

diviso citoplasmtica

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Este processo assegura a manuteno do nmero de cromossomas caracterstico de cada espcie, permitindo no entanto uma variabilidade gentica, de gerao para gerao.

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Para as bactrias.....

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Reproduo sexuada

Para as bactrias considerase reproduo sexuada qualquer processo de transferncia de fragmentos de DNA de uma clula para outra. Depois de transferido, o DNA da bactria doadora se recombina com o da receptora, produzindo cromossomos com novas misturas de genes. Esses cromossomos recombinados sero transmitidos s clulas filhas quando a bactria se dividir.

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Reproduo sexuada
A

transferncia de DNA de uma bactria para outra pode ocorrer de trs maneiras:

Transformao Transduo Conjugao

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CONJUGAO

Na conjugao bacteriana, pedaos de DNA passam diretamente de uma bactria doadora, para uma receptora. Isso acontece atravs de microscpicos tubos proticos, chamados pontes citoplasmticas que as bactrias doadoras possuem em sua superfcie.
O fragmento de DNA transferido se recombina com o cromossomo da bactria receptora produzindo novas misturas genticas, que sero transmitidas s clulas filhas na prxima diviso celular.

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CONJUGAO

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TRANSFORMAO
Na

transformao, a bactria absorve molculas de DNA dispersas no meio. Esse DNA pode ser proveniente, por exemplo, de bactrias mortas.
cientistas tm utilizado a transformao como uma tcnica de Engenharia Gentica, para introduzir genes de diferentes espcies em clulas bacterianas.

Os

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TRANSFORMAO

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TRANSDUO

Na transduo, molculas de DNA so transferidas de uma bactria a outra usando vrus como vetores.
Estes, ao se formar, podem eventualmente incluir pedaos de DNA da bactria que lhes serviu de hospedeira. Ao infectar outra bactria, o vrus que leva DNA bacteriano o transfere junto com o seu. Se a bactria sobreviver infeco viral, pode passar a incluir os genes de outra bactria em seu genoma.

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TRANSDUO

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Crescimento bacteriano
Quando

falamos em crescimento microbiano no referimos ao nmero e no ao tamanho das clulas. indica aumento do nmero de clulas ou aumento da massa de uma populao, ou seja, crescimento populacional.

Crescimento

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

Quando

uma bactria semeada em um meio apropriado, nas condies apropriadas, o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica.

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

A Fase LAG:

Fase de adaptao metablica ao novo ambiente; o metabolismo celular est direcionado para sintetizar as enzimas requeridas para o crescimento nas novas condies ambientais encontradas pelas clulas. H pouca diviso celular, os microrganismos esto se adaptando ao meio em que esto crescendo. As clulas aumentam de volume, mas no se dividem. O nmero de indivduos no aumenta nesta fase, podendo at mesmo decrescer. A durao dessa fase depende das condies ambientais nas quais as clulas se encontravam anteriormente. A fase lag ser to mais longa quanto maiores as diferenas de composio do ambiente anterior ou se a populao for constitudo de bactrias esporuladas.

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO


A

Fase LAG:

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

B Fase exponencial (log):

Crescimento exponencial, divises celulares sucessivas, grande atividade metablica. Fase na qual o nmero de clulas da populao dobra a cada gerao. Esta taxa de crescimento no pode ser mantida indefinidamente em um sistema fechado. Aps um determinado perodo de crescimento exponencial, as condies ambientais tornam-se desfavorveis pela escassez de nutrientes essenciais, acmulo de metablitos txicos e limitao de espao.

medida que a disponibilidade de nutrientes diminui as clulas se tornam menos capazes de gerar ATP e a taxa de crescimento se reduz.
A durao da fase exponencial altamente varivel dependendo tanto das caractersticas genticas da bactria quanto das condies ambientais.

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO


B

Fase exponencial (log):

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

C Fase estacionria:

Decrscimo na taxa de diviso celular, onde a velocidade de crescimento = velocidade de morte.

Fase em que a taxa de crescimento diminui significativamente devido s condies limitantes do meio.
As clulas continuam metabolizando e se dividindo, mas parte das clulas torna-se invivel e a taxa de diviso celular muito prxima da taxa de morte celular, o que mantm constante o nmero de clulas viveis na populao. A curva de crescimento atinge um plat. A durao da fase estacionria depende do balano entre a taxa de diviso celular e o nmero de clulas que vo se tornando inviveis (morte celular ou incapacidade de se dividir) devido s condies ambientais tornarem-se progressivamente desfavorveis.

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO


C

Fase estacionria:

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO


D Fase de declnio ou morte:

Condies imprprias para o crescimento, meio deficiente em nutrientes e rico em toxinas, onde as clulas mortas excedem o nmero de clulas vivas. Fase em as clulas perdem a capacidade de se dividir, a taxa de morte celular torna-se maior que a taxa de diviso e o nmero de clulas viveis decresce exponencialmente at a completa extino da populao. Nesta fase muitas clulas assumem formas incomuns. Em bactrias formadoras de esporos sobrevivem mais esporos que clulas vegetativas. A durao desta fase varivel dependendo tanto das caractersticas genticas da bactria quanto das condies ambientais.

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

Fase de declnio ou morte:

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

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Tempo de vida das bactrias


Considerando-se

uma clula isolada, o tempo de vida de uma bactria vai do trmino da diviso celular anterior at o final da prxima diviso.
populao de bactrias existe por tempo indeterminado.

Uma

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Fatores que afetam o crescimento bacteriano

Vrios fatores podem afetar o populao bacteriana, incluindo:


crescimento

de

uma

O tipo de ambiente, Nmero de indivduos na populao, Interaes dinmicas com outras populaes bacterianas, Presena de outros microrganismos predadores,

Fatores qumicos e fsicos tais como disponibilidade de nutrientes essenciais, temperatura, pH, osmolaridade, presso hidrosttica, concentrao de oxignio, luz, radiao ionizante ou ultravioleta, presena de metablitos txicos resultantes do metabolismo das clulas da populao em crescimento ou presena de agentes antimicrobianos tais como bacteriocinas e antibiticos.

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Boa noite!