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PREPARACION DE MUESTRAS
Objetivos
Diferenciar y explicar el fundamento de las distintas coloraciones. Realizar coloraciones con muestras biologicas
IMPORTANCIA
Gracias a las tinciones podemos examinar mejor la forma y el tamao de los microorganismos lo cual es tarea difcil en una observacin directa. Nos permite adems, por medio de tinciones especiales, estudiar diferentes estructuras de las clulas tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas
COLORANTE: DEFINICIN
Son compuestos orgnicos cuyos iones tienen alguna afinidad especfica por fijarse a algn componente de la clula.
Los colorantes son compuestos qumicos utilizados para aumentar el contraste Cristal Violeta COLORANTES DE MAYOR APLICACIN Eosina, wright Son derivados de las anilinas Fucsina Bsica Actan mejor en presencia de mordientes Safranina (aumentan la permeabilidad de la pared y membrana, Azul de Metileno penetran a la celula por fenomeons osmoticos) Verde de Malaquita
COLORANTES Y COLORACIONES
TIPOS DE COLORANTES
Pueden ser
CATINICOS o Bsicos
Tienen carga (+) Penetran interior celular Ej.: Azul de Metileno Cristal Violeta Safranina Fucsina Bsica
ANINICOS o cidos
Tienen carga (-) No penetran interior celular Tincin negativa Ej.: Nigrosina Eosina Fucsina cida Rosa de Bengala
LIPOSOLUBLES
COLORACIONES
Son tcnicas que permiten
OBSERVAR MICROORGANISMOS
Qumicamente es la unin de las molculas del colorante (iones) con los elementos constituyentes de la clula
TIPOS DE TINCIONES
Pueden ser
SIMPLES
Un solo colorante Tie o no la clula Ej.: Azul de Metileno Safranina Nigrosina
DIFERENCIALES
Ms de un colorante Clulas con diferente composicin qumica Importancia taxonmica Ej.: Tincin GRAM Tincin AAR
SELECTIVAS
Uno o ms colorantes Estructuras celulares con distinta composicin qumica Ej.: Tincin de Esporas Tincin de Flagelos Tincin de Paredes Cel. Tincin de Corpsculos Metacromticos
TIPOS DE PREPARADOS PARA OBSERVACIONES MICROSCPICAS Preparados en fresco ("entre porta y cubre")
Muestra
Porta objeto
Son preferibles en las situaciones siguientes: La morfologa de las bacterias se altera cuando se desecan y tien (espirilos), deben, por lo tanto, examinarse en estado vivo. Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad Para observar los cambios citolgicos que ocurren durante la divisin celular Por este mtodo se observan fcilmente algunas inclusiones celulares como vacuolas y materias grasa.
CON CALOR
Metanol
FROTIS FIJADO
TINCIN DE GRAM
Cristal-violeta
Alcohol-acetona
Lugol
Safranina
Lunes Tincin
MUESTRA
6.- Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio con objetivo de 100x y aceite de inmersion
Coloracin Gram
Bacilos Gram-positivos
Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, y Campylobacter sp, como C. jejuni
Espiralados: espiroquetas
PREPARADOS EN SECO 1. Colocar la muestra en la lamina 2. Realizar la coloracin respectiva 3. Secar al medio ambiente 4. observa la microscopio
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio: Microscopio ptico - Alcohol acetona Soluciones para la tincin: - Fucsina o safranina - Violeta de genciana - Aceite de inmersin - Lugol - Mechero de alcohol IV. PROCEDIMIENTO La tincin Gram se realizar sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre, que los alumnos traern
Referencias Bibliogrficas
Microbiologa de Brock, 2008 BCM, DE ROBERTIS, 2009