RPR EXAMEN DE REAGINA PLASMTICA RPIDA

PRINCIPIO DEL METODO

RPR-carbn es una tcnica no treponmica de aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmticas en suero humano. Las partculas de carbn sensibilizadas con una mezcla de lpidos, son aglutinadas en presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente afectado por sfilis.

SIGNIFICADO CLINICO

Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infeccin por Treponema pallidum, agente causal de la sfilis.

Este microorganismo produce lesiones en el hgado y corazn, liberando al torrente circulatorio pequeos fragmentos de estos rganos no reconocidos por el propio individuo.

El sistema inmunolgico del paciente reacciona dando lugar a la formacin de reaginas, -anticuerpos frente a estos fragmentos-. El ensayo es til para seguir la respuesta a la terapia antibitica.

REACTIVOS

RPR-carbn

Control + Tapn rojo Control Tapn azul

Partculas de carbn sensibilizadas con una mezcla de lpidos, cardiolipina, lecitina y colesterol-, en tampn fosfato 20 mmol/L, azida sdica 0,95 g/L, pH, 7,0. Suero humano con un ttulo de reaginas 1/8. Azida sdica 0,95 g/L. Suero animal. Azida sdica 0,95 g/L.

PRECAUCIONES

Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antgeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaucin como potencialmente infecciosos.

CALIBRACION

La sensibilidad del reactivo es trazable al material de Referencia Reference Human Reactive Serum de CDC (Center for Diseases Control) y comparable al reactivo RPR-card test reagent de CDC.

PREPARACION

RPR-carbn: Homogeneizar el reactivo con suavidad antes de su uso. Abrir el vial de RPR-carbn y acoplar la micropipeta al vial dispensador de plstico y aspirar por succin la cantidad de reactivo necesaria. Una vez terminado el ensayo, devolver la cantidad sobrante a su envase original y lavar la micropipeta y vial con agua destilada.

CONSERVACION Y ESTABILIDAD

Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, y se evita la contaminacin durante su uso. No congelar: la congelacin de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de stos. Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partculas y turbidez.

MATERIAL ADICIONAL

- Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 r.p.m. - Cmara hmeda.

MUESTRAS

Suero fresco o plasma. Estable 8 das a 2-8C o 3 meses a -20C. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba. No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipmicas.

PROCEDIMIENTO MTODO CUALITATIVO

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas. 2. Depositar 50 L de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre crculos distintos de un porta. 3. Homogeneizar suavemente el reactivo de RPR-carbn antes de usar. Invertir el vial dispensador y presionar ligeramente para eliminar las burbujas de aire. 4. Situar la micropipeta en posicin vertical y perpendicular al porta, y dispensar una gota (20 L) de este reactivo junto a cada una de las gotas anteriores.

5. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del crculo. Emplear palillos distintos para cada muestra. 6. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 100 r.p.m. durante 8 minutos (Nota 1). El exceso de tiempo puede originar la aparicin de falsos positivos.
Mtodo semicuantitativo 1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9 g/L. 2. Proceder para cada dilucin, como en la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACION

Examinar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente despus de retirar el porta del agitador. Agitar el porta manualmente un par de veces antes de realizar la lectura. En el mtodo semicuantitativo, se define el ttulo como la dilucin mayor que da resultado positivo

INTERPRETACIN

Tipo de aglutinacin Agregados grandes o medianos. Agregados pequeos Ningn agregado o ligera rugosidad.

Lectura R w N

Resultado REACTIVO REACTIVO DEBIL NO REACTIVO

CONTROL DE CALIDAD

Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad del reactivo de carbn, as como modelo de comparacin para la interpretacin de los resultados.

CARACTERISTICAS DEL METODO

1. Sensibilidad analtica: determinacin correcta del ttulo del Material de referencia en las condiciones descritas en el ensayo (ver calibracin). 2. Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta ttulos a 1/128. 3. Sensibilidad diagnstica: 86 % (en sfilis primaria) y 100 % (en sfilis secundaria). 4. Especificidad diagnstica: 98 %.

INTERFERENCIAS

Bilirrubina (20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L) y lpidos (10 g/L), no interfieren. Los factores reumatoides (300 UI/mL), interfieren. Otros sustancias pueden interferir

NOTAS

1. Temperaturas elevadas del medio ambiente pueden provocar la desecacin de la mezcla de reaccin sobre el porta, dando lugar a un aspecto de aglutinacin que puede confundirse con un falso positivo. Se recomienda realizar la prueba dentro de una cmara hmeda.

LIMITACIONES DEL METODO

- La prueba RPR-carbn no es especfica para el diagnstico de sfilis. Se recomienda el ensayo de todas las muestras Reactivas con mtodos treponmicos como el TPHA y FTA-Abs para la confirmacin de resultados. - Un resultado negativo no excluye el diagnstico de la sfilis.

LIMITACIONES DEL METODO

El diagnsticoclnico no debe realizarse nicamente con los resultados de un nicoensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clnicos del paciente. - La mononucleosis infecciosa, neumona viral, toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes pueden causar falsos resultados positivos.

BIBLIOGRAFIA

http://www.spinreact.com.mx/public/pdf/1200401-02.pdf http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003533.htm