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CROMATOGRAFIA DE GASES

Aplicaciones
La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito.

Descripcin
La cromatografa gaseosa es una tcnica de separacin y anlisis de mezclas de sustancias voltiles basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija y otra mvil. En cromatografa gaseosa, la fase mvil es un gas que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija.

La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte. La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.

La cromatografa de gas es un mtodo empleado para separar y analizar un compuesto gaseoso. Por el cromatgrafo fluye el gas inerte, que se encarga de transportar el compuesto a travs de la columna. El compuesto junto con el gas de transporte atraviesan la comuna hasta llegar al detector. Existen diversos detectores, pero los ms usados son el de ionizacin de llama o FID y el detector de conductividad trmica o TCD: El detector transforma la lectura en una seal elctrica, la cual es analizada por el software indicando las cantidades respectivas que trae un compuesto.

CROMATOGRAFO DE GASES

CROMATOGRAFO DE GASES

Gas portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: -Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) -Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa -Fcilmente disponible y puro -Econmico -Adecuado al detector a utilizar El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema de deshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular. Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la columna.

Sistema de inyeccin de muestra


La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor") que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est a 50C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de goma de silicona septa o septum.

Columnas y sistemas de control de temperatura


En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 50 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicolidal con dimetros de 10 a 30 cm, dependiendo del tamao del horno. La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de separacin de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisin de dcimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullicin del analito o analitos, y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente superior a l. Para estos valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y 30-40 minutos. Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de ebullicin, se ajusta la llamada rampa de temperatura con lo cual sta va aumentando ya sea de forma continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente la rampa puede significar separar bien o no los diferentes analitos. Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin ya que aunque a mayor temperatura la elucin es ms rpida, se corre el riesgo de descomponer el analito.

Detectores
El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha salido el analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal son: Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito. Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud. Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida. Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura ambiente hasta unos 350-400C, temperaturas tpicas trabajo. No debe destruir la muestra. Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar salidas de seal iguales. Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos. Respuesta semejante para todos los analitos, o Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido nmero de analitos.

Algunos tipos de detectores:


Detector de ionizacin de llama (FID, Flame Ionization Detector). Detector de conductividad trmica (TCD, Thermical Conductivity Detector). Detector termoinico (TID, ThermoIonic Detector). Detector de captura de electrones (ECD, ElectronCapture Detector). Detector de emisin atmica (AED, Atomic Emission Detector).

El detector de ionizacin de llama es un detector utilizado en cromatografa de gases. Es uno de los detectores ms usados y verstiles. Bsicamente es un quemador de hidrgeno/oxgeno, donde se mezcla el efluente de la columna (gas portador y analito) con hidrgeno. Inmediatamente, este gas mezclado se enciende mediante una chispa elctrica, producindose una llama de alta temperatura. La mayora de compuestos orgnicos al someterse a altas temperaturas pirolizan y se producen iones y electrones, que son conductores elctricos. Este hecho se aprovecha estableciendo una diferencia de potencial de unos centenares de voltios entre la parte inferior del quemador y un electrodo colector situado por encima de la llama. La corriente generada es baja (del orden de los 10-12 A), por lo tanto debe ser amplificada mediante un amplificador de alta impedancia. El proceso de ionizacin que se da en la llama es complejo, pero se puede aproximar el nmero de iones producidos al nmero de tomos de carbono transformados en la llama. Esto produce que sea un detector sensible a la masa (al nmero de tomos de carbono que salen de la columna) ms que a la concentracin, por lo tanto no le afectan demasiado los cambios en el flujo de salida. Existen algunos grupos funcionales que no dan respuesta en este detector, como el carbonilo, alcohol, halgeno o amina, y tampoco responden gases no inflamables como el CO2, SO2, agua y xidos de nitrgeno. Este hecho, ms que limitar el mbito de aplicacin de este detector, permite el anlisis de muestras contaminadas con alguno de los compuestos mencionados. Ventajas: Alta sensibilidad, del orden de 10-13 g/s. Amplio intervalo lineal de respuesta, 107 unidades. Bajo ruido de fondo (elevada relacin seal/ruido). Bajo mantenimiento, fcil de fabricar. Desventajas: Destruye la muestra (la piroliza).

El detector de conductividad trmica se utiliza en cromatografa de gases y es uno de los primeros utilizados. Tiene una amplia aplicacin y su uso se basa en la diferencia de conductividad trmica del gas portador cuando circula tambin analito. Este tipo de detector se denomina tambin catarmetro. El sensor de un catarmetro consiste en un elemento calentado elctricamente (resistencia). Esta resistencia, para una potencia elctrica constante, tiene una temperatura que depende del gas circundante. La resistencia puede ser un hilo fino de platino, oro o tungsteno, o un termistor semiconductor. La diferencia bsica entre los detectores de metal y el termistor semiconductor es que el segundo tiene un coeficiente de temperatura negativo, en otras palabras, que su resistencia disminuye conforme la temperatura aumenta. Los gases empleados como portadores permiten distinguir con facilidad cundo el gas lleva analito, debido a que las conductividades del hidrgeno y helio son de 6 a 10 veces mayores que la mayora de compuestos orgnicos. Este efecto no se da en otros gases portadores como el nitrgeno, por lo cual el uso de este detector est limitado a la utilizacin de hidrgeno o helio como gas portador. Ventajas de este detector: Simplicidad. Amplio rango dinmico lineal, 105 unidades. Respuesta universal a compuestos orgnicos e inorgnicos. Detector no destructivo. Desventajas: Sensibilidad relativamente baja, 10-8 g de soluto/ml de gas portador. Imposibilidad de utilizarlo en columnas capilares (caudal de salida pequeo).

Otros detectores minoritarios son el detector fotomtrico de llama (PFD), empleado en compuestos como pesticidas e hidrocarburos que contengan fsforo o azufre. En este detector se hace pasar el gas eluido por una llama hidrgeno/oxgeno donde parte del fsforo se convierte en una especie HPO, la cual emite a = 510 y 526 nm, y simultneamente el azufre se convierte en S2, con emisin a = 394 nm. Dicha radiacin emitida se detecta con un fotmetro adecuado. Se han podido detectar otros elementos, como algunos halgenos, nitrgeno, estao, germanio y otros. En el detector de fotoionizacin (PID), el gas eluido al final de la columna se somete a una radiacin ultravioleta con energas entre 8,3 y 11,7 eV, correspondiente a una = 106-149 nm. Mediante la aplicacin de un potencial a la celda de ionizacin se genera una corriente de iones, la cual es amplificada y registrada.

Columnas y tipos de fases estacionarias


Columnas de relleno Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, Niquel, Cobre o Aluminio) o tefln, de longitud de 2 a 3 metros y un dimetro interno de unos pocos milmetros, tpicamente de 2 a 4. El interior se rellena con un material slido, finamente dividido para tener una mxima superficie de interaccin y recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m. Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan convenientemente. El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas y uniformes, con una buena resistencia mecnica, para tener una mxima superficie donde interaccionar la fase estacionaria y el analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g. Como todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas (~400C) y humectarse uniformemente con la fase lquida estacionaria durante el proceso de fabricacin. El material preferido actualmente (2005) es la tierra de diatomeas natural, debido a su tamao de poro natural. Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de difusin molecular para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos. Por tanto, debido a que el sistema de adsorcin superficial del analito y la fase estacionaria es parecido, son materiales especialmente tiles. El tamao es crtico a la hora de darse el proceso de interaccin del analito, y a menores tamaos la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la presin necesaria para hacer circular un caudal estable de gas portador por la columna, ya que dicha presin es inversamente proporcional al cuadrado del dimetro de dichas partculas. As, el tamao mnimo para usar presiones mximas de 50 psi es de 250 a 149 m.

Columnas capilares Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la pared interna se ha recubierto con una finsima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su parte interna una fina capa de material adsorbente como el empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha adherido la fase estacionaria. Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de carga de esta ltima, ya que en su fabricacin se emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar estn las WCOT, luego las SCOT y por ltimo las columnas de relleno. Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice fundida, conocidas como columnas tubulares abiertas de slice fundida o FSOT. Estas columnas se fabrican a partir de slice especialmente pura, sin apenas contenido de xidos metlicos. Debido a la fragilidad inherente a este material, en el mismo proceso de obtencin del tubo se recubre con una capa de poliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con un dimetro de unos pocos centmetros. Estas columnas, con propiedades como baja reactividad, resistencia fsica y flexibilidad, han sustituido a las WCOT clsicas. Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables, entre 250 y 320 m (para columnas normales) y 150-200 m para columnas de alta resolucin. Estas ltimas requieren menor cantidad de analito y un detector ms sensible, al eluir menor cantidad de gas. Existen asimismo columnas macrocapilares con dimetros de hasta 530 m, que admiten cantidades de analito comparables a las de relleno pero con mejores prestaciones. En estas columnas existe un problema debido a la adsorcin del analito sobre la superficie de la slice fundida, adsorcin debida a la presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales interaccionan fuertemente con molculas polares orgnicas. Este inconveniente se suele solventar inactivando la superficie por sililacin con dimetilclorosilano (DMCS). La adsorcin debida a los xidos metlicos se ve paliada en gran parte por la elevada pureza de la slice empleada.

La fase estacionaria Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son: Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad ) adecuados al analito. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos 100C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno. Baja reactividad. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.

Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para elegir uno, debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias utilizadas actualmente (2005) son: Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos, aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCBs. Poli(fenilmetildifenil)siloxano (10% fenilo), para steres metlicos de cidos grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados. Poli(fenilmetil)siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y glicoles. Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados, nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos. Polietilenglicol,sirve para compuestos polares, tambin para compuestos como glicoles, alcoholes, teres, aceites esenciales. Poli(dicianoalildimetil)siloxano, para cidos grasos poliinsaturados, cidos libres y alcoholes. Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se presenta enlazada y entrecruzada para impedir su prdida durante las operaciones de elucin o lavado. De esta forma se obtiene una monocapa adherida qumicamente a la superficie de la columna. La reaccin implicada suele ser la adicin de un perxido al lquido a fijar, inicindose una reaccin por radicales libres que tiene como resultado la formacin de un enlace carbono-carbono que adems incrementa su estabilidad trmica. Otra forma es la irradiacin con rayos gamma. Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual permite resolver mezclas enantiomricas. Este tipo de fases suelen ser aminocidos quirales o algn derivado adaptado al trabajo en columna. El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor depende de la volatilidad del analito. As, un analito muy voltil requerir una capa gruesa para aumentar el tiempo de interaccin y separar ms efectivamente los diferentes componentes de la mezcla. Para columnas tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se emplean grosores de 0,25 m, y en las columnas macrocapilares el grosor sube hasta 1 m. El grosor mximo suele ser de 8 m