ESCUELA DE MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD UNIDAD DE GENTICA NORA CONSTANZA CONTRERAS B. Biol. MSc.

El ADN humano contiene aprox. 6 millones de kb, si la molcula de ADN se autoduplica su rata de error debe ser alta; la fidelidad de su replicacin solo permite que halla un error en un milln de pb (3.000) por cada ciclo de replicacin y cuando hay un error la clula generalmente lo corrige.

MODELOS DE REPLICACION

Modelo conservativo: se basa en que a partir de una molcula de ADN, se origina dos molculas, donde la parental se mantiene intacta.

Hebra nueva

Hebra nueva

Molculas de DNA despus de un ciclo de replicacin

DNA parenta

Hebra parental

Hebra parental

Modelo de replicacin conservativo

MODELO DE REPLICACION SEMICONSERVATIVO

La molcula parental sirve de molde para la sntesis de una nueva molcula de DNA, pero esta conserva la mitad en cada una de las molculas nuevas durante todos los ciclos de replicacin.

Hebra parental molde

3 5 3

Hebra nueva

Molculas de DNA despus De un ciclo de replicacin

DNA parenta

Hebra nueva

Hebra parental molde

Modelo de replicacin semiconservativo

MODELO DE REPLICACION DISPERSIVO:

Las cadenas parentales se dispersaran entre las dos nuevas hlices despus de la replicacin. De esta manera, cada molcula quedara formada tanto por la hebra parental como por la nueva. El ADN sufrira cortes despus de la sntesis. Siendo este el modelo ms complejo y menos probable.

Molculas de DNA despus de un ciclo de replicacin

DNA parenta

5 5 3

3 Modelo de replicacin dispersivo

EXPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL

Bacterias en medio de cultivo con N15

Bacterias en medio de cultivo libre de N15 despus de un ciclo de replicacin

Bacterias en medio de cultivo libre de N15 despus de 2 ciclo de replicacin

Bacterias en medio de cultivo libre de N15 despus de varios ciclos de replicacin

N15 /N15

N15/N14

N14 /N14 N15/N14

N14 /N14 N15/N14

ORC

El cromosoma bacteriano es circular y tiene un nico origen de replicacin. (replicn) La bacteria se replica cada 20 min. La replicacin siempre inicia en el mismo origen.

Cromosoma bacteriano

Cada origen genera dos horquillas de replicacin (flechas rojas) A partir de cada horquilla se sintetiza una nueva hebra de ADN. Cada nueva hebra se origina a partir de un Primer o cebador de ARN. Los nucletidos son aadidos por el extremo 3OH libre La Hebra nueva crece SIEMPRE en sentido 5 a 3. La replicacin es bidireccional y semidiscontnua a partir de un nico replicn.

3 A T A G T C C T G A A T T G C A C A C G G T A T C T T C C C G T A G C A T 5 U A U C A G G A C T TAA C G T G T G C C ATA G AA G G G C AT C G TA
Primer Primer

ATAG T C CT GA ATT G CACAC G G TAT CTT C C C GTAG CAU 5 T A T C A G G A C T T A A C G T G T G C C A T A G A A G G G C A T C G T A 3

ORC

1.Origen de replicacin; 2. horquillas (estructura ); 3. progresin de las horquillas y 4. resolucin de las nuevas molculas de DNA.

pol I: reparacin, accin endo y exonucleasa.

DNA pol II: reparacin de ADN que ha sido daado por agentes externos como por ejm. l.u.v. DNA pol III: Sntesis de ADN, es de carcter muy complejo, formada por 10 diferentes polipptidos

Comparacin entre las tres DNA polimerasa bacterianas

Propiedades Iniciacin de la sntesis de la cadena Polimerizacin de 5 a 3 Actividad exonucleasa 3a 5 Actividad exonucleasa 5a 3 peso molecular Molculas de polimerasa/ clula I + + + 103.000 400 II + + 90.000 ? III + + 167.000 15

Vuelta negativa

Hebra relajada

Vuelta positiva

Topoisomerasa I E. coli

Unin hebra I (roja)

Apertura de la hebra I

DNA

Paso de la hebra II a travs de la hebra I

Sellado de la hebra I Liberacin de la Cadena de DNA

Topoisomerasa I, liberando tensin sobre la cadena de DNA

Helicasa

ATP

ATP

ADP+Pi 3

Helicasa: rompe puentes de Hidrgeno y desenvuelve la doble cadena.

ATP
5

ADP+Pi 3

Apertura de la doble hlice

NH2

COOH

Unin dbil

Protenas de unin al DNA de cadena Sencilla: SSB (single strand binding proteins)
Se acoplan al ADN sin cubrir las bases, impidiendo que la hlice se restablezca.
C-terminal sitio de desplazamiento

Unin fuerte

La unin tambin ocurre en la hebra complementa

ria

Nick

Unin de la DNA polimerasa

Simultneamente se remueve el primer y se sintetiza el ADN para llenar el vaco

Nick Primer degradado DNA ligasa

La Ligasa, encargada de sellar las muescas formando enlaces fosfodiester entre dos bases adyacentes.

T A
H P P

C G
H P

A T
H P

G C
H P OH

A T
H P

C G
H P

T A
H P

G C
H P

T A H P OH O O P

C G

T A H P P OH O O P

C G

El enlace fosfodiester
P

AMP

T A
PPi 2Pi OH ATP P O

C G O

=
P O

DNA Polimerasas en Eucariotes

Flia A (Pol I) Repara y replica DNAmit Reparacin por recombinacin Primasa NER BER Reparacin por Recombinacin NER BER BER BER? DSB DSB Cohesinas BER?

Flia B (Pol II)

Flia X

Flia Y

(alpha): Sntesis de ADN con funcin Primasa

(delta): Sntesis de la hebra discontinua. (psilon): Sntesis de la hebra continua en su ausencia puede sintetizar las dos hebras.

(gamma):Sntesis de DNA mitocondrial

PRIMOSOMA

Agregado de siete polipptidos, que incluye la enzima PRIMASA la cual sintetiza los RNAs primers sobre la banda discontinua durante la replicacin.

3 Girasa

Helicasa Primasa () DNA pol 5 SSB

Primer DNA pol

3 5

Girasa
P OH

Girasa
P OH

Helicasa Helicasa SSB DNA Pol III DNA pol III DNA ligasa Hebra lder Segmento de Okazaki DNA pol Hebra lder DNA Ligasa DNA Primasa Primer PCNA DNA pol Hebra discontinua SSB DNA pol Primer

Primer

Primer
3 5 3 5 3 5

Horquilla de replicacin en Procariotes

Horquilla de replicacin en Eucariotes

NCB

Hebra rezagada

Hebra lder
Primers o cebador

5 Fragmentos de Okazaki

Sntesis del DNA semidiscontinua

origen
ORC

Despus de Mitosis Fase G1

ORC

cdc6 cdc18
cdt1 ORC

Formacin de los pre-RC: complejos pre-replicativos

MCM cdc6 MCM cdc18

cdc45 ORC cdc45 cdc6 cdc18 MCM MCM

Licenciamiento de los orgenes de replicacin

CDC6/CDT1 activas Licensamiento

CDC7/DBF4 activas encendido

Fase: M G1

CDC7/DBF4 Inactivas
Baja actividad de CDK CDC6/CDT1 inactivas

Fase: S G2

ORC

MCM2-7

CDC6/CDT1

CDC7/DBF4

Cdc7/cdc28 cdc45 ORC cdc45 cdc6 cdc18 MCM MCM

G1/S formacin del complejo de iniciacin

DNA pol

RPA: protena de unin al DNA de hebra sencilla

Formacin del complejo Pre-replicativo

MCM Helicasa Cdt1 licenciamiento Geminina control