Algunas aplicaciones de los microorganismos

Industria Alimentaria

Industria Qumica
Agricultura Industria Farmacetica Procesos Ambientales

Bibliografa: Brock, Biologa de los microorganismos, 8va Ed. Hugo y Russell, Pharmaceutical Microbiology 6th Ed. 1998.

Cronologa del desarrollo de la Biotecnologa

Era pre-Pasteur (anterior a 1865)
Bebidas alcohlicas (cervezas, vinos) Productos lcteos (quesos, jogur) Vinagre

Era Pasteur (1865 - 1940)

Fermentaciones Industriales (etanol, butanol, acetona, glicerol) Produccin de cidos orgnicos (actico, ctrico, lctico)

Era Antibitico(1940-1960)
Produccin a gran escala de Ab Transformaciones esteroidales (cortisona, estrgenos)

Era post-antibitico (1960-1975)

Produccin de: Aminocidos, Enzimas industriales Enzimas inmovilizadas Protena unicelular, Polisacridos

Era Biotecnologa Molecular (1975-presente)

Tecnologa ADN recombinante Primeros productos aparecen en el mercado en 1982 ( vacunas, insulina humana)

Microbiologa Industrial: objetivos

* Biomasa microbiana * Enzimas especficas * Metabolitos

Origen de las cepas industriales

* Colecciones de cultivos * Cepas nativas * Cepas con genes clonados

Propiedades de un microorganismo para uso industrial

1. 2. 3. 4.
5. 6. 7. 8.

Disponible en cultivo puro Genticamente estable No patgeno y libre de toxinas Crecimiento rpido en cultivo en gran escala con alto rendimiento del producto deseado Debe poder protegerse de la contaminacin Crecer en un medio de cultivo lquido y barato Fcil recuperacin del producto del medio de cultivo Susceptible a la manipulacin gentica

Dnde encuentramos micorroganismos con estas caractersticas?

Aislamiento de la naturaleza Maximizar la produccin: a) Seleccin de variantes naturales
b) Seleccin de mutantes inducidas c) Obtencin de recombinantes

Metabolitos primarios
Se producen durante la fase logartmica de crecimiento como producto del metabolismo, y son esenciales para la funcin del microorganismo (aa, c. pirvico, etanol, cido lctico ). La produccin neta se relaciona con el crecimiento y la cantidad de sustrato. TROFOFASE

Metabolitos secundarios
Se producen en la fase temprana estacionaria de crecimiento y son productos finales de vas metablicas complejas. No son crticos para la funcin de los microorganismos (antibiticos, pigmentos, hormonas, vitaminas, etc). IDIOFASE

Cintica de produccin de metabolitos

log cells (o) l product (l)

trofofase
o o l o l o o l o

l idiofase

l
o o o o l
tiempo

Origen de metabolitos secundarios

constituyente celular intermediarios

Nucletidos Aminocidos Azcares Acetyl CoA Terpenos

cidos nucleicos Protenas Polisacridos Lpidos Esteroles

metabolitos secundarios

Penicilinas, Cefalosporinas Ab peptdicos, alcaloides Ab aminoglicsidos Tetraciclina Giberelinas

El objetivo en microbiologa industrial es producir:

1. biomasa microbiana 2. enzimas especficas

3. metabolitos

Productos microbianos
1.Enzimas: amilasas, glucosa isomerasa, proteasas. 2.Aditivos para alimentos: aa (fenilalanina en Nutrasweet, glutamato monosdico), vit. (B12, riboflavina) 3.Productos qumicos comunes: citrato, c. actico, etanol. Solventes industriales, alcoholes y acetona producidos por fermentacin. 4.Farmaceticos: Ab (penicilina, estreptomicina). Por ingeniera gentica las bacterias pueden producir insulina de uso humano. 5.Productos agrcolas: utilizacin de inoculantes de leguminosas y para silos. Control biolgico ej: Bacillus thuringensis

Tipo de cultivo a escala industrial Cultivo en Batch Cultivo Fed-Batch Cultivo Continuo

Etapas del proceso aerobio a anaerobio

1. 2. 3. 4.

Preparacin del medio de cultivo Esterilizacin Preparacin del inculo Crecimiento del microorganismo en el fermentador 5. Extraccin y purificacin 6. Disposicin de efluentes

Biomasa

Cultivo stock

Matraz de laboratorio

Fermentador inoculante

Sobrenadante

Medio esterilizado

Fermentador de Produccin Extraccin del Producto

Preparacin del medio Envasado Purificacin del Producto

Tratamiento de efluentes

Procesos de inters
Levaduras: panificacin, bebidas alcohlicas, etanol, vitaminas
Iniciadores para la industria alimentaria: bacterias cido lcticas (BAL) Inoculantes para la fijacin de nitrgeno: Rhizobium, Bradyrhizobium, para control biolgico Pseudomonas, Thrichoderma harzianum) Proteinas unicelulares, de levaduras, bacterias

Bioinsecticidas: Bacillus thuringensis

Virus y bacterias para vacunas

Productos de fermentaciones

Metabolitos primarios
Etanol
Alcohol comn Alcohol para combustible Alcohol de bebidas destiladas Vino Cerveza Sidra

Acidos orgnicos
Ctrico: A. Niger Propinico: Propionibacterium Lctico: bacterias del cido lctico

Metabolitos primarios
Vinagre
Acetobacter sp y Gluconobacter

Solventes
Acetona y butanol: Clostridium acetobutilicum

Aminoacidos Vitaminas
B12 Propionibacterium Riboflavina

Polisacridos
Dextranos Xantanos Leuconostoc Xanthomonas

Fermentaciones lctica y alcohlica

Lactobacillus

Streptococcus

Leuconostoc

Principales estrategias aplicadas en la industria lctea

1. Utilizar el producto de un microorganismo que puede modificarse genticamente o no (EPS, sustancias antimicrobianas, bacteriocinas)

2. Utilizar organismos genticamente modificados (OGMs) como starters.

La industria de los fermentos lcticos busca permanentemente nuevas cepas para integrar a sus productos
a. b. c. Cepas nativas (estudiar posibilidades de uso industrial) Obtener mutantes espontneas por ej: resistencia a fagos. Modificacin de las cepas para aprovecharlas mejor en la industria.
actividad proteoltica capacidad de autlisis

Actividades importantes: de las BAL

resistencia a fagos
produccin de bacteriocinas produccin de compuestos aromticos y otras actividades enzimticas.

Sustancias con actividad antimicrobiana producidas por la BAL

1. Varios compuestos antimicrobianos como: cidos orgnicos, etanol, diacetilos, perxido de H (H2O2)
2. Bacteriocinas, son pptidos que inhiben a cepas relacionadas ( patgenas como Bacillus, Clostridium,

Staphylococcus y Listeria)

Nisina producida por Lactococcus lactis de uso permitido Acidofilina, producida por L. acidophilus. (contra E. Coli y

Salmonella panama).

Otras propiedades producidos por BAL. (texturizantes naturales o EPS)

juegan un rol importante en evitar la separacin del agua (sinresis), por ej. Yogur

S. thermophilus LY03 se usa como cepa modelo de estudio, produce dos heteropolisacridos compuesto de glucosa y galactosa

Preparaciones comerciales de quimosina recombinantes

ADN de origen Ismero de quimosina m.o productor Nombre comercial

Estmago de ternero
Estmago de ternero Biosinttico

B
B A/C

Kluyveromyces lactis
Aspergillus niger E. coli

MAXIREN
CHYMOGEN CHY-MAX

Preparaciones comerciales a partir de Lactococcus lactis, Saccharomyces cereviseae y Bacillus se encuentran en desarrollo

Probiticos
Se definen como Alimentos suplementados con microorganismos viables que benefician al consumidor por mejoramiento del balance microbiano

Criterios para seleccin de probiticos

1) Seleccin por su habilidad de sobrevivir en el tracto gastrointestinal 2) Produccin de sustancias antimicrobianas 3) Bajo tg (alta vc), buena vida media 4) No patgenas y con habilidad para estabilizar la microflora Habilidad de sobrevivir a bajo pH y en la presencia de bilis

Produccin de levaduras
Son los microorganismos ms ampliamente utilizados en la industria Importancia econmica a) biomasa celular ( para pan, cerveza, vino) b) componentes celulares (vitaminas, aa, ) c) productos finales de la fermentacin (etanol, CO2)

El proceso de produccin de material celular es

aerbico.

El proceso de fermentacin alcohlica es

anaerbico.

Fermentacin alcohlica
MOSTO
Glucosa Fructosa (200g/l) pH = 3.0-3.8 Anaerobiosis Acidos:tartrico y mlico aa, NH4+, vitaminas

VINO Etanol (11%) Azcares < 2g/l pH = 3.0-3.8 Acidos = aa, NH4+, Vit. + AROMAS

Fermentacin malolctica
VINO A
Etanol (11%) pH = 3.0-3.8 Acidos:tartrico y mlico aa, NH4+, Vit. +AROMAS

VINO B Etanol (11%) pH 0.1-0.2 u Acidos: tartrico = mlico lctico aa, NH4+, Vit. ++ AROMAS

Bacilos G+, esporulados

Ej. Bacillus Endosporas resistentes Son anaerobios facultativos Importancia: * B. anthracis patgeno a humanos y animales * B. subtilis y B. polymyxa productores de antibiticos * B. thuringiensis control biolgico de insectos. Biodegradadores, produccin de enzimas.

Otros ejemplos de aplicacin

Insecticida microbianos
Esporulados, flagelos pertricos Producen toxinas y un cuerpo B. popillae y B. thuringiensis

paraesporal: protena txica que en el intestino de los insectos produce parlisis de las larvas. Se utilizan como esporas muertas por calor en cultivos vegetales.

Bacilos GEj: Agrobacterium El gnero comprende organismos que producen tumores en vegetales. * A. tumefaciens posee un plsmido Ti responsable de la virulencia. * Se han construdo vectores de transferencia generalizado para plantas

Bacilos GRhizobium
Mviles Poseen grnulos No forman esporas EPS (plsticos sintticos) Fijan N2 en simbiosis (FBN)

Bacilos GPseudomonas
* * * * *
Importantes en suelos: Denitrificacin (P. fluorescens, P. aeruginosa) Enfermedades en plantas (P. syringae) Enfermedades en animales Biocontrol Biodegradacin

Actinomicetes
Ej: Streptomyces G+, aerobios, producen geosminas (aroma a tierra mojada). *Producen antibiticos *Algunos son patgenos (podredumbre de la papa)

Antibiticos
Son productos del metabolismo secundario La mayora de los comerciales son producidos por hongos y bacterias Se conocen ms de 8000 sustancias antibiticas y cada ao se descubren cientos de nuevos productos

1)

Deteccin de organismos productores (siembra de suspensiones de suelo en medios slidos: colonias con halos de inhibicin)

Produccin de antibiticos

2)
3)

Mtodos de extraccin y purificacin eficientes y obtencin de un producto cristalino de elevada pureza

Acabar con un producto nico en alta concentracin

4)

Determinar el espectro de accin (microorganismos sensibles)

Clostridium , G+
Endosporas Comn en suelos Producen poderosas toxinas. Causantes de ttanos, botulismo, gangrena gaseosa. Se usan para producir butanol por fermentacin. Algunos fijan N2

Usos de microorganismos y sus productos en bioensayos Dosificaciones: Dosificacin de antibiticos Dosificacin de vitaminas y aminocidos Biosensores

ALIMENTO Cafe Mandioca (Gari) Mandioca: (Peujeum) Maiz (Kenkey) Maiz (Ogi) Soya (Miso) Soya y trigo (Soy Sauce) Soybeans (Sufu) Soya(Tao-si) Soya(Tempeh) Peanuts (Ontjom) Carne de Tiburn descompuesta(rot)

MICRORGANISMO Bacteria y levadura Bacteria y hongo Muchos hongos Dos hongos, una levadura y una bacyeria Dos bacterias y una levadura Un hongo y una levadura Hongos, bacterias y levaduras Hongo Hongo Dos hongos Hongo Se entierra hasta que esta pronta (Islandia)

Uso de microorganismos para remocin de metales pesados de suelos y aguas

* Bacterias como: Ralstonia eutropha y Ps. mendocina, son resistentes a los metales pesados por la presencia de un sistema de eflujo eficiente * Algunas promueven la bioprecipitacin ej: biomineralizacin y/o cristalizacin por pp de metales en la superficie celular. * Este fenmeno se puede deber a la sntesis y secrecin de exopolmeros (EPS, protenas). * Contienen plsmidos de resistencia a Cd, Co, Cr, Cu, Pb, Hg, Ni y Zn **** el tratamiento de suelos y efluentes contaminados es una
de las aplicaciones potenciales de este tipo de microorganismos