(componentes da enzimas e mecanismos de atividade enzimática) 2. Produção de Energia. Vias metabólicas de Produção de Energia. Catabolismo de carboidratos (Glicólise, Via Pentose fosfato, Via Entner-Doudoroff) • Respiração Celular (aeróbica e anaeróbica). Fermentação. Catabolismo de lipídeos e proteínas.Testes Bioquímicos e Identificação bacteriana. • Fotossíntese. Fotofosforilação. Reações independentes da luz: Ciclo de Calvin-Benson. Resumo dos mecanismos de produção de Energia. Diversidade metabólica entre os organismos. • Vias metabólicas de uso de energia. Biossíntese de polissacarídeos. Biossíntese de lipídeos. Biossíntese de aminoácidos e proteínas. Biossíntese de purinas e pirimidinas. Integração do metabolismo. Classificação dos microrganismos de acordo à Respiração. •Aeróbios Restritos: Vivem só em presença de oxigênio. •Anaeróbios Facultativos: Podem gerar ATP através da respiração e também da fermentação utilizando íon nitrato como aceptor de elétrons. •Anaeróbios Restritos: Bactérias que utilizam sulfatos e carbonatos como aceptores de elétrons e não podem utilizar a respiração aeróbica como alternativa. Respiração Anaeróbica • Respiração anaeróbia: Um restrito grupo de bactérias utilizam compostos inorgânicos como aceptor final de elétrons
• O aceptor final de elétrons é uma substância inorgânica diferente de
oxigênio. Geralmente substâncias oxidadas: NITRATOS, SULFATOS E CARBONATOS.
• Bactérias tais como: Pseudomonas e Bacillus podem utilizar o íon nitrato
(NO-3) como aceptor final de elétrons. O íon nitrato é reduzido a íon nitrito (NO2-), oxido nitroso (N2O) ou gás nitrogênio (N2).
• Desulfovibrio e Desulfotomaculum: utilizam sulfatos (SO42-) como aceptor
final de elétrons para formar sulfeto de hidrogênio (H2S).
• Bactérias metanogênicas: utilizam carbonato (CO32-) para formar metano
(CH4).
• Rendimento: mais baixo que a respiração aeróbica, somente uma parte do
TCA funciona sob condições anaeróbias e nem todos os transportadores participam da cadeia. Compostos oxidados do Enxofre como aceptores de elétrons • Dois tipos de Redução de sulfatos: catabólica ou desassimiladora e a assimiladora • Redução do sulfato ligada a síntese (assimiladora): Plantas verdes, microrganismos eucarióticos e procarióticos apresentam redução do sulfato ligado à síntese de aminoácidos enxofrados. • A redução desassimiladora do sulfato forma H2S e o libera ao meio. • Organismos: Anaeróbios restritos. • Gêneros: Desulfovibrio e Desulfotomaculum (vivem em solos e matéria orgânica em decomposição). Nitrato como aceptor final de elétrons • Dois tipos de redução: Assimiladora e Desassimiladora,
Assimiladora: O íon nitrato (NO-3) é reduzido a íon nitrito (NO2-) e depois se
reduze a NH3 que logo é incorporado ao material celular (plantas e bactérias). Em enterobactérias: a redução de (NO-3) pode chegar até NH4+ como um processo respiratório acumulando-se amoníaco (Redução desassimiladora) Desnitrificação: Processo de respiração anaeróbia que converte (NO-3) em N2,,,( N2O) ou uma mescla dos dois. Redução de Nitratos: Redução incompleta de (NO-3) até (NO2-) que se acumula no meio. Este é um processo respiratório facultativo. O Oxigênio reprime a síntese das enzimas nitrato e nitrito redutase, uma vez a enzima presente o (NO-3) compite com O2. *Os dois últimos processos podem ser independentes da assimilação. Grupo microbiano: Enterobactérias (respiração, fermentação e resp. anaeróbica). O que é fermentação? • 1. Qualquer processo que produza laticínios ou bebidas acídicos (uso geral) • 2. Qualquer processo microbiológico em grande escala ocorrendo com o sem ar (comum na indústria). • 3. Qualquer processo metabólico que libere energia que ocorra somente sob condições anaeróbicas (Def. mais científica) • *4. Qualquer processo metabolico que libere energia de um açúcar ou outra molécula orgânica, não requer oxigênio ou um sistema transportador de elétrons e usa uma molécula orgânica como aceptor final de elétrons. (Definição que adotaremos)* Fermentação • Louis Pasteur: reconheceu a função fisiológica da fermentação explicando o fenômeno como “a conseqüência da vida sem ar”. • Na transformação redox do substrato não participa o oxigênio=Processo anaeróbio. Exceto as bactérias ácido-lácticas que podem manter a fermentação em presença de O2. Características da Fermentação • Tanto doadores como aceptores de elétrons são moléculas orgânicas. Em ocasiões a mesma molécula se oxida e se reduze. • O processo ocorre em Ausência de O2. • Existe um balanço rigoroso de C, O, H entre substratos e produtos. • Pode utilizar tanto hexoses (via Glicólise, via Entner-Doudoroff) como pentoses (via das pentoses) como substrato. Fermentação • Os compostos que se oxidam e reduzem no processo são geralmente derivados de açúcares (Carboidratos são os substratos principais). • *No processo se estabelece um estrito balanço redox. • *Gera-se ATP através da fosforilação a nível de substrato. • *O ácido pirúvico (via Glicólise, via Entner-Doudoroff) converte-se é um o mais produtos orgânicos diferentes, dependendo do tipo de célula. Esses produtos podem ser, ácido lático, etanol, ácido acético etc. • Não há ciclo de krebs nem cadeia de transporte de életrons. • Utiliza moléculas orgânicas como aceptor de elétrons. • *O rendimento de ATP é muito baixo, somente uma ou duas moléculas de ATP para cada molécula de material inicial (Grande parte da energia permanece nas reações químicas dos produtos finais tais como ác. Lático e etanol) Principais vias metabólicas utilizadas pelos microorganismos fermentativos 1. Glicólisis ou frutose –difosfato (FD) ou Embdem-Meyerhoff (EM). 2. Via das Pentosas-Fosfato. 3. Via Entner-Doudoroff (restringida a procarióntes) Fermentação: • Através da Glicólise: fosforilação em nível de substrato (2 ATP/ molécula de Glicose). • Através da via das Pentoses: Ocorre o processo oxidativo a partir da Glicose até a formação de Ribulose-5-fosfato. Esta via é cíclica por natureza e acontecem descarboxilação, epimerização e deshidrogenação. Esta via subministra para os processos biossintéticos: pentosa-fosfato, eritrosa-fosfato, 3-fosfogliceraldeído e NADPH+ + H+. . Fermentação: • Através da Via Entner-Doudoroff: - É típica e exclusiva de alguns procarióntes - De natureza simples: deshidrogenação, deshidratação e a conversão de Glicose em ácido pirúvico e 3- fosfogliceraldeído (que é convertido a ácido pirúvico vía frutosa difosfato). - Por cada mole de Glicose se produze 1mole de ATP e 2 moles de NADH+ + H+. - Seu significado básico provém da obtenção de ácido glucónico por alguns microorganismos: E. coli e Clostridium obtém os ácidos glucónicos do metabolismo intermediário por esta via a partir de glicose Via Entner-Doudoroff • A partir de cada molécula de glicose está via produz duas moléculas de NADPH e uma molécula de ATP para utilizar nas reações biossintéticas celulares. • As bactérias que possuem as enzimas para está via podem metabolizar a Glicose sem a Glicólise ou a vía das pentosas fosfato. • Esta via é encontrada em algumas outras bactérias Gram – incluindo: Rhizobium, Pseudomonas e Agrobacterium. Tipos de Fermentação • Segundo os produtos segregados que predominem quantitativamente se diferenciam em: • Alcoolica (produção de etanol). • Lática (homolática: ác. Lático e heterolática: ác. Lático+etanol+CO2; • Propiónica (ácido propiónico) • Fórmica (mixtura de ácidos) • Butírica (ácido butírico, butanol, acetona, isopropanol e outros ác. Orgânicos) • Acética (ácido acético) • Com produção de metano. Fermentação Microorganis Via Produto Uso mo metabólica Principal Comercial Alcoólica Saccharomyce Glicólise, Etanol+CO2 Bebidas s cerevisiae; Glicólise, Sarcina Entner- ventriculi; Doudoroff Zymomonas mobilis Lática lactobacillacea Glicólise, Ácido lático, Iogurte; s Via Pentose- Ácido Kefir, fosfatos lático+etanol+ conservas CO2 Resumo das Propiónica Propionibactér Glicólise Ácido características ias propiónico
principais das Fórmica Enterobactéria
s Glicólise Ácido acético, fórmico, Produtos industriais fermentações (Photobacteri um) málico, Lático, etanol, típicas glicerina, CO2 e H2. ] Butírica- Clostridios Glicólise Ácido Produtos butanólica butírico, industrias butanol, acetona, isopropanol Acética Clostridios Glicólise Ácido acético Produtos industriais Fermentação Lática • Uma molécula de Glicose é oxidada em duas moléculas de ácido pirúvico gerando-se 2 moléculas de ATP. • As moléculas de ác. pirúvico são reduzidas por duas moléculas NADH para formar duas moléculas ácido lático. • O ácido lático é o produto final: não sofre mais oxidação e armazena a energia produzida pela reação • Rendimento de energia baixo. • Microorganismos homoláticos ou homofermentativos: Streptococcus e Bacillus, • Produtos: iogurte, leite, repolho azedo e conservas de pepino. Fermentação alcoólica • Através da Glicólise uma molécula de Glicose produze duas moléculas de ácido pirúvico e duas de ATP. • As duas moléculas de ác. Pirúvico são convertidas em duas de acetaldeído e duas moléculas de CO2. • As duas moléculas de acetaldeído são reduzidas por 2 NADH para formar duas moléculas de etanol.
• Microorganismos heteroláticos ou heterofermentativos:
Saccharomyces (produze alcool e CO2 como resíduos). Podem utilizar a via Pentose-fosfato. Testes Bioquímicos e Identificação Bacteriana • Identificar microorganismos pelos tipos de enzimas que produzem: Tipos de testes: 1.Detecção de enzimas que catabolisam aminoácidos (formação de Indol a partir do triptofano-enzima: triptofanase) 2.Teste de oxidação aeróbia ou fermentação de açúcares (produção de ácidos) 3.Hidrólise do amido (amilases), 4.liquefação da gelatina (enzimas proteolíticas), 5. Efeito sobre o leite: Proteolisis da caseína e utilização de latose. 6.Formação de amoníaco a partir de aminoácidos 7. Formação de H2S a partir de aminoácidos que contem enxofre (cisteína, metionina), 8. Redução de nitratos (enzima nitrato redutase) 9. Crescimento em meio sem nitrogênio (crecem só microorganismos que fixam o nitrogênio molecular) 10. Relação com o Oxigênio: Catabolismo de Lipídeos • Os microorganismos também oxidam lipídeos e proteínas: Lipídeos:Gorduras constituídas de ácidos graxos e glicerol. Lipases: Enzimas produzidas pelos microorganismos que quebram os lipídeos em seus componentes, sendo cada componente metabolizado separadamente. Glicerol: é convertido em diidroxiacetona fosfato e catabolisado via Glicólise e Ciclo de Krebs. Ácidos graxos: β-Oxidação: degradação dos ácidos graxos em que fragmentos de carbono são liberados de dois em dois para formar Acetil-CoA que é catabolisado via Ciclo de Krebs Catabolismo de Proteínas • As proteínas são muito grandes para atravessar a membrana. • Os microrganismos produzem peptidases extracelulares=aminoácidos. • Para os aminoácidos serem catabolisados precisam ser convertidos a outras substâncias para entrarem no ciclo de Krebs através de reações de: desaminação, descarboxilação e desidrogenação. Desaminação: o grupo amino é removido e convertido em íon amônia e o ácido orgânico restante entra no ciclo de Krebs