ASPECTOS GENTICOS DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Las biomolculas y el proceso de vida

Cuales son los componentes celulares? Que es el DNA? Para que sirve? Que es el RNA? Para que sirve? Que son las protenas? Para que sirven? Como se sintetizan los componentes celulares que no son DNA, RNA o protenas?

Dogma central de la Biologa Molecular

1. Replicacin 2. Transcripcin 3. Traduccin

Expresin de genes

cidos Nucleicos

Expresin de genes involucra varios pasos

Estructura del DNA

Rosalind Franklin y la difraccin De rayos X

Gentica Unidad 5 Qumica y replicacin

Watson y Crick
8

Estructura del DNA

Gentica Unidad 5

Qumica y replicacin

10

Nucletidos

Una base nitrogenada. Una pentosa Un fosfato

Base

Fosfato

Azcar

Nucleosidos
Una base nitrogenada Una pentosa

Nucleotidos y cidos Nuclecos

Nucletidos y cidos Nucleicos

Gen

Un segmento de una molcula de DNA que contiene la informacin requerida para la sntesis de un producto biolgico funcional, como una protena o RNA

Nucletidos y cidos Nucleicos

Cromosomas

Estructuras compuestas de un complejo de DNA (material gentico) RNA y protenas.

Pasos comunes en la sntesis de DNA, RNA y protenas

1.Iniciacin 2.Elongacin o extensin 3.Terminacin
DNA RNA Protenas Replicacin o duplicacin Transcripcin Traduccin

Donde se sintetizan cada una deestas molculas?

Duplicacin del DNA

DNA de doble cadena
Complejo enzimtico
Iniciacin:
Origen de replicacin Separacin de cadenas

Elongacin:
Replisoma

Terminacin
Separacin de cadenas duplicadas

Las DNA polimerasas sintetizan DNA

Sntesis (semiconservativa) y reparacin
Varias DNA pol en procariotes y eucariotes DNA pol bacteriana,
Sntesis Reparacin

Mt y Ct

La sntesis enzimtica es direccional

Direccion 5 -3 Requiere de un primer Requiere el 3-OH de la ribosa libre dNTP o NTP son precursores Enzima polimerasa Mg+2 o Mn+2 como cofactor Procesividad y fidelidad

Transcripcin

Proceso por el cual un sistema enzimtico convierte la informacin gentica de un segmento de DNA en una hebra de RNA con una secuencia de bases complementaria a una de las de DNA

Transcripcin

Tipos de RNA

1. RNA mensajero (mRNA): codifica la secuencia de aminocidos de uno o mas polipptidos y es especificado por uno o varios genes.
2. RNA de Transferencia (tRNA): reconoce la informacin del mRNA y transfiere los aminocidos correctos a una cadena polipptida en formacin durante la sntesis de protena. 3. RNA Ribosomal (rRNA): son constituyentes de los ribosomas y participan en la sntesis de protenas.

RNA Polimerasa

Traduccin

Traduccin, proceso por el cual se sintetizan las protenas a partir de la secuencia nucletida del mRNA

Ribosomas, lugar de sntesis de protenas.

Aminoacil-tRNA sintetasas.

Traduccin

Hiptesis del Adaptador de Cricks

Codn Triplete de nucletidos que codifica para un aminocido especfico

Traduccin

Diccionario de Palabras Codigo de Aminocidos en mRNAs

Estructura General de un tRNA

Etapa I Activacin de Aminocidos

Traduccin

ADN (DNA) material gentico

Almacn de informacin gentica Composicin distintiva para cada organismo Estructura:
Doble Antiparalela complementaria

Formas estructurales
A B Z

cidos nucleicos: Almacn de informacin gentica

1868 Federico Miescher
Realiz el primer experimento sistemtico usando ncleos de clulas Aisl una sustancia rica en fsforo (nuclena) de leucocitos, poco despus en otras clulas Una fraccin cida y otra bsica Purific parcialmente los cidos nucleicos Estudi sus propiedades y estructura covalente Gener la sospecha de que la nuclena estaba asociada a la herencia de la clula

 1944 Oswald T. Avery, Colin Mcleod y M. McCarty:

Encontraron que el DNA extrado de una cepa virulenta de S. pneumoniae transform genticamente a otra cepa no virulenta El cido nuclico de la cepa virulenta contena el mensaje gentico para la virulencia No tuvo buena aceptacin cientfica pues tambin podra ser por las nucleoprotenas?

 1952, Alfred Hershey y Marhta Chase

Usaron 32P y 35S para demostrar la funcin del DNA de un bacterifago Demostraron que era el DNA (P) y no la protena (S) el componente que contiene la informacin gentica

Composicin distintiva para cada organismo

1940 E. Chargaff y sus colaboradores
Encontraron que el DNA est constituido por 4 bases

Reglas de Chargaff
La relacin entre estas bases es distinta para cada organismo La composicin del ADN varia de una especie a otra Distintos tejidos ( de una misma especie) tienen una misma composicin de bases

Reglas de Chargaff (continuacin)

La composicin del ADN ( en una especie determinada) no cambia con la edad, estado nutricional el medio ambiente En todos los ADN, independiente de la especie: AT GC

A+G T+C Estas reglas fueron la clave para el establecimiento de la estructura tridimensional

 A principios de 1950s
El patrn de difraccin de Rayos X demuestra que el DNA es una hlice Dos periodicidades sobre el eje: una de 3.4 y otra de 34 El problema es establecer el modelo 3D!

Formulacin de un modelo tridimensional por Watson y Crick

Dos hlices alrededor de un mismo eje

Cadena doblada en sentido derecho, la espina dorsal de desoxiribosas (hidroflicas) y las cargas negativas de los fosfatos hacia fuera de la hlice doble Las bases nitrogenadas acomodadas en el centro de la doble hlice, con sus anillos planos colocados muy cerca uno de otro (hidrofbicos)
Apareamiento entre A=T y GC cumpla con las reglas de Chargaff

La relacin espacial entre cadenas genera dos muescas Mayor Menor Soportadas por puentes de hidrgeno y fuerzas hidrofbicas

Formulacin de un modelo tridimensional por Watson y Crick (continuacin)

Las cadenas son paralelas o antiparalelas? Antiparalela era el modelo ms convincente!
5 3 3 5

Las cadenas son complementarias dentro de la doble hlice Para ajustar a las periodicidades manipularon su modelo, repeticiones por cada vuelta:
Cada 0.34 nm (entre cada par de bases) Cada 3.6 nm (10.5 nucleotidos) Solo se poda cumplir si las cadenas eran complementarias

Triple o cudruple hlice

Replicacin y sntesis de cidos nucleicos

Mecnismo de duplicacin determinado por la especificidad en el apareamiento de las bases nucleotidicas A T T A GC CG Secuencia de bases en cada cadena hija duplicada es complementaria a la secuencia de bases de la cadena parental Los monomeros de nucleotidos son unidos uno a uno al final de la cadena en crecimiento en direccin 5 3 por enzimas llamadas polimerasas

Experimento de Meselson y Stahl (1957)

Modelos encontrados

1. Replicacin conservativa durante la cual se producira un ADN completamente nuevo durante la replicacin.

2. Replicacin semiconservativa. Se originan dos molculas de ADN: Una compuesta de una hebra de ADN original y de una hebra complementaria nueva.

Las hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas.

3. Replicacin dispersiva implicara la ruptura de las hebras de origen durante la replicacin que, de alguna manera se reordenaran en una molcula con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de ADN.

Protenas de replicacin de DNA (en E. coli)

Protena
DNA pol III DNA pol I DNA B Primasa Tropoisomerasa Helicasa

Funcin
Sintetiza DNA Degrada iniciador y edita cubre los espacios Kornberg Desenrrollar el DNA (empieza) Sntesis de RNA iniciador Desenrrolla en sentido contrario las cadenas Elimina la torcin de molculas

continuacin
Protena
Primosoma Protena rep SSB DNA girasa DNA ligasa

Funcin
Complejo enzimtico que sintetiza el RNA iniciador Desenrrolla la doble hlice Estabiliza DNA de cadena sencilla Introduce estructura terciaria en sentido negativo Liga los extremos del DNA

DNA polimerasa de E. coli

Caractersticas
Gene estructural Mr. (Da) No. de molculas/clula

Polimerasa I Polimerasa II Polimerasa III

Pol A 109,900 400 Pol B 120,000 100 Pol C 900,000 10

V max (nucleotidos/ seg) Exonucleasa 3

Exonucleasa 5

16/120

2-5

250-1000

Fenotipo mutante b

+ + UVsMMSs

+ -

Ninguno

+a + DNA ts

a: Actividad en la subunidad de haloenzima pol III b: UVsMMSs sensible a la luz UV, sensible a metanosulfato DNA ts: sensible a temperatura en replicacin de DNA

DNA polimerasa de eucariotes

4 polimerasas diferentes , , , Diferencias entre organismos:
Localizacin intracelular Propiedades cinticas Respuestas a inhibidores

Propiedades de las DNA polimerasas de eucariotes

Compartimento celular Accin biolgica

Ncleo
Replicacin del DNA nuclear

Ncleo
Reparacin del DNA

Mitocondria
Replicacin del DNA mitocondrial

No. de subunidades 4-8 Mr. Subunidad cat (KDa) 120-180 Procesividad Moderada

1 30-50 Baja

4 idnticas 50 Alta

Exonucleasa asociada
Sensibilidad a: calor Agentes sulfihdrilos 2-3 ddNTPs Arabinosil-CTP Afidicolina

No a
Baja Alta Baja Alta Si

No
Alta Baja Alta Baja No

No
Alta Alta Baja Alta No

Parmetros cuantitativos de la duplicacin del DNA en diferentes clulas

 La replicacin ocurre con una alta fidelidad y en momentos especficos del ciclo celular
Divisin celular

La fidelidad en el copiado (sntesis) se debe a las actividades enzimticas de las polimerasas (encargadas de la polimerizacin y edicin de la sntesis) La deteccin y remocin de errores en las cadenas es realizada por las mismas polimerasas (actividad de exonucleasa y edicin) y por sistemas especficos de reparacin La replicacin es semiconservadora, cada cadena sirve de molde (templete) para una nueva cadena

 La reaccin de sntesis es semiconservadora, cada cadena sirve de molde (templete) para una nueva cadena La reaccin de sntesis se inicia en un lugar especifico sitio de origen
nico en procariotes Mltiples en eucariotes

La direccin de la replicacin siempre es en sentido 5 3

Requisitos para la sntesis de ADN

1. Origen de la replicacin o sitio de inicio
1 en baterias 10,000-100,000 en eucariotes

2. Separacin de cadenas. Servirn de molde. Semiconservadora 3. Formacin de la orquilla de replicacin 4. Sntesis en direccin 5 3 antiparalela simunltaea 5. Velocidad
850-1000 pb / horquilla en procariotes 200 pb / horquilla en eucariotes

continuacin
6. Continua en una cadena y discontinua en otra 7. Iniciador de ARN 8. Aproximadamente 20 protenas (enzimas entre otras) 9. Los cuatro nucletidos 10. Reaccin general: (dNMP)n + dNTP Mg + + (dNMP) n +1 + Ppi cadena de ADN cadena alargada 11. Sitios de terminacin

Fidelidad de la duplicacin del DNA

Error total: uno por cada 109 a 1010 Error normal durante la polimerizacin 1 nt/104-105 Actividad de exonucleasa 3 5. Eliminacin del nucletido incorrecto inmediatamente despus de la sntesis. Aumenta la exactitud 102 a 103 Edicin y reparacin

Transformacin gentica
La transferencia de genes hasta el momento se subdivide en varias categoras: a) Transferencia de ADN mediante bacterias y virus b) Fusin celular somtica y sexual c) Transferencia de genes y clulas mediante microclulas y microcpsulas d) Transplante de tejidos e) Clulas embrionarias f) Terapia gnica

Transformacin bacteriana

Transferencia de ADN mediante bacterias y virus

Agrobacterium tumefaciens ocasiona la enfermedad agalla de la corola en diversas plantas.

 La bacteria infecta a la planta y transfiere su ADN a la planta, este se integra en el genoma causando tumores y cambios metablicos

 El plsmido Ti se utiliza como vector para el entrecruzamiento en plantas o la introduccin de genes novedosos

 Gracias a Agrobacterium se ha logrado obtener diversos cultivos transgnicos que resisten a los insectos principalmente Tomate, algodn, papa, frijol de soya y canola (19941997)

Fusin celular

Clulas embrionarias
Son un tipo especial de clulas indiferenciadas que tienen la capacidad de dividirse indefinidamente sin perder sus propiedades y llegar a producir clulas especializadas

 Las posibles aplicaciones del estudio de las clulas madre es impresionante!

 Actualmente, falta muchas preguntas por responder: Qu mecanismos existen para que una clula madre se especialice? Qu mecanismo sera necesario para que una clula somtica se vuelva pluripotente?