Aquaporins water channels: molecular

mechanisms for human diseases

Peter Agre, David Kozono

FEBS Letters 555 (2003)

Bases Moleculares de la Patología

Camila Ochoa Campuzano
Peter Agre Receives 2003
Nobel Prize in Chemistry
 Introducción (I)

El agua puede atravesar las membranas biológicas

mediante dos mecanismos

 Difusión simple a través de la bicapa lipídica

 A través de canales especializados: Aquaporinas

 Familia de los canales de membrana
Aquaporinas
Se han identificado proteínas
con estructura similar en
prácticamente todas las formas
de vida
En mamíferos se han aislado y
parcialmente caracterizado 11
Aquaporinas clásicas/
Aquagliceroporinas
En mamíferos la expresión
varía según el tipo celular y la
etapa del desarrollo
Características Estructurales de AQP1

 Homotetrámero de 28 kDa con los extremos N y C

terminales situados hacia la región intracelular

 Presenta en el cDNA dos repeticiones en tandem que

contienen tres α-hélices que atraviesan la bicapa

 Los loops que conectan los segmentos transmembrana 2

y 3 contienen varios aa altamente conservados y el
motivo característico Asn-Pro-Ala (NPA)
 Estrutura de AQP1 (II)

 Cada uno de los monómeros de AQP1 está formado por

seis α-hélices transmembrana que se disponen de
manera compacta rodeando el poro acuoso formado
por los dos loops NPA que entran a la membrana desde
las superficies opuestas y se yuxtaponen en el centro
por interacciones de van der Waals

 Estructura simétrica de seudo doble plegamiento,

similar a un reloj de arena (hourglass model) que
explica la bidireccionalidad en el movimiento del agua.
Modelo del Monómero de AQP1
Esquema del canal de AQP1
 Mecanismo para el transporte de agua a través
de AQP1 excluyendo H3O+ (I)
 La estructura en forma de reloj de arena de AQP1 posee dos
vestíbulos (in y ex ) en forma de cono llenos de agua y separados
por un estrecho canal de 20 Å a través del cual las moléculas de
agua deben pasar en fila sencilla y sin establecer puentes de H

 El segmento más estrecho del canal (8 Å por encima del centro del
poro) posee un radio de 2.8 Å, similar al radio de van der Waals
de las moléculas de agua. El paso a través de esta región está
restringido por tamaño y repulsión electrostática

 -F56 (2da α -hélice)

-R195 (+, altamente conservada)(2do NPA)
-H180 (altamente conservada, carga parcial + a pH neutro)
Esquema del canal de AQP1
Mecanismo para el transporte de agua a través de
AQP1 excluyendo H3O+ (II)

 Interacción con O carbonílicos de G188, C189, G190, I 191,

sustitutos energéticamente favorables para los puentes de H

 Reorientación temporal del dipolo de agua como consecuencia de

la formación de puentes de H parciales con los dos residuos de Asn
de los motivos NPA

 Interacción con otra cadena de O carbonílicos de L75, H74, A73,

G72

-Pocos sitios de interaccion: rapidez en el movimiento

Modelo Atómico de una subunidad
 Mecanismos Moleculares para
Enfermedades en Humanos

La definición de los sitios subcelulares de

expresión ha permitido predecir sus posibles
funciones fisiológicas y potenciales desórdenes
clínicos
 AQP1

 Es muy abundante en las membranas apical y basolateral de los

túbulos renales proximales. Se ha propuesto que participe en el
mecanismo de concentración contra-corriente del filtrado
glomerular.

 Se han identificado mutaciones en tres individuos nulos para

AQP1. En ausencia de estrés estos individuos no resultaron
clínicamente afectados pero en un estudio cuidadosamente
supervisado, luego de privárseles de líquidos por 24 hrs sólo
fueron capaces de concentrar la orina a 450 mOsm (vs >1000
Osm)
 AQP2
 Participa en las etapas finales de concentración de la orina en los
conductos colectores renales. En condiciones de diuresis se
encuentra en vesículas intracelulares. Por acción de la
vasopresina es exocitada a la membrana apical permitiendo la
reabsorción de agua del filtrado glomerular

 Individuos con mutaciones en el gen de AQP2 padecen una forma

severea de Diabetes Nefrogénica Insípida (NDI) con herencia
recesiva y pueden llegar a liberar hasta 20 L de orina por día.
Varios de estos individuos resultaron homocigóticos o
heterocigóticos compuestos para sustituciones en aa que forman
parte de las paredes del poro.

 Se piensa que la sobreexpresión de AQP2 pueda contribuir en

estados de retención de líquido encontrados en pacientes con fallo
cardíaco o embarazadas
NID provocada por una sustitución R195C
 AQP6
 Se postula que participe en los mecanismos renales de control de
la acidificación de la orina.
 Muestra una permeabilidad al agua mínima. Se localizan junto a
H+-ATPasa en vesículas intracelulares en las células secretoras de
ácido del conducto colector.
 Funcionan como canales aniónicos regulados por pH con gran
selectividad para nitrato.
 Se piensa que AQP6 pueda actuar como regulador negativo de las
poblaciones intracelulares de H+-ATPasa, enzima que se conoce es
inhibida por ácido nítrico
 AQP0
 Se expresa en células del cristalino. Posee baja permeabilidad al
agua. Algunos estudios sugieren que intervenga en la adhesión
molecular célula-célula
 Se han identificado mutaciones en el gen que codifica para AQP0
con herencia dominante que ocasionan cataratas en niños
pequeños. Estas tienen lugar en aa muy conservados y críticos
para la estructura
 E134G: opacidades lamelares correspondientes con el área del
cristalino al nacer
 T138R: opacidades polimórficas en todo el cristalino debido a
la deposición de proteína
 La identificación de grandes perturbaciones en el gen de AQP0 en
individuos con catarata congénita severa sugiere que
polimorfismos más sutiles podrían ser factores de riesgo que
contribuyan a la precipitación de las cataratas, mucho más
comunes en individuos mayores
Cataratas Congénita producida por una
sustitución E134G
 AQP4
 En el cerebro se encuentra altamente concentrada en la
membrana perivascular de las células astrogliales. Se piensa que
regule el movimiento de agua entre el parénquima del cerebro y el
espacio vascular.

 En ratones, tanto la delección del gen de AQP4 como el cambio en

la localización celular de la proteína resultaron protectores en
animales estresados por edema cerebral agudo hiponatrémico o
por daño cerebral isquémico

 El cerebro, al ser un órgano protegido por una estructura rígida

como el cráneo, posee espacio limitado para acomodar el
hinchamiento sin que se produzcan daños irreversibles en las
neuronas. La supervivencia y recuperación depende en muchos
casos de la prevención o rápida reducción del edema cerebral, lo
cual indica que la manipulación farmacológica de AQP4 puede
ofrecer importantes oportunidades terapeúticas
 Aquagliceroproteínas de mamíferos

AQP3 (eritrocitos): se han identificado humanos nulos para esta

proteína y en ellos el transporte de glicerol en los eritrocitos está
muy disminuido
AQP7 (adipocitos): liberación del glicerol procedente de la
degradación de los TAG
AQP9 (hepatocitos): captación del glicerol para gluconeogénesis. Su
expresión aumenta en gran medida durante el ayuno prolongado y
la diabetes mellitus descontrolada. Individuo homocigótico para
una mutación de pérdida de sentido en AQP7 (G226V) mostró
una muy disminuída capacidad para liberar glicerol durante el
ejercicio.
AQP7/AQP9 transportan arsenito As(OH)3, lo cual está relacionado
con la toxicidad hepática por arsénico