TRANSCRIPCIN DEL DNA

GENTICA MOLECULAR

Trascripcin del ADN

Es el primer proceso de la expresin gnica, mediante el cul se transfiere la informacin contenida en la secuencia del ADN hacia la secuencia de protena utilizando diversos ARN como intermediarios.

Antes del inicio de la transcripcin se necesitan toda una serie de factores de transcripcin que ejercen de factores de iniciacin, que se unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la transcripcin ha de comenzar y se sintetice el ARN. Esta secuencia de ADN en la que se ensamblan los complejos de transcripcin se llama promotor.

Los promotores se localizan en los extremos 5'-terminales de los genes, antes del comienzo del gen, y a ellos se unen los factores de transcripcin mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno

TRANSCRIPCIN

ES LA SNTESIS DE RNA A PARTIR DEL DNA.

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 CUNDO OCURRE? G1 G2

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Dnde Ocurre?
Procariota

Eucariota

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Dra. Genoveva Martn MSc. 2008

REGLAS FUNDAMENTALES
Se realiza de forma complementaria a la cadena molde de DNA. Muy selectivo, por seales (Secuencias DNA). No necesita iniciador. Ocurre unidireccionalmente. La direccin de lectura es 3 5 La direccin de sntesis es 5
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REQUERIMIENTOS DE LA TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS

1- MOLDE:
CADENA DE DNA DPLEX 2- SUSTRATOS: 4 RIBONUCLESIDOS TRIFOSFATADOS (ATP, GTP, CTP y UTP) 3- ENZIMA: RNA POLIMERASA DNA DEPENDIENTE (RNA POL)
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RNA Polimerasa (E. coli)

Subunidad o Factor sigma () Le permite reconocer las regiones promotoras del DNA. Diferentes factores reconocen diferentes grupos de genes.
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HOLOENZIMA Enzima Ncleo + Factor

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIN

- INICIACIN

3- ELONGACIN 4- TERMINACIN 5

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SECUENCIAS DE CONSENSO DE LOS PROMOTORES

~19 pb
GENERAL TGTTGACA
REGIN -35

~7 pb

TATAAT ...
REGIN -10 SITIO DE INICIACIN

lac ACCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGAATTGTG trp AAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCGAACTAGTTAACTAGTACGCAAGT

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5GCTATAATGTGTGGAGCATTG 3 -10 -5 +1 +5
5-TATAAT-3 LA CAJA PRIBNOW (6n)

LOCALIZADA ALREDEDOR DE -10pb.

5-TTGACA-3 SECUENCIA -35

LOCALIZADA ALREDEDOR DE -35pb.

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INICIACIN

1.

Localizacin y unin de la RNA Pol a un sitio especfico del DNA, el Promotor.

3. Se desenrollan y separan las cadenas del DNA.

4. Formacin del Promotor abierto.

2. El Factor se une a la RNA Pol ayudndola en su unin con el DNA.

5. Deslizamiento de la RNA Pol sobre el DNA hasta llegar a la 1ra. base que ser copiada (+1).

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1.

Entra el primer ribonuclesido trifosfatado (+1) que ser el extremo 5 del RNA (ATP o GTP).

3. Formacin del enlace fosfodister. Accin de las Pirofosfatasas.

4. Contina hasta incorporar de 6 a 9 nucletidos.

2. Unin del segundo ribonuclesido trifosfatado (+2) regularmente C.

5. Separacin de la subunidad . Se forma un Complejo Ternario estable. (RNAPol:DNA:RNA naciente)

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ELONGACIN

1.

Unin del prximo ribonuclesido trifosfatado.

2. Formacin del enlace fosfodister. Accin de las Pirofosfatasas.

Velocidad promedio: 30 60 n/s

3. Movimiento de la enzima a lo largo del DNA. (Desenrollando por delante y re-enrollando por detrs- DNA Topoisomerasas I y II.) 4. Se alarga el RNA con la entrada sucesiva de los dems nucletidos hasta alcanzar la seal de terminacin.
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Terminacin:
La terminacin est sealizada por la informacin contenida en sitios de la secuencia del ADN que se est transcribiendo, por lo que la ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias especiales del ADN.
Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el extremo de los genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando secuencias palindrmicas, que cuando se transcriben el ARN recin sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la burbuja de transcripcin.

TERMINACIN INDEPENDIENTE DEL FACTOR

T T T T T T T T

A A A A A A A A
A G C C C G U U U U U U U U C G

G
G C G

Factor rho () Protena 6 sub-unidades. Se une al RNA, hidroliza ATP y la energa liberada es capaz de moverlo a lo largo del RNA que se est sintetizando en direccin de la burbuja de transcripcin.
Cuando llega a dicha burbuja, el factor rho disocia el hbrido DNA-RNA por un mecanismo desconocido, liberando el RNA al citoplasma.

POSTTERMINACIN O MADURACIN

RNAr y RNAt (PROCARIOTAS / EUCARIOTAS )

Todos los RNAr y RNAt en procariotas sufren modificaciones hasta ser totalmente funcionales.

RNAt Modificacin
de bases por metilacin, desaminacin o reduccin, formndose bases raras.

RNAr a partir de un nico precursor (30S) se forman los RNA precursores largos de los RNAr. RNAr 5.8s, 16s y 23s.

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POSTTERMINACIN O MADURACIN

RNAm PROCARIOTAS

RNAm procariota Es funcional. RNAm Monocistrnico No necesita maduracin. Informacin para No se modifica. sntesis de una Corresponde al RNA protena. Transcrito Primario.

RNAm Policistrnico Informacin para sntesis de varias protenas.

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Transcripcin en procariotas
Ensamblaje de protena e inicio de transcripcin

Responsable de reconocer la seal en la cadena de DNA.

Interactan con : DNA RNA sintetizado ribonucletidos Conforman el sitio cataltico de la enzima.

Iniciacin y Regin Promotora

Regin Promotora

Complejo ADN/ARN polimerasa

Estructura de la Regin Promotora

AT

TTGACA
-35

16-19pb

TATAAT
-10

5-9 pb

Purina

+1

Reconocimiento de la Regin Promotora

Transcripcin
Cadena codificante:
5-- CTG CCA TAC GAT CTG CGC TGC --3 DNA

Cadena Molde:

3-- GAC GGT ATG CTA GAC GCG ACG

--5

5-- CUG CCA UAC GAU CUG CGC UGC

--3

RNAm

Elongacin

A 40 nucletidos x segundo

Terminacin
Rho Independiente Rho Dependiente

TIPOS DE RNA ORIGINADOS EN LA TRANSCRIPCIN

TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS

REQUERIMIENTOS DE LA TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS

1- MOLDE CADENA DE DNA DPLEX 2- SUSTRATOS: 4 RIBONUCLESIDOS TRIFOSFATADOS (ATP, GTP, CTP y UTP) 3- ENZIMAS; 3 CLASES: RNA POLIMERASA I (RNA POL I) RNA POLIMERASA II (RNA POL II) RNA POLIMERASA III (RNA POL III)
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RNA POLIMERASAS EUCARIOTAS

Presentes en el ncleo. Grandes enzimas con mltiples subunidades. Cada una reconoce tipos particulares de genes. RNA Pol I Sintetiza el precursor del RNAr grande (28S, 18S y 5.8S) Nuclolo. RNA Pol II Sintetiza el precursor del RNAm Nucleoplasma. RNA Pol III Sintetiza RNAr pequeo 5S, RNAt Nucleoplasma.
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TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS
Proceso ms complejo que en procariotas. Participan numerosos factores de transcripcin. Todos los RNAm eucariotas son madurados.

Las Etapas son similares a la de los procariotas con algunas variaciones.

PROMOTORES Caja TATA (-25) Caja CAAT (-70 a -80)

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POST- TERMINACIN O MADURACIN

CASQUETE (CAP) 7-metil-Guanosina en extremo 5 Permite la iniciacin de la traduccin porque favorece su fijacin al ribosoma y ayuda a su estabilidad.

COLA DE POLI A 40 a 200 nucletidos de A en extremo 3 Ayuda a su estabilidad, facilita su salida del ncleo al citoplasma y lo protegen de la destruccin enzimtica.

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EXONES
Las regiones de un gen que contienen la informacin para producir la protena codificada. Cada exn codifica una porcin especfica de la protena completa.

El conjunto de exones forma la regin codificante del gen.

INTRONES
Regiones del DNA que separan los exones de un gen. No codifican protenas. Todava no se conoce su funcin. Deben ser eliminados del transcrito primario de RNA. Los intrones son comunes en todos los tipos de RNA eucariotas, RNAm. En algunos RNAt y RNAr de procariotas. Existen 4 tipos de intrones: Grupos I IV.

TRANSCRIPCIN EUCARIOTAS

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TRANSCRIPCIN: 1- Iniciacin: Una RNA-polimerasa comienza la sntesis del precursor del RNA a partir de unas seales de iniciacin "secuencias de consenso " que se encuentran en el DNA.

RNA polimerasa

T A

A U

A U

A U

C G

T A

T A

G C

C G

A U

C G

G C

G C

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TRANSCRIPCIN: 2. Alargamiento: La sntesis de la cadena contina en direccin 5'3'. Despus de 30 nucletidos se le aade al RNA una cabeza (caperuza o lder) de metil-GTP en el extremo 5 con funcin protectora.

RNA polimerasa

T A

A U

A U

A U

C G

T A

T A

G C

C G

A U

C G

G C

G C

m-GTP
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TRANSCRIPCIN: 3- Finalizacin: Una vez que la enzima (RNA polimerasa) llega a la regin terminadora del gen finaliza la sntesis del RNA. Entonces, una PoliA polimerasa aade una serie de nucletidos con adenina, la cola poliA, y el RNA, llamado ahora RNAm precursor, se libera.

PoliA polimerasa

m-GTP

G C

RNAm precursor

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4. Maduracin (cont.): El ARNm precursor contiene tanto exones como intrones. Se trata, por lo tanto, de un ARNm no apto para que la informacin que contiene sea traducida y se sintetice la correspondiente molcula proteica. En el proceso de maduracin un sistema enzimtico reconoce, corta y retira los intrones y las ARN-ligasas unen los exones, formndose el ARNm maduro.

ARNm maduro precursor

Cabeza
AUG UAG

cola
AAAAAA

44