Tinciones

Objetivo

Poder llegar a conocer los tipos de tinciones as como su importancia y para que sirven.

Tincin

Tcnica auxiliar en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Tambin se denomina coloracin, ya que implica agregar un colorante especfico a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto.

Diccionario en lnea. Invitrotv.com. 1 de octubre de 2013.

Usos

Descripcin de microorganismos en base a su morfologa, estructura y distribucin. Deteccin de determinados microorganismos para diagnostico clnico, por ejemplo. Clasificacin tintoriales. de microorganismos segn sus caractersticas

Tipos de tinciones

Simples: se usa un solo colorante disuelto en solucin acuosa o alcohlica, y se suplementan con un mordiente para una mejor fijacin del colorante adems de aumentar el grosor de algunas estructuras para su mejor visin. Sirven para ver la morfologa y las agrupaciones que forman los microorganismos entre ellos y con otras clulas.

B.Fany. http://microbiologiavip.blogspot.mx/2012/02/tinciones.html 2013. Imagen: Tincin simple con azul de metileno. Quirino Cristobal, Luis Armando. http://kirino12.blogspot.mx/2009/05/tarea-no3.html. 13 de mayo de 2009.

Diferenciales: Se usa mas de un colorante. Tie de diferente modo a las clulas de distintas especies.

Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada Carbunco, encontrados en una muestra de lquido cerebroespinal. Si hubiera una especia de bacteria Gram negativa aparecera de color rosa. El resto son leucocitos atacando la infeccin.

B.Fany. http://microbiologiavip.blogspot.mx/2012/02/tinciones.html 2013.

Especficas: Mientras las tinciones diferenciales permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos, las tinciones especficas incrementan el contraste en las clulas microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen los flagelos y las cpsulas.

Flores, Yazz. http://realisaciondeanalisis.blogspot.mx/2012/06/tinciones-usadas-en-microbiologia.html. 5 de junio de 2012.

Tcnicas

La tincin de Gram La tcnica de la tincin de Gram fue desarrollada por el bacterilogo dans Christian Gram en 1884. Esta tincin clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas.

Flores, Yazz. http://realisaciondeanalisis.blogspot.mx/2012/06/tinciones-usadas-en-microbiologia.html. 5 de junio de 2012.

Paso 1. Tincin con cristal violeta.

Paso 2. Fijacin con una solucin de yodo. Estabiliza el cristal violeta, todas las bacterias en la preparacin permanecen de color prpura o azul.

Murray, Capitulo 2. pp16-18 y 21. Escuela de la medicina Universidad de Carolina del sur. Microbiologa e inmunologa on-line. http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter2.htm. May 5 2009.

Paso 3. Extraccin con alcohol u otro solvente. Decolora algunas bacterias (las Gram negativas) y no otras (las Gram positivas).

Paso 4. Tincin de contraste con safranina. Las bacterias gram positivas ya estn teidas con cristal violeta y permanecen de color prpura. Las bacterias gram negativas se tien de color rosa.

Murray, Capitulo 2. pp16-18 y 21. Escuela de la medicina Universidad de Carolina del sur. Microbiologa e inmunologa on-line. http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter2.htm. May 5 2009.

Cocos Gram +

Racimos: forma tpica de Staphylococcus sp, como S. aureus.

Cadenas: forma tpica de Streptococcus sp, como S. pneumoniae, Streptococcus grupo B.

Tetradas: forma tpica de Micrococcus sp

Bacilos Gram +

Gruesos: forma tpica de Clostridium sp, como C. perfringens, C. septicum

Finos: forma tpica de Listeria sp

Ramificados: forma tpica de Actinomycetes y Nocardia, como A. israelii

Cocos Gram

Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis Tambin Moraxella sp y Acinetobacter sp aparecen con morfologa de diplococos. Acinetobacter puede ser pleomrfico, y a veces aparece como coco Gram-positivo.

Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.

Bacilos Gram

Bacilos finos: forma usual de enterobacteriaceae, como E. Coli Cocobacilos: forma usual de Haemophilus sp, como H. influenzae Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, y Campylobacter sp, como C. jejuni Forma de aguja fina: forma usual de Fusobacterium sp

Otras tinciones

RODAMINA-AURAMINA Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso.

NARANJA DE ACRIDINA

El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si est muerto.

Cocultivo de clulas tumorales LM3 y mastocitos (MC). Coloracin: Naranja de acridina en ClNa 0.1M. Se observan dos MC color naranja.

ZIEHL-NEELSEN (BAAR) El frotis se tie durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar

BLANCO DE CALCOFLOR

Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflor aumentando considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras. Segn fue descrito por Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen inicial de los materiales clnicos.

Fragilidium al microscopio ptico (40X), y con tincin calcoflor para observar sus tecas. Autor de la ltima imagen: Alf Skovgaard disponible en http://www.alfskovgaard.dk

http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.html. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm