Amebas de vida libre

Introduccin Epidemiologa Biologa Patologa Formas clnicas Diagnstico Estudios en Len, Nicaragua

Byron Leiva T. MSc., PhD Departamento de Microbiologa y Parasitologa Facultad de Ciencias Mdica UNAN-Len

Introduccin
Amebas de Vida Libre (AVL) representan un grupo de amebas, que se encuentran distribuidas ampliamente en la naturaleza, entre las cuales se encuentran las especies de Naegleria, Acanthamoeba y Balamuthia. AVL son protozoos inofensivos en la naturaleza. En 1965 Malcom Fowler y Rodney F. Carter reportaron los primeros cuatro casos en humanos. Naegleria fowleri es un amoebaflagelado el cual produce meningo- encefalitis amebiana primaria (MAP). Varias especies de Acanthamoeba son patgenos oportunistas estas AVL son causantes de Encefalistis granulomatosa amebiana, infecciones en la piel, neumona y queratitis.

Epidemiologa
Esta infeccin ha sido descrita en forma creciente en el mundo, principalmente en EUA (en estados del sur, como Florida y Texas), Reino Unido, Australia, Nueva Zelanda y Checoeslovaquia. En Latinoamrica han sido reportados casos en Venezuela, Brasil, Argentina, Mxico y Per considerndose estas dos ltimas naciones como reas endmicas. En el ao 2000 se report la descripcin de 30 casos diagnosticados en Per desde 1985. 10,000 casos de queratitis amibiana, a nivel mundial, 80% asociado a empleo inadeacuado de lentes contacto.

La meningoencefalits amibiana
Causada principalmente por las siguientes especies de amebas de vida libre: Gnero: Naegleria N. fowleri Acanthamoeba A. culbesrtoni A. castellani A. polyfaga A. astronixis A. rhysopodes Balamuthia B. madrillaris Hartmannella H. vermiformes

Gnero:

Genero: Genero:

Diferencias morfolgicas de las amebas de vida libre causantes de meinigoencefalitis

Naegleria

Acathamoeba Trofozoito Tamao Flagelos Pseudpodos Quiste Tamao Pared

15 25 m presentes romos

15 50 m Ausentes Espinosos

7 15 m delgada

10 25 m doble

Naegleria fowleri Morfologa

Naegleria, Acanthamoeba, Hartmanella

Amebas de vida libre trofozoitos

Acanthamoea

Negleria

Balamuthia mandrillaris
Los trofozoitos miden de 15 a 60 m. Los quistes miden de 15 a 30 m de dimetro y tienen una triple pared

Vas de penetracin de las amebas de vida libre causantes de meningoencefalitis

Naegleria: Puerta de entrada : mucosa nasal Invasin del bulbo olfatorio a travs de la placa cribiforme

Acanthamoeba: Puerta de entrada no determinado. Puede ser. Tracto respiratorio superior, piel, conjuntiva ocular. Diseminacin hematgena al cerebro

Ciclo de vida

HBITAT DE AMEBAS DE VIDA LIBRE

Patologa
N. fowleri

Acanthamoeba

Naegleria fowleri.
Naegleria spp. es un gnero de protistas de la familia Vahlkampfiidae, en la clase Heterolobosea. Actualmente se reconocen 8 tipos de N. fowleri, que se distinguen mediante pruebas de secuenciacin de DNA

Factores patognicos de N. fowleri

N. fowleri penetra va nasal placa cribiforme neuroepitelio olfatorio espacio subaracnoideo parnquima cerebral. - Tamao del inculo y virulencia de la cepa. - Mecanismos de contacto. - Fagocitosis. Altamente fagoctica. Utiliza amebostomas. - Protena CD59-like en su superficie. Inhibe formacin poro MAC (Complejo de ataque a la membrana). - Fosfolipasa, y actividad de neuraminidasa o elastasa desmielinizacin, lisis celular. - Protena formadora de poros lisis celular. - Protena citoptica apoptosis. - Actualmente se cuenta con el genoma mitocondrial completo de N. fowleri, y un segmento de 60 kb del genoma nuclear. Es importante para la patologa y el diagnstico

Patologa de la meningo encefalitis amibiana primaria

Naegleria: Meningitis purulenta y ecefalitis hemorrgica necrtica Lesiones en rea olfatoria, cerebro anterior y cerebelo.

Cuadro clinico

Los signos y sntomas inician en promedio 1 -7 das despus de la exposicin, el curso de la enfermedad es fulminante, con una mortalidad del 95%, habitualmente dentro de los 10 15 das posteriores a la aparicin de manifestaciones clnicas: Cefalea bifrontal, bitemporal Fiebre elevada Nusea, vmito Cambios en la conducta (irritabilidad, conductas aberrantes) Datos de irritacin menngea Confusin Convulsiones Parlisis pares craneales (III, IV, VI) x edema cerebral Progreso rpido hacia el coma Muerte: hipertensin intracraneal herniacin cerebral paro cardiopulmonar

El gnero Acanthamoeba

Grupo con alrededor de 24 especies, ha sido reclasificado en 15 diferentes genotipos. La especie predominante en gran parte de los casos corresponde al genotipo T4, y se sugiri que fuera denominado complejo A. castellanii (Booton G, Visvesvara G, et al. 2005.) La infeccin es de presentacin insidiosa (semanas, meses). Vas de entrada de los trofozotos: piel, aparato respiratorio bajo, nasal.

La infeccin del SNC asociada a Acanthamoeba

La mayor parte de los casos a personas inmunocomprometidas, con HIV+/SIDA Quimioterapia Enfermedades crnicas, debilitantes, diabetes, lupus sistmico, cncer, desnutricin y alcoholismo, TB, otras. Tambin influye el empleo excesivo de esteroides y antibiticos.

Factores patognicos

Las clulas inmunes presentes en cerebro sugieren un desequilibrio en los niveles de citocinas, con sobreproduccin de citocinas proinflamatorias. - Adhesin a clulas de la barrera hematoencenflica (endotelio capilar, plexos coroides, membrana de la coroides) mediante la protena de unin de la manosa (BMP) expresada en el trofozoto. - Las serin-proteasas de Acanthamoeba alteran la integridad de la barrera hematoenceflica: degradan las uniones estrechas, incluyendo la zonal ocluddens1 y la ocludina. - Induccin de apoptosis - Fagocitosis mediante las llamadas copas de alimentacin o amebostomas. - Se ha caracterizado una protena formadora de poros, acantoporina.

Caractersticas clnicas de la meningoenceflitis por Acanthamoeba

En pacientes inmunodeprimidos o con enfermedad debilitante. Comienzo insidioso Alteraciones mentales, alucinaciones, convulsiones, cefalea, fiebre, signos de meningismo. LCR purulento y con examen bacteriolgico negativo

Sndromes causados por Acanthamoeba

Meningoencefalitis necrosante granulomatosa focal subaguda y crnica Lesiones dermatolgicas semejantes a micosis profundas Ulceracin corneal y uveitis Diseminacin granulomatosa a diversos tejidos

Acanthamoeba y Balamuthia pueden albergar Legionella pneumophila, Coxiella burnetii, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio cholerae, Helicobacter pylori, Listeria monocytogenes y Mycobacterium avium, mimivirus: Potencial como reservorios

Queratitis amibiana

Hallazgos recientes implican al genotipo T4 - principalmente A. castellanii en ~ 94% de los casos como agente etiolgico de la queratitis de origen amibiano (Booton, Visvesvara et al, 2005; Booton et al. 2009). La enfermedad se asocia en el 80% de los casos a uso de lentes de contacto (limpieza y/o almacenamiento inadecuados) por sujetos sanos e inmunocomprometidos, a su empleo durante deportes acuticos y a traumatismos corneales.

Diagnstico
Es fundamental, y se basa en el hallazgo de los infiltrados tempranos, antecedentes, signos y sntomas, an antes de que aparezcan lceras. Se emplean: Raspado de epitelio, para su observacin en fresco y con diferentes tinciones: Giemsa, Tricrmica, PAS, Calcofluor white, este ltimo permite observar infiltrado inflamatorio, quistes y trofozotos. En lesiones avanzadas, es necesario recurrir a la biopsia corneal. Cultivo. Microscopa confocal para el estudio del epitelio (costosa, y en sitios donde existe el equipo). IFI, ELISA. Tcnicas recientes incluyen, con excelentes resultados, PCR.

Diagnstico de la meningoencefalitis amibiana primaria

Imagenologa: RMN y TAC se emplean para visualizar la localizacin y extensin de las lesiones ("masa ocupativa", edema, hidrocefalia, otras) Examen del LCR: Tinciones
No debe refrigerarse No debe centrifugarse

Cultivo en placa de agar no nutritivo, con suspensin de E. coli. Inoculacin intranasal de ratones Inmunodiagnstico: IFI, deteccin de

anticuerpos circulantes. Molecular: FISH, PCR.

Estudio en Nicaragua, a partir de diferentes fuentes de agua

Byron Leiva, Emma Clasdotter, Ewert Linder and Jadwiga Winiecka-Krusnell Free-living Acanthamoeba and Naegleria spp. Amebae in water sources of Len, Nicaragua. Rev. Biol. Trop. Vol. 56 (2): 439-446, June 2008.

Diferentes fuentes de agua

Lugares:
Len: rea urbana y rural, San Jacinto. Chinandega: Posoltega. Managua:Tipitapa, trapiche, trapichito. Boaco: Aguas claras.

Muestra:
A partir de: Agua de tubo Corrientes Pozo Contenedores de agua. Tubo cnico 50 ml de agua.

Mtodos de Identificacin:
Muestras de agua Filtrada Cultivo en agar- agar con bacteria (E. coli) Microscopa

Test Test Fisiolgicos Immunohistoqumicos

Test Molecular

Morfologa/ tamao

IF Exflagelacin/ Termotolerancia Tincion de Cellulose

FISH

10 m

Mtodos de identificacin Immunohistoqumicos y moleculares

Identification of Acanthamoeba Fluorescence in situ hybridization (FISH), Sondas especficas de genes, 18S rRNA. cellulose staining FISH

Identificacin of Naegleria

FISH

IF

Anticuerpos Monoclonales y Policlonales anti-Naegleria

Resultados
Deteccin de amebas de vida libre en muestras de aguas de Len y areas geotermales.
90 80 70 60 % 50 40 30 20 10 0 40C 42C >45C 40C 42C >45C Acanthamoeba Naegleria

Temperature

Len

Area Geotrmicas

Conclusiones

Nuestro estudio encontramos que Amebas de vida libre estn distribuidas ampliamente en diferentes fuentes de agua en Nicaragua. Acantamoeba y amebas termotolerantes potencialmente patgenas han sido encontradas con alta prevalencia en las dos reas estudiadas.

24 de 39 (61.5%) de amoebaflagellados podran ser identificadas como Naegleria spp., 50% de ellas fueron asignadas como N. lovanensis. La prevalencia de N. lovanensis fue ms alto en aguas de las reas geotrmicas (56.3%) que en la rea del municipio de Len (37.5%).
La presencia de amebas termotolerantes como Negleria en diferentes fuentes de aguas, especialmente N. lovanensis es un indicador de la presencia de N. fowleri, esto sugiere la posible existencia de amebas patgenas en estos mismos lugares.

OTROS ESTUDIOS

Determinar la frecuencia de Amebas de vida libre en las aguas de los diferentes ambientes del hospital Espaa de Chinandega.

Objetivos Especficos

Describir los diferentes ambientes del hospital con fuentes de agua. Aislar e identificar los tipos de amebas de vida libre presente en las muestras de aguas estudiadas. Relacionar las especies de amebas de vida libre aisladas con fuentes de aguas de los diferentes ambientes del hospital.

RESULTADOS TABLA 1.Descripcin del rea con las diferentes fuentes de agua
FUENTES DE AGUA BAO AMBIENTE CIRUGIA COCINA CONSULTA EXTERNA n 2 0 0 2 3 0 2 3 LAVAMANOS n 3 1 PILA n 0 4 0 1 0 0 0 1 0 1 TOTAL n 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

5
2 2

DIALISIS EMERGENCIA LABORATORIO MEDICINA

5
3 1

ORTOPEDIA
PATOLOGIA UCI TOTAL DE FUENTES AGUA

0 1

5
3

13 (26%)

30 (60%)

7 (14%)

50 (100%)

Tabla 2. Aislamiento e identificacin de Amebas de vida libre presente en las muestras de aguas estudiadas
Especie Cultivo Frotis Ex flagelacin IFI Total

(+) Acanthamoeba spp Naegleria spp 10(20%) 10

(+) *Neg

(+)

**AbMo

***AbPoli 10 (20%)

No aplica

2(4%)

*Neg

2 (4%)

AVL no 9 identificadas

*Neg

No aplica

Total

21(42%)

21

21

* Neg: Negativo **AbMo: Anticuerpos monoclonales * * * AbPoli: Anticuerpos policlonales

Conclusiones
1. De 50 muestras examinadas, se encontr la presencia de 21 (42%) AVL.

2. De las fuentes de aguas del hospital, donde ms se encontr AVL fue en lavamanos.
3. Se logr aislar un mayor porcentaje de amebas del gnero Acanthamoeba 10 (20%) y Naegleria 2 (4%). 4. De manera general se encontr AVL en lavamanos con 11 y en menor cantidad amebas fue en Pilas con 3. 5. De la presencia de Naegleria spp, monoclonales y policlonales por IFI. fue identificada utilizando anticuerpos

6. En los ambientes donde ms predominaron las AVL fue en las salas de ciruga 4 (19%), medicina 3 ( 14%) y emergencia 3 (14%).

Identificacin de amebas de vida libre en aguas de uso domstico, en la comarca Chacraseca del Departamento de Len

UBICACIN GEOGRFICA DEL REA DE ESTUDIO

Municipio de Len

Comunidad de Chacraseca

COMUNIDAD DE CHACRASECA

SELECCIN DE MUESTRAS

Tabla N 4: Distribucin de Amebas de Vida Libre segn fuentes de agua

Fuentes de Agua AVL Encontradas Naegleria spp Acanthamoeba spp Otros* Negativa Total
*Amebas de Vida Libre no identificadas

Pozos
13 2 1 10 26 (72)

Pilas
0 1 5 0 6 (17)

Agua de Lluvia 0 0 4 0 4 (11)

Total
13 3 10 10 36

Agradecimientos:

Estidiantes de Bioanlisis, Medicina y Biologa, UNAN-Leon Emma Claesdotter, Estudiante de Suecia. Personal del Dpto. De Microbiology, UNAN-Leon: Brenda Mora Oscar Arbiz Jairitzinnia Palacios William Morales (Fotos) Sida/SAREC

Cerro Negro. 1999.

ANEXOS