FITOHORMONAS

Las sustancias controladoras del crecimiento y el desarrollo en las plantas

Caractersticas: Son pequeas molculas qumicas que afectan al desarrollo y crecimiento de los vegetales a muy bajas concentraciones y que actan solamente como signos o seales

El mecanismo de accin de una hormona se define como la reaccin primaria capaz de iniciar una serie de eventos moleculares que conducen a un efecto fisiolgico medible .

Esto implica que la clula est programada para responder a las seales hormonales (primeros mensajeros) mediante mecanismos especficos

Cmo actan las fitohormonas?

Se proponen dos mecanismos :

1. La hormona atraviesa la membrana celular de la clula diana y alcanza el citoplasma. All se une a una molcula (receptor) y forma un complejo hormonareceptor. A partir de aqu, el complejo puede disociarse o puede entrar en el ncleo como tal y afectar a la sntesis de los ARNm. Esta efecto sobre la transduccin es lo que produce la respuesta fisiolgica.

2. La hormona se une a un receptor de membrana en la clula diana. La unin hormona-receptor produce en este ltimo un cambio conformacional que conduce a una cascada interna de reacciones citoplsmicas: nuevas actividades enzimticas, modificacin de procesos metablicos, induccin de sntesis de ARNm, etc

Auxinas
Efecto de la luz

Provocan la elongacin de las clulas. Se sintetizan en las regiones meristemticas del pice de los tallos y se desplazan desde all hacia otras zonas de la planta.

Transporte polar

Bioensayo:
cuantificacin

Biosntesis del AIA

Estructura de algunas auxinas naturales. ..

Ejemplos de algunas auxinas sintticas.

Zonas de Biosntesis:
pices de coleptilos

Meristemas apicales de tallos y brotes

Embriones, hojas jvenes, flores, frutos Semillas en desarrollo

Ias races contienen auxinas pero no las sintetizan

Las auxinas pueden estar libres o conjugadas con aminocidos o glucosa

La auxina estimula la elongacin celular

Hiptesis del crecimiento cido

Concentracin ptima en tallo: 10-5M

Esquema hipottico del transporte polar de las auxinas

Dominancia apical

La auxina estimula la formacin de races en esquejes

El extremo de los tallos se sumerge durante 5 segundos en soluciones conteniendo 50% de etanol y 0.01% (A) y 0.5% (B) de cido naftalnactico, NAA (una auxina sinttica).

Las auxinas estimulan el desarrollo de las races adventicias

La auxina producida por el embrin que se est formando promueve la maduracin de las paredes del ovario y el desarrollo de los frutos (A) Fresa normal. (B) Fresa en la que se han extrado todos los frutos (aquenios). (C) Fresa a la que se han extrado una tira horizontal de aquenios.

Efecto de la gravedad. Clulas centrales de la caliptra. (A) En su orientacin vertical normal. (B) Despus de que la raz se haya colocado horizontalmente. Los cuerpos globulares oscuros que contienen almidn son los amiloplastos (estatolitos).

Gravitropismo

Cmo acta la auxina?

La auxina incrementa la plasticidad de la pared celular. Cuando la pared celular se ablanda, la clula se dilata debido a la presin de turgencia. A medida que se reduce la presin del agua, por dilatarse la clula, sta toma ms agua y de este modo continua agrandndose hasta que la pared opone resistencia.

Estudios realizados en clulas de tallo demostraron que el AIA incrementaba la biosntesis de celulasa. Los tejidos vegetales tratados con AIA tienen de 12 a 14 veces ms celulasa que los no tratados, en condiciones idnticas. As, es presumible que algunos de los efectos producidos en la pared celular provengan de la produccin de celulasa, la cual rompe las trabas que impiden el crecimiento de la pared celular

Posibles etapas en la accin de la auxina

Posibles etapas en la accin de la auxina. (1) El AIA se enlaza a un receptor de membrana especfico.

(2) el complejo AIA-receptor interacta con otros ligandos, iniciando una cadena de eventos bioqumicos; (3) las bombas de protones de la membrana se activan, acidificando la pared celular y causando su debilitamiento;

 (4) se estimulan la sntesis y secrecin de los componentes de la pared celular; (5) protenas reguladoras migran desde el citosol al ncleo;

(6) estas protenas se enlazan a sus sitios reguladores en genes especficos, estimulando la transcripcin;

(7) la traduccin de los ARNm regulados por auxina conducen a protenas que intervienen en el crecimiento celular

Experimentos detectan respuestas de crecimiento en tejido de coleoptilo dentro de los 10 minutos posteriores a la aplicacin de la auxina. Uno de los efectos primarios del tratamiento con auxina implica cambios en el metabolismo celular que producen un rpido bombeo de protones a travs de la membrana celular

La acidificacin de la pared celular conduce, a la hidrlisis de los puentes que unen las distintas molculas dentro de la pared y, consecuentemente, a la elongacin celular forzada por la presin de turgencia. Se conoce como hiptesis del crecimiento cido.

Se comprob que soluciones cidas (pH 5.0-5.5) causan una elongacin similar a la producida por el tratamiento con auxinas.

Muchos investigadores afirman ahora que las auxinas tienen dos efectos diferentes sobre la elongacin celular: un efecto a corto tiempo, rpido, causado por la hiptesis cida y un segundo efecto, continuado, debido a la regulacin de la expresin gnica. Se ha demostrado que la auxina produce la expresin de 10 genes especficos, todos presumiblemente implicados en el crecimiento celular. Se sabe que la etapa afectada por las auxinas es la transcripcin. Este efecto de las auxinas sobre la expresin gnica parece ser similar al de algunas hormonas en los animales

USOS
Se usan en el cultivo de plantas ornamentales y frutales debido a que aceleran el enraizamiento de estacas. Se riegan por aspersin para acelerar los procesos de floracin y fructificacin de los frutales. Se aplican por aspersin, a mayores concentraciones, como herbicidas en el control de plantas indeseables. En jardinera se cortan los pices de los tallos para eliminar la dominancia apical.

Actan en la Mitosis. Alargamiento celular. Formacin de races adventicias. Dominancia Apical Herbicida Graviotropismo Diferenciacin de xilema Regeneracin del tejido vascular en tejidos daados Inhibicin del crecimiento radical en concentraciones bajas Floracin, senectud, geotropismo, Retardan la cada de hojas, flores y frutos jvenes dominancia apical

Aplicaciones en la Agricultura. Herbicidas (2,4-D, 2,4-DB) y arbusticidas (2,4,5-T) Enraizamiento de estacas leosas (IBA, ANA) Evitar la cada de frutos (ANA, 2,4-DP) Raleo de frutos (ANA) Partenocarpia Inhibicin de brotacin lateral en forestales (ANA) cultivo in vitro de tejidos

Citocininas
Miller y Skoog descubrieron la kinetina, una citocinina artificial.
Consiguieron preparar por tratamiento trmico de ADN un compuesto, el 6-furfurilamino purina, que promova la divisin celular y que llamaron kinetina . En plantas se obtuvo la zeatina a partir de semillas de maz

Naturales

Sintticas

El trmino citoquinina se usa para designar sustancias naturales y sintticas que estimulan la divisin celular en presencia de auxinas.
No se han aislado an los genes responsables de su biosntesis No se pudieron aislar mutantes con defectos en su biosntesis

Posiblemente las mutaciones tengan carcter letal para la planta

Traslado Las citocininas se trasladan muy poco o nada en la planta, sin embargo se las identifica en xilema (cuando se sintetizan en la raz) y floema. Sin embargo, cuando los compuestos se encuentran en las hojas son relativamente inmviles.

Efectos fisiolgicos producidos por las citocininas

Estimulan la divisin celular Estimulan la morfognesis (iniciacin de tallos/formacin de yemas) en cultivo de tejidos. Estimulan el desarrollo de las yemas laterales. Contrarresta la dominancia apical. Retrasan la senescencia foliar al estimular la movilizacin de nutrientes y la sntesis de clorofila. Promueven la conversin de etioplastos estimulacin de la sntesis de clorofila. en cloroplastos va

Estimulan de la prdida de agua por transpiracin. Eliminacin de la dormicin que presentan las yemas y semillas de algunas especies.

Aplicaciones en la Agricultura
Retardo de la senescencia de flores y hortalizas de hojas, manteniendo por mas tiempo el color verde En manzanos, rosas o claveles promueve la ramificacin lateral En combinacin con giberelinas controla forma y tamao de algunos frutos (manzano) Inducen partenocarpia en algunos frutos Reemplazan la necesidad de luz roja en semillas de lechuga Interrumpen dormancia en vid Disminuyen contenido de alcaloides en plantas del gnero Datura Promueven la formacin de vstagos en el cultivo in vitro

Se aislaron citocininas de muchas especies diferentes de plantas. Se encuentran en rganos cuyos tejidos se estn dividiendo de forma activa (semillas, frutos, y races). Las citocininas regulan el ciclo celular y la relacin auxina/citocinina regula la morfognesis en cultivos de tejidos

Modos de accin de las citocininas:

Regulan la sntesis proteica. Afectan las etapas post-transcripcionales en algunas especies.

Su presencia en los ARNt pueden regular la sntesis proteica Efecto promotor sobre el ARN y las enzimas.
Estimulan el estado de transicin del estado G2 en la mitosis Incrementan la rapidez de sntesis de protenas

 Estimulan la divisin celular o citocinesis en tejidos no meristemticos. El desarrollo del fruto y del embrin, y retardan el envejecimiento y la muerte de la planta.

Giberelinas
El Acido giberlico GA3 fue descubierto en Japn como derivada de extracto del hongo Giberella fujikuroi que produca en crecimiento inusual de las plantas de arroz. Su designacin es AG seguida de un nmero y al momento hay mas de 150 formas conocidas de esta hormona

Las giberelinas

Accin del cido giberlico (GA3) en semillas de cebada.

Las Giberilinas son sintetizadas por el coleoptilo (1) y el escutelo del embrin y liberadas en el endosperma (2).

Las Giberilinas difunden hacia la capa de aleurona (3). Las clulas de la capa de aleurona son inducidas a sintetizar y segregar enzimas (amilasas y otras hidrolasas)en el endosperma amilceo (4)

El almidn y otros polmeros son degradados a pequeas molculas (5) Los solutos liberados (monmeros) son transportados al embrin donde son absorbidos y utilizados para el desarrollo del mismo.

 Las giberelinas son terpenos Su traslado se realiza a travs de floema y xilema, no es polar como en el caso de las auxinas

 Modo de accin Las giberelinas provocan la divisin celular al acortar la interfase del ciclo celular e inducir las clulas en fase G1 a sintetizar ADN.
Tambin promueven la elongacin celular al incrementar la plasticidad de la pared y aumentar el contenido de glucosa y fructosa, provocando la disminucin del potencial agua, lo que lleva al ingreso de agua en la clula y produce su expansin, inducen la deposicin transversal de microtbulos y participan en el transporte de calcio.

 Conjunto de actividades de crecimiento y divisin celular Consta de dos fases principales: interfase y mitosis.
Fase G1: aumento de tamao de la clula debido a la fabricacin acelerada de orgnulos, protenas y otras materias celulares. Fase S :el ADN se replica dando origen a dos cadenas nuevas, unidas por el centrmero. Los cromosomas, que hasta el momento tenan una sola cromtida, ahora tienen dos. Fase G2: la clula contina aumentando su biomasa.

Ciclo Celular

Efectos fisiolgicos
Controlan el crecimiento y elongacin de los tallos . Elongacin del escapo floral, que en las plantas en roseta es inducido por el fotoperodo de da largo.
Induccin de floracin en plantas de da largo cultivadas en poca no apropiada Crecimiento y desarrollo de frutos Estimulan germinacin de numerosas especies, y en cereales movilizan reservas para crecimiento inicial de la plntula. Reemplaza la necesidad de horas fro (vernalizacin) para inducir la floracin en algunas especies (hortcolas en general).

Aplicaciones en la Agricultura
En perejil para aumentar crecimiento (en pocas de fro principalmente) En ctricos retarda la senescencia de los frutos En vid para alargar de los pednculos florales para evitar enfermedades fngicas, obtener bayas de mayor tamao sin semillas En manzano para aumentar tamao y calidad de la fruta En Conferas, para incrementar la produccin de semillas induciendo la floracin precoz En caa de azcar para aumentar rendimiento en sacarosa Romper latencia en tubrculos de papa y dormancia en semillas.

El etileno
(H2C=CH2)
Su efecto se conoce desde la antiguedad
En 1917 Doubt descubri que el etileno estimulaba la abscisin. En 1934, R. Gane identific al etileno qumicamente como un producto natural del metabolismo de las plantas, y debido a sus efectos sobre el desarrollo de las mismas se lo clasific como una fitohormona. En 1935, Crocker propuso que el etileno era la hormona vegetal responsable de la maduracin de los frutos. Aunque es un gas el etileno en condiciones normales de presin y temperatura, se disuelve en cierto grado en el citoplasma de las clula. Se considera como una hormona vegetal debido a que es un producto natural del metabolismo y a que interacciona con otras fitohormonas en cantidades de trazas.

Biosntesis de Etileno

El

La etapa limitante de la ruta biosinttica es la conversin de la S-adenosilmetionina (SAM) en el intermediario precursor del etileno, el cido 1-aminociclopropano-1- carboxlico (ACC), etapa catalizada por la ACC sintasa

Efectos Fisiolgicos:
Estimula la maduracin de los frutos

Cambios en la maduracin de los frutos

 Promueve la abscisin (cada) de hojas, flores y frutos. En las hojas, el etileno probablemente activa celulasas y poligalacturonasas que causan la disolucin de la pared celular asociada con la abscisin

La tasa de produccin de etileno vara con el rgano y tejido especficos y su estado de crecimiento y desarrollo. Las tasas de sntesis varan desde rangos muy bajos (0.04-0.05 l/kg-hr) en blueberries (Vaccinium sp.) a extremadamente elevadas (3.400 l/kg-hr) en flores devanecientes de orqudeas.

Maduracin de frutos Senescencia de rganos Epinastia Tigmomorfognesis o perturbacin mecnica Hipertrofias

Exudacin de resinas, latex y gomas

Promocin o inhibicin de los cultivos de callos in vitro Inhibicin de la embriognesis somtica Apertura del gancho plumular Induccin de races

Se une a receptores del tipo proteico que reconocen molculas pequeas de doble ligadura Deber ser una metalprotena que contiene CU o Zn Los receptores son principalmente dos (ETR y ERS) uno formado por dos elementos: un sensor y otro de respuesta (ETR) y otro con solo el elemento sensor (ERS) Actan en la traducccin y amplificacin de la seal de la hormona, al unirse el etileno a sus receptores , se desencadenan las reacciones que llevan a la respuesta al etileno. En general se observa un aumento en la sntesis de enzimas

Inhibicin del crecimiento longitudinal Incremento del dimetro caulinar

 Antagonistas [CO2] Compite por el sitio de unin del etileno con el receptor. Por eso se utiliza para la conservacin de frutas Ag+ Interfiere la unin del etileno con su receptor. Se lo utiliza para la conservacin de flores 2,5 norbornadieno cis buteno Inhibe la accin del etileno de manera competitiva por unirse al mismo receptor.

Maduracin de frutos climatricos Provocar abscisin de rganos y frutos Estimula la germinacin Induccin de floracin

Aplicaciones en la Agricultura

-Incremento del flujo de latex, gomas y resinas -Inhibicin de la nodulacin inducida por Rizhobium, de la tuberizacin y bulbificacin -Promocin de la floracin femenina en Cucurbitceas

El cido abscsico

Histricamente se ha considerado como un inhibidor. Se trata de una molcula terpnica de 15 carbonos (sesquiterpeno) similar a los carotenoides.

Efectos
Se trata de una hormona anti-estrs. Acta contra el estrs hdrico provocando el cierre de estomas. Contrarresta el efecto de la auxina pero no inhibe el crecimiento en s. Tambin provoca el letargo de las yemas (en ese sentido s es anti-crecimiento). Es esencial para la briognesis (formacin de embriones viables). Evita la germinacin prematura y por eso bloquea las giberelinas.

Induce senescencia en hojas Inhibe crecimiento de tallos y no de races

Coordinacin hormonal del crecimiento en diferentes partes de una planta

Cuenta con rea de preparacin de medios, rea de siembra, y sala de incubacin, adems de campana de flujo laminar, incubadora, estufa de secado, autoclave y refrigerador.

La esterilizacin en estufas mediante calor seco (aire caliente) es recomendable para esterilizar recipientes de vidrios secos (pipetas, cpsulas de Petri, tubos). En estos casos, 2-4 horas en estufas a 180-200 C.

 La esterilizacin con calor hmedo con

vapor bajo presin (en autoclave o en una olla a presin), es el procedimiento ms empleado para la esterilizacin de los medios de cultivo En este caso, lo ms comn es usar una presin de 1.46 kg.cm-2 durante 20 minutos

ANTIBITICOS Y ANTIMICTICOS
gentamicina, sulfato de estreptomicina, ampicilina, tetraciclina, carbenicilina, sulfato de gentamicina, pentacloronitrobenceno, rifampicina, anfotericina B, benomil, carbendazim

TIPOS DE MEDIOS
a) cultivos en medios semislidos
B) cultivos en medios lquidos--- agitados (mediante el

empleo de agitadores de uso continuo) o estacionarios.

 Numerosas formulaciones de 6 y 40 compuestos.

George y col., luego de revisar ms de 3.000 trabajos

cientficos describen en dos tomos ms de 2.000 medios de cultivo.

La composicin salina ms empleada es la de Murashige

& Skoog (1962) (MS). Suplementado con 3% de sacarosa como fuente de carbono. A este medio se le adicionan adems reguladores de crecimiento, tanto del tipo de auxinas como de citocininas

mg/L

Los tipos de auxinas y citocininas

Rangos de concentracin ms usados a) IBA (cido 3-indolbutrico): 0,1-2 mM;

2,4-D (cido 2,4- diclorofenoxiactico): 4-35 mM; AIA (cido 3- indolactico): 0,1-2 mM; ANA (cido naftalenactico): 1-5 mM; y, picloram: 1-10 mM;
b) BA (N6-benciladenina): 1-20 mM;

CIN (cinetina): 0,1-1 mM; ZEA (zeatina): 1-10 mM; 2ip (isopentiladenina): 1-5 mM; y, TDZ (tidizuron): 0,01-1 mM.

 Bsicamente, los medios de cultivo se componen de:

Una fuente de carbono Nutrientes minerales

Sustancias vitamnicas
Sustancias reguladoras del crecimiento Agente gelificante (en el caso de medios semislidos) Otros compuestos

Fuente de carbono y nutrientes minerales

La sacarosa, en concentraciones de 2 al 5%, es el azcar

ms utilizado. En algunos medios se la reemplaza por glucosa. En general se destacan las concentraciones relativamente altas de nitrgeno y potasio. El nitrgeno es suministrado en forma de amonio y/o nitrato. Tambin se pueden utilizar urea, glutamina y casena hidrolizada. Es fundamental que el hierro sea incorporado conjuntamente con un agente quelante (Na2EDTA

Tamao
Cuanto ms grande sea el

explante mayores sern las posibilidades de inducir la proliferacin de callos o la regeneracin directa de rganos

1. La temperatura
Cuanto ms se asemejen las condiciones in vitro a las

ptimas de crecimiento de la especie estudiada, mayor ser la respuesta esperada.

2. La humedad relativa (HR)

Cantidad de vapor de agua contenida en la atmsfera

gaseosa Si este cierre es hermtico, la humedad interior ser del 100 %. Si existe la posibilidad de un intercambio gaseoso, la humedad interna puede descender a niveles cercanos al 50 %.

3. La luz
Para estimular la formacin de callo

es comn que se prefiera la oscuridad. El suministro de luz favorece la diferenciacin de rganos. Los cultivos se incuban en luz a 272 C con 14 horas de fotoperodo e intensidad lumnica moderada

Compuestos fenlicos
La presencia de compuestos fenlicos oxidados se

encuentra asociada con tejidos vegetales sometidos a situaciones de estrs. Esto inhibira el crecimiento de los mismos, daando, indirectamente, a los explantos. Para ello se emplean agentes absorbentes de fenoles en el medio de cultivo, tales como el carbn activado y la polivinilpirrolidona o antioxidantes como el cido ascrbico

Induccin de callos
Lo ideal es cultivar explantes

jvenes, derivados de semillas en germinacin, donde se obtienen respuestas rpidas y, en general, hay menores problemas de contaminacin con microorganismos.

Etapa 1: Establecimiento del cultivo

Los materiales que demuestran tener mayor capacidad

regenerativa son los obtenidos de tejidos meristemticos jvenes, sean yemas axilares o adventicias y embriones.
Semillas en plantas herbceas y aquellos tejidos

meristemticos que determinan el crecimiento en grosor, como el cambium en las plantas leosas.

 En la Etapa 1 tambin pueden observarse

infecciones por bacterias y hongos asociados a trips que sobreviven a los tratamientos de esterilizacin y por patgenos endgenos latentes dentro del sistema vascular, resultado de una esterilizacin inefectiva de los explantos.

Es recomendable adems lograr que la tasa de intercambio gaseoso entre los ambientes del recipiente y externo sea ptima, evitndose la acumulacin de CO2 y de etileno.

La utilizacin de una tapa perforada con tapn de gomaespuma es altamente recomendable.

 Los medios basales ms usados para angiospermas son el MS (Murashige & Skoog, 1962) o el WPM (Lloyd & Mccown, 1980).
Para el caso de gimnospermas, el empleo de medios reducidos en sales minerales y baja cantidad de nitrgeno resulta mucho mejor.