Influencia de la ablacin del pednculo ocular y la temperatura sobre la muda y mortalidad del cangrejo de ro de quelas delgadas (Astacus leptodactylus)

Karla Lopez Noblecilla

INTRODUCCION
Astacus leptodactylus o el cangrejo de ro de quelas angostas es una especie importante en trminos econmicos en el oeste de Asia y Este de Europa por ej. Turqua, Polonia, Italia, Alemania, Inglaterra, Espaa, Austria y Francia (Holdich, 2002; Harlioglu, 2004). Durante la ltima dcada, varias especies de cangrejos de ro han sido colocadas en programas de acuicultura. El cultivo de cangrejos de ro en aguas dulces y salobres puede incrementar la produccin, lo que aumentara su potencial exportador. Un factor clave en la produccin del cangrejo de ro es el ciclo de la muda. La supervivencia, la muda y el crecimiento de los decpodos pueden ser afectados por una variedad de factores ambientales incluyendo temperatura, concentracin de oxgeno, salinidad y duracin de la iluminacin (Aiken et al., 1983; Chen et al., 1995; Daz et al., 2003; Hammond et al., 2005). Un estudio preliminar sobre Procambarus clarkii sugiri que la temperatura influencia en la muda del cangrejo de ro ablacionado (Chen et al., 1995). La temperatura del agua es un importante factor limitante de los organismos acuticos poiquilotermos (Verhoef and Austin, 1999; Hammond et al., 2005) influye en la temperatura corporal y actividad metablica (Verhoef and Austin, 1999), el consumo de alimento y el crecimiento. La muda y las tasas de crecimiento aumentan al aumentar la temperatura hasta que el nivel ptimo es alcanzado, y, a continuacin, con nuevos incrementos desciende, siguiendo una curva en forma de campana (Ponce-Palafox et al., 1997; Jobling, 2003).

INTRODUCCION
Los pednculos oculares de los crustceos contienen clulas neurosecretoras que estn involucradas en la regulacin de la muda (Meade and Watts, 2001). La muda en crustceos se pens es regulada por dos hormonas; (1) la hormona inhibidora de la muda y (2) la hormona de la muda. Se cree que la hormona inhibidora de la muda se produce en el pednculo ocular y se almacena en la glndula sinusal mientras que la hormona de la muda es producida en el rgano Y. por la ablacin del pednculo ocular, la hormona inhibidora de la muda es excluida lo que permite a la hormona de la muda actuar. Por lo tanto, la eliminacin de los pednculos oculares causa un aumento en la secrecin de ecdisteroide del rgano Y, lo cual induce la muda precoz (Nakatsuji and Sonobe, 2004; Venkitraman et al., 2004). Entre todos los conocidos estmulos para mudar, la ablacin del pednculo ocular es el ms eficaz en trminos de tiempo necesario para respuesta (Chen et al., 1995), el cual afecta directamente sobre el sistema endocrino de cangrejo de ro (Fingerman, 1987; Huner, 1990). Muchos bilogos trabajaron en el control del sistema endocrino de la muda y el crecimiento de crustceos decpodos (Smith, 1940; Scudamore, 1947; Bliss, 1966; Huner and Avault, 1977; Ponnuchamy et al., 1981; Huner and Lindqvist, 1984; Chen et al., 1995; Venkitraman et al., 2004). En los ltimos aos, algunas investigaciones preliminares han sido llevadas a cabo en Procambarus clarkii (Chen et al., 1995), P. zonangulus (Hobbs y Hobbs, 1990) y Cherax quadricarinatus (quela roja), (Sagi et al., 1997). Sin embargo, poco se ha hecho en cangrejos astcidos del mar Caspio.

INTRODUCCION
La eliminacin del pednculo ocular conduce al aumento del peso y la disminucin de la osmolalidad de la hemolinfa (Meade and Watts, 2001; Venkitraman et al., 2004) y la ablacin unilateral del pednculo ocular ha sido empleada para inducir la maduracin del ovario y el desove con mayor o menor xito en numerosas especies de crustceos (Zaib un Nisa, 2001). Tambin se puede utilizar para acortar el intervalo de la muda y estimular el desarrollo gonadal en decpodos (Venkitraman et al., 2004). Aunque la ablacin bilateral de los pednculos oculares acorta el intervalo de la muda puede causar mortalidad adicional (Bittner and Kopanda, 1973; Huner and Lindqvist, 1984), principalmente porque la ablacin simultnea remueve los 4 ganglios en cada pednculo ocular, una considerable porcin del sistema nervioso central (Chen et al., 1995). Por consiguiente, la ablacin induce el desequilibrio hormonal o el estrs, lo cual a menudo resulta en alta mortalidad (Chen et al., 1993).

MATERIALES Y MTODOS

Los animales y las condiciones de manejo

Individuos de ambos sexos (de 15 a 27 g en peso; 7.5 a 10 cm en longitud total y 3.8 a 5.1 cm en la longitud del caparazn) fueron recolectadas de estanques del Centro de Investigacin de Pesqueras en Astaneh Ashrafiye, Irn, desde mayo hasta octubre de 2006, y transportadas al laboratorio en la Universidad Guilan. Ellos fueron conservados en tanques de agua conteniendo agua dulce (100 L), aireado con bombas de aire a una temperatura que oscila entre 16 a 19 C, con la concentracin de oxgeno de 8 mg/L, pH de 7,8 a 8 y fotoperiodo natural durante dos semanas antes de la experimentacin. Para alimentar a los animales, piezas frescas de pescado fueron usadas todos los das. La composicin inica del agua dulce en el cual los animales fueron mantenidas fue 168,9 , 78, 38,15 , 220,1 , 325 y 739 mg/L en el caso de Na+, Ca2+, Mg2+, Cl-, CaCO3 y TDS, respectivamente.

MATERIALES Y MTODOS

Medicin del tamao y peso

La longitud de los cangrejos de ro fue medida por un vernier de comps. El cangrejo de ro fue pesado usando una balanza electrnica despus de secar el animal en un papel filtro.

MATERIALES Y MTODOS
Ablacin del pednculo ocular
Diferentes procedimientos tales como la constriccin del pednculo ocular con hilo quirrgico, cauterizacin, enucleacin and remocin quirrgica del pednculo ocular son usados para la extirpacin del complejo rgano X glndula del seno del pednculo ocular, los cuales son todos exitosos en la ablacin unilateral del pednculo ocular. (Venkitraman et al., 2004). En el presente estudio, el pednculo ocular fue removido usando bistur quirrgico esterilizado, lo cual recude la mortalidad a un nivel mnimo. El cangrejo de ro utilizado estuvo en el estado de intermuda. Durante la ablacin y para reducir la frecuencia cardiaca, la prdida de la hemolinfa y controlar el sangrado los especmenes fueron manejados en agua pre-enfriada y un ungento y Vitamina A-D fue aplicado en la herida.

MATERIALES Y MTODOS
Experimento 1: En este experimento, la temperatura del agua influenciada por el ambiente estuvo entre 16 y 19 C, y el efecto de la ablacin del pednculo ocular fue investigado en los grupos ablacionados y no ablacionados con 3 rplicas. Hubieron 27 cangrejos de ro en el estado de intermuda en cada tratamiento. Experimento 2: En este experimento, la temperatura del agua en los grupos experimental y control fueron 20, 24, 28, 32, y 16 a 19 C (temperatura natural), respectivamente. Nueve cangrejos de ro ablacionados (en el estado de intermuda) por replica fueron asignados aleatoriamente a cada acuario, el cual contuvo agua dulce (50 L) con una concentracin de oxgeno de 8 mg/L y pH de 7.8 a 8. Los cangrejos de ro fueron marcados cortando el telson o los urpodos para permitir la identificacin individual (Este mtodo de marcado es usado cuando el cangrejo de ro muda. Sin embargo, debido al pequeo nmero de cangrejos de ro por acuario, los cangrejos de ro recientemente mudados fueron fcilmente identificados). Multmetro Digital (Consort, C535) fue usado para medir el pH, temperatura y la concentracin de oxgeno.

Coleccin de los datos y el anlisis En ambos experimentos en el presente estudio, los factores de la calidad de agua tales como pH, concentracin de oxgeno, salinidad y temperatura fue cercanamente monitoreado durante la prueba y el nmero de vivos, muertos y cangrejo de ro mudado fue registrado cada da. Los datos obtenidos para supervivencia y tasas de muda fueron analizados por anlisis de varianza de una va (ANOVA) del software estadstico SPSS y las diferencias fueron considerados a ser estadsticamente significativa (P<0.05).

Resultados
Experimento 1 La ablacin se encontr tener un efecto significativo sobre la muda (P<0.05, Figura 1), mientras las diferencias significativas entre la ablacin del pednculo ocular y la mortalidad no fueron observadas (P>0.05).

Resultados

Experimento 2
Porcentaje de muda: La tasa promedio de muda tendi a incrementar con el incremento de la temperatura de agua, el cual fue dos veces a la temperatura de 32 C en comparacin con la temperatura de 20 C (Figura 2A) y una relacin significativa fue observado entre las tasas de mudas por el incremento de la temperatura (P<0.05, R2= 0.9089). El nmero total mudados fue incrementado al nivel mximo en la segunda semana y entonces declin durante el resto del experimento (Figura 2B; R2= 0.7952).

Resultados Porcentaje de mortalidad: La supervivencia del cangrejo de ro declin significativamente con el incremento de la temperatura (P<0.05). La tasa promedio de mortalidad fue la ms baja en el primer tratamiento y en el grupo control (20 C y 16 a 19 C respectivamente). Sobre los 20C, la tasa de mortalidad promedio se increment progresivamente de 14.8% a 24C a 25.9% a 32C y la ms alta mortalidad ocurri durante la primera semana del experimento a 32C (Figura 3A y 3B). Hubo una diferencia estadstica entre la tasa de mortalidad y la temperatura (P<0.05, R2= 0.9423).

Discusin
En este estudio, la ablacin del pednculo ocular tuvo un efectos significativo sobre la muda de A. leptodactylus (P<0.05, Figura 1), el cual es comparable con los resultados obtenidos de otros estudios conducidos sobre otros crustceos. Sanjeevraj et al. (1997) en un estudio mostr que las tasas de crecimiento y muda en camarones ablacionados fueron mayores que aquellas de los no ablacionados. En un experimento conducido sobre M. rosenbergii ablacionados, Okumura and Katsumi (2001) reportaron un rpido incremento de ecdisteroide y un intervalo de muda significativamente ms corto en comparacin con camarones intactos. En otros estudios conducidos sobre tres especies incluyendo, A. astacus (Huner and Lindqvist, 1984; Gydemon and Westin, 1988), P. clarkii (Chen et al., 1995) and Metapenaeus dobsoni (Venkitraman et al., 2004), Una relacin significativa similar fue observada entre la ablacin del pednculo ocular y la tasa de muda (P<0.05). En el primer experimento del presente estudio, una baja mortalidad fue observada, puesto que una alta tasa de mortalidad en animales bilateralmente ablacionados y una alta tasa de supervivencia en animales unilateralmente ablacionados fueron reportado en Pamilirus ornatus y M. lankesteri (Juinio Menez and Ruinata, 1996; Venkitraman et al., 2004).

Como se mostr en el presente estudio, la temperatura del agua es un factor clave que controla el crecimiento y la supervivencia de crustceos cultivados en agua dulce (Holdich, 2002). Dado el inters en A. leptodactylus como una especie de acucola en Asia y Europa, evaluamos el desempeo de esta especie desempeo de esta especie bajo diferentes temperaturas de agua y extirpacin del tallo ocular.

Discusin
La temperatura tambin ha sido reconocida como uno de los principales factores ambientales que afectan la muda y crecimiento de cangrejo de ro (Hammond et al., 2005; Holdich, 2002). Esto es verificado por los resultados presentados en la figura 2, lo cual demostr que en esta investigacin, la temperatura tuvo un pronunciado impacto sobre la muda de los cangrejos de ro. El significativo impacto de la temperatura sobre la muda de cangrejos de ro ablacionados es consistente con otros estudios relacionados (P<0.05; Figura 2). Por ejemplo, los cangrejos de ro nobles ( A. astacus) and los cangrejos de ro rojos de la cinaga (P. clarkii) tendieron a mudar durante la fase de aguas clidas (Gydemon and Westin, 1988; Chen et al., 1995). La disminucin de la muda en agua de baja temperatura ha sido tambin observada en otras especies de crustceos, tales como la langosta Homarus americanus (Aiken et al., 1977) y el cangrejo violinista o Uca pugnax (Passano, 1960). Los resultados pueden tambin ser comparados con otros estudios limitados que han sido conducidos sobre la produccin de los cangrejos de ro rojos de la cinaga. Culley and Duobinis-Gray (1990) reportaron que los cangrejos de ro de caparazn suave a 301C tuvieron tasas de muda significativamente mayores (3 veces) que los cangrejos de ro a 201C, debido al acortamiento de los intervalos de muda. El impacto de la temperatura sobre el crecimiento y la muda de cangrejos de ro es de una naturaleza complicada. Por ejemplo, las condiciones Por ejemplo las condiciones de sub congelacin del invierno pueden suspender el crecimiento de cangrejos de ro tales como Orconectes virilis por varios meses (Aiken and Waddy, 1987). Sin embargo, las altas temperaturas pueden tambin causar problemas a P. clarkii por conducir a estos a enterrarse profundamente en el fango, lo cual casi suspende su crecimiento (Chen et al., 1995).

Discusin
Huner and Barr (1991) tambin establecieron que P. clarkii intacto tuvo actividades normales de alimentacin y muda a temperaturas sobre 12.8C y la inhibicin del crecimiento ocurri a temperaturas sobre 32.2C (Chen et al., 1995). En Procambarus spiculifer, el crecimiento fue mayor a 23.40.4C (Taylor, 1990) y en Paranephrops zealandicus, el intervalo promedio de muda fue ms corto a 24C (Hammond et al., 2005). Estimaciones basadas sobre los datos de muda presentados en la figura 2 del presente estudio sobre A. leptodactylus sugiere que el porcentaje de muda a 32C bajo condiciones de operacin batch fue aproximadamente dos veces mayor que a 20C. El rango natural de tolerancia a la temperatura para A. leptodactylus ha sido reportada estar entre 4 y 32C (Koksal, 1988). Sin embargo, los resultados del presente estudio mostraron que la temperatura de 32C result en la mayor tasa de muda y simultneamente de mortalidad. La supervivencia de A. leptodactylus fue fuertemente influenciada por la temperatura del agua y la tasa de alimentacin. En este estudio, la tasa de alimentacin. En este estudio la tasa de mortalidad increment en alta temperatura y hubo una relacin significativa entre temperatura y la tasa de mortalidad (P<0.05). Las tasas de supervivencia fueron comparables a aquellas de otras especies de cangrejos de ro (Mitchell and Collins, 1995; Verhoef and Austin, 1999; Hammond et al., 2005) en aguas de baja temperatura, pero decremento rpidamente con el incremento de la temperatura. La relacin negativa entre supervivencia y temperatura fue consistente con los encontrados en otros crustceos (P<0.05) (Ponce-Palafox et al., 1997; Verhoef and Austin, 1999).

Discusin
La muda, como una funcin importante, juega un rol importante para el crecimiento y reproduccin de crustceos, por lo tanto incrementando la temperatura y ejecutando la ablacin del pednculo ocular, como se mostr en esta investigacin, la tasa de muda y entonces el crecimiento fue mejorado. Desde que no hubo ninguna diferencia significativa para la muda entre las temperaturas de 24 y 32C y una simultanea mortalidad menor en 24C, entonces la temperatura de 24C determin una temperatura adecuada para inducir la muda en cangrejos de ro A. leptodactylus. Los hallazgos obtenidos en el presente estudio son ayudas practicas para incrementar la produccin controlando la muda y la mortalidad en A. leptodactylus del mar Caspio

Gracias