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Interaes Ag - Ac
Mtodos
Reagentes no marcados
(A ligao do Ac altera o estado fsico do Ag)
Reao de aglutinao
(Ag insolvel)
Qualitativos
Semi-quantitativos
Inibio da Aglutinao
Reao de precipitao
- Quantidades de Ag solvel so adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. - A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado tambm aumenta at um mximo, para depois diminuir.
Precipitado visvel
Precipitao em soluo
Precipitao em gel
Imunodifuso Radial
Precipitao em gel
Imunodifuso Dupla
Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, istopos - Tipos: RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
Radioimunoensaios
Utilizam Ac conjugados com radioistopos para quantificar os ensaios. Vantagens: Alta sensibilidade Permite medidas rpidas e precisas Desvantagens: Custo Vida mdia dos reagentes Risco operacional (radiao)
Imunofluorescncia
- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a molculas reveladoras chamadas fluorocromos. - Visualizao em microscpio de fluorescncia
VERDE VERMELHA
Imunofluorescncia Direta
Aplicaes: - Deteco direta de microrganismos (secrees, urina, cortes de tecidos); - Identificao de subpopulaes de linfcitos; - Fenotipagem de clulas tumorais
Imunofluorescncia Indireta
Aplicaes: - Deteco de anticorpos especficos contra diversos microrganismos; - Diagnstico de doenas auto-imunes;
Deteco de Ac anti-nuclear
Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica clulas contendo um antgeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo marcado com um fluorocromo diferente; - As clulas so ento analizadas no citmetro de fluxo.
Citometria de fluxo
- As clulas saem de uma clula de fluxo e so iluminadas por um raio laser;
- A quantidade de raios laser que dispersa para fora das clulas durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informao a respeito do tamanho das clulas.
- O laser pode tambm excitar o fluorocromo nas clulas e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.
CD4
Aplicaes:
CD8
CD19
Western Blot
Ensaios imunocromatogrficos
Diagnstico de gravidez
( deteco de beta HCG)
Termociclador
Deteco da Amplificao
Eletroforese em gel de poliacrilamida
Produto (PCR ou RT-PCR)
Relatrio
1. Qual a principal diferena imunofluorescncia? entre os mtodos de ELISA e
2.
Em uma tipagem sangunea houve aglutinao ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguneo e faa um esquema explicando a reao ocorrida.
3. Quais as caractersticas do anticorpo que podem influenciar a sua ligao ao antgeno? 4. Ao realizar os exames pr-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como voc interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reao ocorrida. 5. Qual imunoensaio voc escolheria para o acompanhar o prognstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.