Dr. Francisco Arocha S.

Medico Infectologo
Esterilizacin y Toma de
Muestra
NORMAS DE ESTERILIZACION:

Todo material utilizado para la toma de muestras debe
estar estril
El material para el procesamiento de estas muestras
microbiolgicas debe ser estril
Antes de cualquier esterilizacin el material debe estar
limpio o desinfectado
En lo posible se debe utilizar material descartable
El personal a trabajar en los laboratorios de
microbiologa debe estar entrenado
La manipulacin de todo material y/o muestra debe ser
siguiendo un protocolo
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Muestra
ESTERILIZACION:
Es la utilizacin de cualquier procedimiento fsico
o qumico destinado a inactivar y destruir toda
forma de vida microbiana (incluyendo las
endosporas)
El subfijo CIDA se agrega cuando se implica una
accin de destruccin total (germicida)
El subfijo STATICO se agrega cuando
simplemente se inhibe el crecimiento
bacteriano o viral (bacteriosttico).
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DESINFECCIN:
Es el mtodo que se utiliza para la
descontaminacin de materiales o
superficies inertes, es menos letal que la
esterilizacin
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DESINFECTANTE:
Es una sustancia que nicamente se usa
para destruir microorganismos en objetos
inanimados.
ANTISEPTICO:
Es una sustancia que destruye a los
microorganismos que se encuentran en
los tejidos vivos
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ANTISEPSIA:
Es todo procedimiento que impida la sepsis
o putrefaccin, el objetivo final de la
antisepsia es la asepsia.
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METODOS DE ESTERILIZACION:
CLASIFICACION:

FISICA

QUIMICA
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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION FISICA:

CALOR SECO:

Flameado (mechero)
Incineracin (horno crematorio)
Horno Seco (Estufa Pasteur, 180 C por 2 horas)




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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION FISICA:

CALOR HUMEDO SIN PRESION:

Ebullicin: (100 C por 10 min)
Tindalizacin: (80-100 C por 30 min por 3 das)
Pasteurizacin: (65-72 C por 30 a 15 min. y luego enfriar
rpidamente)


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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION FISICA:

CALOR HUMEDO CON PRESION:

Autoclave: (121 C por 20 min. A 13 libras de presin)
Vapor fluente: usar el autoclave con la vlvula abierta




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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION FISICA:
RADIACIONES IONIZANTES:
Radiacin Ultravioleta: longitud de onda
de 269 nm.
Radiacin Gamma y X: 2,5 mrad.





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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION FISICA:
SISTEMAS DE FILTRACION:
Filtro de Millipore
Filtro de porcelana (Chamberland-Pasteur)
Filtro de vidrio poroso
Filtro de flujo laminar
Filtro de amianto: (Seitz)




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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION QUIMICA:
Desinfectantes de alto nivel (capaces de
destruir endosporas)

Formaldehdo al 8%
Glutaraldehido al 2%
Peroxido de hidrogeno al 10%
Oxido de etileno gaseoso






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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION QUIMICA:
Desinfectantes de nivel intermedio: inactivan
al bacilo de la TBC

Yodo en etanol al 70%
Alcohol al 90%
Compuestos fenolicos: 1-3%
Yodo acuoso al 1%
Cloro




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METODOS DE ESTERILIZACION:
DESCONTAMINACION QUIMICA:
Desinfectantes de Bajo nivel: matan bacterias,
hongos y virus con lpidos:

Cloruro de benzalcomio
Hexaclorofeno
Clorhexidina
Amonio cuaternario
Mercurio-cromo




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TOMA DE MUESTRAS:
Normas generales:

Tomar la muestra antes de iniciar antibioticoterapia
Lavarse las manos antes y despus de tomar la muestra
Utilizar estrictas medidas de antisepsia
Tomar una buena cantidad de muestra
Se debe tomar en cuenta la fase de la enfermedad (fiebre
tifoidea)
Utilice recipientes estriles
Envi la muestra de inmediato al laboratorio de bacteriologa
Identifique el envase recolector
Llenar completamente la solicitud de examen.

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TOMA DE MUESTRAS:
Datos que deben contener la planilla de solicitud
bacteriolgica:
Nombre
Edad
Sexo
Servicio y No. De cama
No. De historia
Tipo de muestra
Examen solicitado
Fecha y hora
Diagnostico presuntivo
Tratamiento antibitico
Nombre del responsable de la toma de muestra
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TOMA DE MUESTRAS:
Muestras que no deben refrigerarse:

LCR
Secreciones oculares
Secreciones de odo medio
Secreciones genitales
Muestras que contengan anaerobios

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TOMA DE MUESTRAS:
BACTERIAS SENSIBLES A LA
TEMPERATURA AMBIENTE:

Shigella
N. gonorrhoeae
N. meningitidis
H. influenzae.


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TOMA DE MUESTRAS:
EXUDADO FARINGEO
Procedimiento:


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TOMA DE MUESTRAS:
EXUDADO FARINGEO
Objetivos:
Diagnosticar faringitis estreptoccica,
Faringitis gonoccica, difteria
Detectar portadores de N. meningitidis y
S. aureus

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TOMA DE MUESTRAS:
EXUDADO NASAL
Procedimiento


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TOMA DE MUESTRAS:
EXUDADO NASAL
Objetivos:
Detectar portadores de S. aureus y
Streptococcus
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TOMA DE MUESTRAS:
Exudado o lavado nasofaringeo:
Procedimiento:
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TOMA DE MUESTRAS:
Exudado o lavado nasofaringeo:
Objetivos:
Investigar Bordetella pertussis
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TOMA DE MUESTRAS:
ESPUTO:
Procedimiento:
Instrucciones al paciente
Caractersticas de la muestra menos de 25 clulas por
campo y ms de 10 PMN por campo
Presencia de personal que supervise la recoleccin
Usar envase estril de boca ancha
Si la muestra no se procesa de inmediato se debe
refrigerar para buscar hongos y micobacterias
Todo esputo se debe hacer Gram y Z-N



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TOMA DE MUESTRAS:
Aspiracin transtraqueal:
PROCEDIMIENTO:
Se prefiere al lavado bronquial y el
esputo porque obvia la contaminacin
orofaringea
Permite aislamiento confiable de
anaerobios, micobacterias y hongos


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TOMA DE MUESTRAS:
LIQUIDO PLEURAL
Procedimiento:
Tomar muestra por puncin y recoger
en tubos estriles
Enviar muestras para citoquimico,
bacteriologa y anatoma patolgica.



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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina (UROCULTIVO):
Miccin espontnea o chorro medio:

Recolectar la muestra en la maana
Limpiar el rea genital
Recolectar la muestra en un recipiente estril
Cantidad de 10 a 20 cc
La muestra debe cultivarse dentro de una hora de
recolectada o debe refrigerarse


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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina (UROCULTIVO):
Forma de preparar la orina.
a) Diluciones seriadas:
1cc de orina + 9 cc de sol. Fisiolgica
1cc de la solucin + 9 cc de sol. Fisiolgica
1cc de la solucin + 9 cc de sol. Fisiolgica
Resultado equivale a 0,01 cc de orina

b) Asa calibrada = 0,01 cc de orina
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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina (UROCULTIVO):
Criterios de Kazt
Menos de 1.000 ufc: negativo
1.000 a 10.000 ufc: dudoso repetir la muestra
Ms de 10.000 ufc: positiva
Excepto para S. aureus o Salmonella
Si se aslan ms de 2 bacterias diferentes: se
debe repetir la muestra.
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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina:
En los nios:
Asepsia del rea genital
Fijar el recolector a la piel
La muestra se debe enviar refrigerada
El recolector debe sustituirse cada media
hora
75% de falsos positivos
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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina:
Aspiracin suprapubica

Pacientes con obstruccin urinaria baja
Neonatos
Sospecha de infeccin por anaerobios
Cualquier contaje de colonias es significativo

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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de orina:
Sistema de drenaje cerrados (catteres)

Se usa en pacientes que no controlan esfnteres
La muestra se debe tomar al cambiar el catter y
posterior a una buena antisepsia

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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Heces (COPROCULTIVO)
Solo se investiga enteropatogenos
Heces frescas o hisopado rectal
Muestra que contengan moco y sangre
El hisopado se debe colocar en un medio de
transporte
Si se sospecha Vibrio cholerae se debe usar agua
peptonada
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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Sangre (HEMOCULTIVO)

Es una emergencia
La mayora de las bacteriemias son intermitentes
Se debe tomar al comienzo de la fiebre 38 C
Se deben tomar 2 a 3 hemocultivos en 24 horas
Usar guantes y mascarilla
Se debe realizar buena antisepsia (yodo-alcohol al 70%)
Cantidad de sangre 10 a 20 cc adulto 1 a 5 cc nios
Se debe tomar de sitios diferentes y con una diferencia de
tiempo de 30 min.
Repartir la muestra en el frasco A y B.
Se deben flamear los frascos antes de inocularlos

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Muestra
TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Liquido cefalorraqudeo
Es una emergencia bacteriolgica
Se debe realizar asepsia de la espalda
Utilizar guantes y mascarillas
Se debe colocar al paciente en la posicin correcta
La puncin se debe hacer entre L4-L5 o L3-L4
El liquido debe recolectarse por goteo
No debe refrigerarse
Siempre se debe realizar Gram, Z-N y tinta china







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TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Medula sea (Mielocultivo)
Procedimiento:

Esternn o Cresta iliaca

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Muestra
TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Herida o Absceso:
Limpie previamente las heridas sucias retirando el
tejido necrotico
Liquido aspirado o tejido se prefiere al hisopado
Se debe enviar al inyectadora con tapn de goma
no refrigerada
Evitar tocar los bordes de la herida
Si toma hisopado debe ser de la profundidad de la
herida y colocarlo en medio de trasporte



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Muestra
TOMA DE MUESTRAS:
Muestra de Biopsia

Tomar varias muestras
Colocar en envase estril con tapa
Sumergirla en agua destilada estril
Biopsia de quemados: solicite cuantificar el cultivo
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TOMA DE MUESTRAS:
Factores que interfieren con los
resultados:
Problemas en la toma de muestra
Cantidad insuficiente de muestra
Contaminacin con la flora normal
Tiempo trascurrido entre la toma de muestra y el
procesamiento
Administracin de antimicrobianos

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RESULTADOS DE LABORATORIO:
Informe presuntivo preliminar: reporta morfologa y
afinidad tintorial (60 min)
Informe provisional: suministra informacin en 18 a
24 horas indica presencia o ausencia de
crecimiento.
Informe definitivo: tarda aproximadamente 72 horas o
ms indica genero, especie y antibiograma.
Nota: las Micobacterias y los Hongos tardan 2 a 3
semanas en crecer.