Cours de Chimie Analytique

Jean-Luc Vialle
jluc.vialle@gmail.com 2009-2010
Objectifs
Maitriser les techniques utilises dans les
domaines:
- De lagroalimentaire (lipides, glucides,
protides)
- Connexes la production
(environnement, culture, levage)
Approfondir quelques techniques majeures et
discriminatives
Sommaire
Panorama des techniques
La Quantification et lEchantillonnage
La Chromatographie
LHPLC et La CPG
L Absorption Atomique et L Absorption Molculaire



Droulement - Contrle
5 Interventions: Cours
1,5 TD + 0,5 TD Projet
1 Projet (TP)
1 contrle

Claroline: Chimie Analytique
Documents (cours + Power-Point)
Forum (Questions)

Chapitre N1
Panorama des techniques
analytiques
Sommaire
Introduction
Les environnements Recherche, R&D,
Production
Contraintes des analyses
Personnel, Matriel, Normatives,
Economiques
Classifications des techniques
Proprits, Etat, Seuil, Cibles
I) Introduction
Objectifs: Adquation entre
unproduit et un cahier des charges et/ou
une lgislation.
Moyens: Quantifications +/- prcises
de diffrents paramtres
Paramtres: Sensoriels, Physiques,
Chimiques biologiques
lis la matrice, la
molcule
Reprsentativit: Analyse, Echantillonage,
Extraction, Conservation.
Adaptation de la mthode au rsultat
attendu
Ciblage des paramtres en fonction des
objectifs et de lenvironnement
- Recherche
- Recherche et Dveloppement
- Production


11 Lenvironnement Recherche
Objectifs: Structurale / Evolution
Mots Clefs: Lis au produit
Nature, Origine, Matrice,
Etat, Puret
Moyens: Techniques Lourdes
disponibles en Centre de Recherche ou en
externalisation

Obligations de moyens: Pas / peu de
contraintes conomiques et temporelle
12 Lenvironnement R&D
Objectifs: Quantification 2 phases:
a) Centre sur le produit
+ Niveau de dtection

b) Transposition en production :
Contraintes normatives
Moyens plus softs
Techniques globales / discriminatives
13 Lenvironnement Production
3 mots clefs: Simplicit - Dure - Cot
Nouvelles contraintes: Obligations -
Rfrences - Externalisation - Qualification
Techniques mises en uvre :
Lies la valeur ajoute du produit:
Faible Globale
Eleve Discriminative
II) Contraintes des analyses
Lies au personnel
Lies au matriel
Lies aux mthodes
Lies laspect conomique et laspect
dlai
21 Personnel comptent
Production : Faibles comptences
Analyses simples (globales)
Automatisation
Laboratoire danalyse: Niveau de
comptence + lev Analyses
discriminatives Automatisation
Laboratoire de recherche: Niveau de
comptence trs lev Interprtation
des analyses
22 Contraintes matrielles
Cot dinvestissement:
- Routine (Production) : 15.000 Euros
- Analyse discriminative: 15.000 Euros
par ligne danalyse

- Analyse structurale:
Quelques centaines de milliers dEuros
par technique.
Cot de fonctionnement et de maintenance
23 Contraintes Normatives et Lgales
Normes ISO, Afnor, Din, Asae
font rfrences et sont incontournables
si obligations lgales
Mthodes officielles: AOAC
pallient labsence de normes
Mthodes interprofessionnelles
Ex: Test de sdimentation de
Zlny, saccharimtrique dans
lindustrie sucrire, MS chez la
pomme de terre.
Mthodes internes (propres lentreprise)
24 Contraintes conomiques et temporelles
Lies laspect lgal ou marketting de
lanalyse.
Lies limpact sur la production
(Immobilisation)
Internalisation / Externalisation de lanalyse
Impact sur le dlai et sur le cot
Lies au volume dactivit de lentreprise et
la valeur ajoute de la production
C < 15 Euros , D < 3 jours
MS, pH, Gravimtrie, Brix, tests simples
15 < C < 50 Euros, D < 3 jours
Titrimtrie, Complexiomtrie, AA,
Absorption molculaire
100 > C > 50 Euros, D < 3 jours
Techniques chromatographiques
internalises, simples
C > 100 Euros, D > 1 semaine
Analyse thermiques, structurales, analyses
chromatographiques externalises

III) Classifications des techniques
Selon les proprits du solut (matrice).
Selon le caractre destructif.
Selon ltat de la matire.
Selon le seuil de dtection
Selon le caractre discriminant de lanalyse
Selon la cible vise dans la molcule
Proprits du solut (matrice)
Chimiques et biologiques - Physiques - Mcaniques -
Thermiques - Optiques - Electriques - Magntiques -
Physico chimiques - Energtiques - Fragmentation
Caractre destructif / non destructif
MEB, RX, RMN du solide, Near FTIR
Etat de la matire: S, L G
Seuil de dtection:
0,1% (1000 ppm)
Titrimtrie - Thermiques - IR - RMN - Gravimtrie
- 1 ppm:
AA, AM , Chromatographie

Global / Discriminant: Titrimtrie / Sparatives
Classification selon la cible
Molcule = E atomes et ou de groupes
fonctionnels lis entres eux par des lectrons.
Atome = E noyau + lectrons
Proprits physiques , chimiques +/-
spcifiques et des Proprits physico-
chimiques spcifiques Techniques
Sparatives
Possibilit de la casser par apport dnergie
mcanique (chimique) analyse
lmentaire , Spectromtrie de masse.
Possibilit de modification de la molcule
par apport dnergie sous forme thermique
ATD, ATG, DSC, Fusion
Possibilt daction sur les molcules et ses
atomes constitutifs par apport dnergie
sous forme lumineuse E = hv = hc /
En fonction de lnergie apporte, on agit sur
des cibles diffrentes: SAA, IR, Absorption
molculaire
onde et ondes radio 3 10
6
nm
Modification de la matrice
Infra-Rouge de 2500 1000 nm
Vibration des atomes constitutifs des
liaisons
Visible de 800 400 nm
Excitation des electrons constitutifs des liaisons
(les plus mobiles). Excitation des electrons atomiques
UV de 350 200 nm
Excitation des lectrons constitutifs des liaisons (les
moins mobiles)
RX et rayons < 3 nm
Arrachage des electrons constitutifs
Proprits molculaires et ioniques
+ / - Spcifiques
Raction spcifiques Complexiomtrie
Ractivit
Chimique
pH mtrie
Argentimtrie Periodimtrie
Manganimtrie Chromimtrie
Crimtrie Chlomtrie
Iodomtrie
Bromomtrie
Potentiomtrie
Proprits Chimiques
Proprits molculaires et ioniques
+ / - spcifiques
Analyse lmentaire
Constitutives
Gravimtrie
Densimtrie
Volumtrie
Tonomtrie
Physiques
P, V, m...
Ebullioscopie
Cryoscopie
Calorimtrie
A.T.D
A.T.G
D.S.C
Analyse Thermique
Thermiques
Rfractomtrie
Polarimtrie
Optiques
Conductimtrie
Ampromtrie
Voltamtrie
Coulomtrie
Polarographie
Electrodes
spcifiques
Electriques
Proprits Physiques
Proprits Molculaires et Ioniques
Slectives
C.P C.C.M
HP CCM
Surface
HPLC
Phase liquide
CPG
Phase gazuese
Volume
Chromatographie
Papier Gel
Surface
Electrophorse
capillaire
Volume
Electrophorse
Intractions Physicochimiques
Proprits Energtiques des molcules
Spcifiques
Spectroscopie
Infra-rouge
Spectroscopie
Raman
Vibration des atomes
Absorption
molculaire
UV - Visible
Fluorimtrie
Excitation des
e- de covalence
Molcule
Emission
atomique
Flamme Flamme
Froide
Torche
Plasma
Four
Absorption
Atomique
Excitation des
e- atomiques
Atome
Cible utilise
(E croissante)
Proprits du
Noyau Atomique
R.M.N
Magntiques
Scintigraphie
Radioactives
Microscopie
Electronique
balayage
Diffraction X
Physiques
Proprits du noyau
et de l'atome
Chapitre N 2
La quantification
Sommaire
Introduction
Les calculs dincertitudes
Les mthodes Absolues
Methodes directes
Dosages chimiques
Les mthodes comparatives
Etalonnage interne et externe
Les ajouts doss
Conclusion
I) Introduction
Analyse = Quantification
Structurale = Identification
Rappels sur les incertitudes
Incertitudes absolues n Ax
Incertitudes relatives Ax /x


II) Les mthodes absolues
Mesure de paramtre physiques
Exemple Taux de cendres NF V 18-101
Mthodes bases sur lapplication dune loi
simple
Exemple ; Lamidon (3me directive du JO
du 23/11 1980)
Mthodes bases sur des ractions chimiques
Acido-basique
Rdox
Complexiomtrie - Prcipitation

Conservation du nombre dquivalents
changs
Mthodes point final
Mthode directe: (NF T 60-204)
Mthode en retour (NF V 18-100)
III) Mthodes comparatives
Etalonnage externe

Etalonnage interne

Mthode des ajouts doss
31 Etalonnage externe
Pas de dpendance dun facteur extrieur

Application au dosage du phosphore soluble
dans les terres (NF X 31-161)
Etalonnage
Exploitation des rsultats
Avantages et inconvnients
32 Mthode de ltalonnage interne
Domaine dutilisation
Principes
Application lanalyse des FAME (NF T 60-234)
Avantages et inconvnients
Choix de ltalon interne
33 Mthode des ajouts doss
Analyse de traces

Application en absorption atomique

Application en chromatographie

Avantages et inconvnients
Chapitre N 3
Introduction la
Chromatographie
Sommaire
Introduction
Aspect thermodynamique
Aspect cintique
Facteurs lis la chromatographie
I) Introduction
Technique sparative
Dualit Analytique / Prparative
Li la valeur ajoute
Les diffrents tats de la matire
solide liquide gaz critique
Classification des techniques sparatives
- Suivant les forces mises en jeu
- Suivant ltat de la matire

Forces
Gravitationnnelles Electriques Thermiques Magntiques
Barrires
Semi-permables

Physico-chimiques
Dcantation
Centrifugation Electrolyse
Electrophorse
Diffusion
thermique
Spectromtrie
De Masse
Filtration
Diffusion
Gazeuse
Osmose
Dialyse
, nano filtration
Extraction Chromatographie
Nature des phases
Gaz - Gaz Gaz - Liquide Gaz - Solide
Diffusion
Liquide- Liquide Liquide- Solide Solide - Solide
Chromatographie
Distillation
Sonification
Chromatographie
filtration
Chromatographie
Chromatographie
Extraction Distillation
Chromatographie
Filtration
Tri
Recristallisation
Chromatographie
Un peu dhistoire
Khrmatos = Couleur Graphikos = Trac
1903 Tswett: CaCO
3
Colonne ouverte
1940 Martin et Synge : Thorie de la
partition
1950 Snyder: Thorie de ladsorption
1950 Martin et James CPG
1960 CCM
1970 HPLC et phase inverse
1975 CPG Capillaire
1985 HPLC en phase supercritique

Glossaire
Solut: Espce sparer / doser
Solvant: Solubilise le solut
Eluant: Phase mobile
Eluat: Phase mobile (+ solut)
Phase stationnaire:
Phase immobilise dans le
systme chromatographique

Schma dun chromatographe
Rserve
Eluant
Systme de
Mobilit
Injecteur
Passeur
Gradient Sparateur
Micro
Proesseur
Dtecteur
Traitement
du signal
Collecteur
Classification des techniques
chromatographiques
Suivant la technologie: Surface / Volume
Suivant la nature des phases:

Phase mobile: Liquide ou Gazeuse
(Critique)

Phase stationnaire: Solide ou Liquide
immobilis
Rcapitulatif
Phase
Mobile
Phase
Stationnaire
Technologie Application Principe

Gaz
Liquide
Volume
CPG
G/L
Partage
Solide CPG
G/S
Adsorption
Exclusion

Liquide
Surface CCM
L/L
Partage

Liquide
Volume HPLC
L/L
Partage


Solide
Surface CP
L/S
Adsorption
Exclusion
Volume LC, HPLC
L/S
Adsorption
Exclusion
II) Aspect Thermodynamique
Thorie des plateaux
Un solut P qui se distribue entre les deux phases stationnaire
et mobile = Equilibre K = [P]
stat
/ [P]
mob
K varie avec la force des interactions
Objectif: Multiplication du nombre dquilibre : n
Ecoulement discontinu ; 1 plateau = 1 quilibre
y = fraction de P (stat) et x = fraction de P (mob) k =
y/x = cste x + y = q
o
= 1

0

1

2

3

..

p



n-2

n-1

n
Evolution du solut P
Injection
n 0 1 2 n - 1 n
Stat. 1 0 0
Mob. 0 0 0
Equilibre
n 0 1 2 n -1 n
Stat. y
Mob. x
Transfert
n 0 1 2 n - 1 n
Mob 0 x 0
Stat y 0 0
Equilibre
n 0 1 2 n -1 n
Mob xy x
stat y xy
Transfert
n 0 1 2 n - 1 n
Mob 0 xy x
Stat y xy 0
Equilibre
n 0 1 2 n -1 n
Mob xy

2xy x3
Stat y3 2xy xy

Gnralisation
Aprs n transferts:
Le solut se disperse suivant une
loi du type (x + y)
n
Facteur de capacit: k = y / x Grandeur
caractristique dun solut dans un systme
chromatographique donn
Q
n
p
= f(n,p, q
0
)
Equation
dune Gaussienne Courbe
maximum
Aprs n transferts, la phase mobile a
parcourue une distance ln et lextrmum se
situe une distance lp tel que

l
p
/ l
n
= 1 / (1+k)

Soit en terme de vitesse

v
p
/ v
n
= 1 / (1+k)
Soit t = Cste On mesure l Surface

Soit l = Cste On mesure t Volume

Quelques grandeurs fondamentales
Temps de rtention: Apparition de lextrmum
Tr = T
0
(1+k)
Temps de rtention nulle: Solut non retenu
T
0
Rf Rf = lp / l
0

Efficacit : N = Nb de plateaux thoriques

HEPT: H = L / N
Sparation de plusieurs soluts
Slectivit = k
2
/ k
1
Traduit la diffrence
daffinit pour 1 et 2

Rsolution Rs Traduit la sparation entre
deux pics chromatogaphiques

III) Aspect Cintique
Ecoulement Continu : Dformation des pics:
Transfert de systme chromatographique et
Transposition: Notion de grandeurs rduites (l,
h et vitesse rduite)

Si l, h et la vitesse rduite sont constant, N
est constant
Mcanismes de Dispersion
Knox (HPLC) et Van Dempter (CPG)

H = A + B / u + C u
A = Anisotropie dcoulement
B = Diffusion longitudinale
C = Rsistance aux transferts de masse
U = vitesse linaire de la phase mobile
Optimisation
IV) Facteurs lis la chromatographie
La temprature: Fondamental
k est fonction de T
Si T augmente k diminue
La composition de la phase mobile (HPLC -
CCM)
Le dbit de la phase mobile (u)
Loi de Darcy: Perte de charge dans un
coulement travers un tube rempli
Chap N4 La CPG
Sommaire
Introduction
Les phases stationnaires en colonne remplie
Transposition colonne remplie / colonne
capillaire
Linjection
La dtection
La drivatisation

I) Introduction
1re technique dveloppe ds 1950
Simplicit de mise en uvre
Rapidit des analyses complexes
Matriel disponible et peu onreux
Nombreuses applications :
NF T60-234 FAME Carbowax 20
M DB 20 F.I.D NF T60-237 BHA
et BHT DC 200 CP Sil 5 F.I.D


NF T90-120 PcB et Organo-chlors OV17
DB5 ECD
NF T90-121 Atrazine et Simazine DB5
Thermo ionique
NF T90-125 COV halogns
Carbowax 1500 CPSil 5 ECD

Nombreuses autres applications - Gaz
Permanents Porapak
Catharomtre
- Solvants rsiduels Composs volatils -
Rsidus dincendies Armes Huiles
essentielles.
II) Les phases stationnaires en colonne
remplie
Colonne remplie = Tube + Support +
Phase Liquide Imprgne (Solide)

Tube: 2 m 1/8
me
Inox
Support: Diatomes P, W, G Granulomtrie 80-
100 mesh (175-150m) Pertes de charge
faibles (1-2 bars) Taux dimprgnation
10 - 30%
Traitements: Tamisage, AW, TMCS
21 Les phases stationnaires
Les hydrocarbures ramifis
rfrence : Polarit nulle
Les Polysiloxanes et polysiloxanes substitus:
R = CH
3
,
Phnyl, Cyanopropyl Polarit trs
faible (DB1, 100% de CH
3
) trs forte (CP
Sil 88, 100% de cyanothyl)
Rfrence en capillaire
Les polythylnes glycols (carbowax 20M,
FFAP..) quivalence CP Wax, DB 20
Les Polyesters: Polarits intermdiaires et
fortes (DEGS, EGA.)

Les Adsorbants Tenax, Carbopack, Tamis
molculaires
Classification selon la polarit
Equivalence entre remplie et capillaire
22 Les indices de Kovats
Srie homologue: log
10
Tr = an + b

Notion de droite de similitude: -
Prdiction de la rtention -
Approche didentification

Application la srie des n alcanes -
Notion dindice de rtention
23 Classification suivant la polarit
Constantes de Mac Reynolds Rohrschneider

1 phase de rfrence : Squalane P = 0
5 soluts de rfrence:
Benzne X n Butanol Y MeCOPr Z
Nitropropane U Pyridine S
Cste de Mac Reynods = Diffrence dindice de rtention du
solut entre la phase et la rfrence
Polarit = Somme des cstes de Mac Reynolds des cinq soluts
(Existence de 3+2 autres soluts rfrences)

Exemples
Phase X Y Z U V
Somme
Squalane
0 0 0 0 0 0
SE 30
15 53 44 54 41 217
OV 17
119 158 162 243 202 884
FFAP
340 590 397 602 627 2546
OV 275
666 1001 895 1177 1099 4838
24 Choix raisonn des phases
stationnaires
Classification des soluts en 5 catgories
Lies la polarit

Classification des phases en 4 catgories
Lies la polarit

Associations par catgories: -
Apolaire Apolaire - Polaire
Polaire -
Moyennement polaire Moyennement polaire
III) Transposition
Colonne Remplie / Colonne Capillaire
Remplie Capillaire
Phases Varies Varies
(mais +
restreint)
Longueur
Perte de charge
2 m
1 bar / m
10 - 100 m
1 bar / 50 m
Diamtre 1/8
1/4
0.32 et 0.25 mm
0.53 et 0.1 mm
Classification
Colonnes de Golay:
-
COT et WCOT : Wall Coated Open Tubular - SCOT :
Support Coated Open Tubular - PLOT : Porous
Layer Open Tubular - Micropacked
Columns
Permabilit k importante : Efficacit importante et
vitesses linaires importantes soit tr faibles
B = V
G
/V
L
2 10 x suprieur / remplie
B= d
c
/ 4e
f
et tr = t
0
(1 + K / B)

Si B augmente : tr diminue ; possibilit de
diminuer la temprature
B
lev: Analyses rapides : substances
lourdes B faible:
Substances volatiles

Epaisseur du film: De lordre du micron
Tr augmente en f(Log e) e x 2 = Tr (-15)
Films minces et films pais
Films Minces: 0,15 < e < 0,5 m Avantages:
Meilleures performances Rduction du temps
danalyse Possibilit danalyse de composs lourds
Inconvnients: Charges + faibles : restreint
la possibilit danalyse de traces - Interactions avec la
surface
Films Epais: e > 1 m
Avantages: Analyses de traces Analyses de
volatils
Inconvnients Pb de Bleeding (e > 5m)
Diamtre: Wide Bore = Remplie
Narrow bore: Analyses courtes : Couplage GC /
MS
IV) Linjection
Colonne remplie: Injecteur Septum
Volume inject: 0,5 1 l Gaz :
100 l 500 l Head-
Space (Statique et dynamique)
Colonne capillaires: Charges + faibles Utilisation
de diviseurs - Split /
Splitless - On
column - Injecteur
de verre

V) La dtection
2 classes de dtecteurs: I :
Rponse proportionnelle la concentration
Catharomtre, E.C.D
II : Rponse proportionnelle au dbit
massique: F.I.D , N.P.D
Slectivit : Universels / Spcifiques
Quantit minimale dtectable : variable de (1-
10 ng) TCD 0,1 pg ECD
(30-100 pg) FID
Catharomtre: Pont de Wheastone (I)
Universel Gaz permanents

F.I.D: Combustion (II)
Universel (sauf incombustibles) Notion de
Make-up

E.C.D Capture dlectrons (I)
Spcifique: Drivs Halogns

N.P.D Thermoionique (II)
Spcifique: Drivs N et P
VI) La drivatisation
Objectifs: Volatilisation des espces
Amlioration des analyses
(traines de pic)
Amlioraion des rsolutions
Mthodes:
Estrification :
Diazomthane, BF
3
/CH
3
OH
Silylation : TMCS / HMDS
obtention dthers, desters
silyls volatils: Pb H
2
O
Chapitre N5
La chromatographie Liquide
Ladsorption
Le Partage
Sommaire
La chromatographie dadsorption
Thorie de Snyder
Facteurs lis la phase stationnaire, la
phase mobile et le solut
Le Greffage
La chromatographie en phase inverse
La chane chromatographique

I) Introduction
Le dosage de laflatoxine B1 dans les aliments pour
animaux (NF V 18-200)

Extraction Liquide / solide au CHCl
3
Purification Colonne ouverte de gel de silice (50-200
m) conditionne dans CHCl
3
Lavage lther
Dsorption avec CHCl
3
/ CH
3
OH (97/ 3)
Chromatographie Monodimensionnelle sur silice:
Phase mobile: CHCl3 / Actone (90/10) Ether /
mthanol/ eau (96/3/1)
Lecture visuelle / Fluorodensitomtrique
II) La chromatographie dAdsorption
Supports solides polaires:
Silice Caractre acide
Alumine Caractre basique

Utilisables en CCM, HPLC, colonne ouverte

Principe: Formation de liaisons H entre le
support et le solut. (interactions)
Phases mobiles : peu polaires

Applications analytiques:
Fonctionnalits Diffrentes
Isomres
Soluts peu et moyennement polaire
Applications en extraction (purification)
Fixation des espces plus polaires
Ordre dlution: suivant lordre de polarit
Faible cot Pb de la phase mobile
21 Mcanismes dadsorption
Adsorption / dsorption en surface
Equation de Snyder
log k = log Va + B*(E - As c) + log (Wa/Vm)
k = facteur de capacit

Phase stationnaire: Va, Wa et Vm , B*
Phase mobile: B* , c
Solut: As et E

Facteurs lis la phase stationnaire
Va, Wa et Vm Lis la taille des particules et
au remplissage
Peu
dactions Influence
la transposition Surface /
volume
B* Etat dactivit de ladsorbant (0<B*<1)
Schage des plaques et conservation au
dessicateur
Facteurs lis la phase mobile
c et B*
B* lie la teneur en eau de la phase mobile
Solvant isohydrique utilisation
dacide et de base pour rduire lactivit
c: Force luante Srie luotropique si c
Augmente, alors Rf augmente
(k diminue)

Dveloppement isocratique et en gradient de
concentration.
Utilisation de mlanges binaires et ternaires

Facteurs lis au solut
As et E
As: surface spcifique : Pas daction si ce nest
une drivatisation
Changement de la nature du solut et des
interactions
E: mme remarque
III) Le greffage
Adsorption
Contraintes
Activit du support
Isohydrie de la phase mobile
Limites
2 types de phase : Silice (alumine)
chelle de polarit limite
problmes de tranes de pics
1970 Le greffage

II) Le Greffage
Modification du support siliceux par greffage
chimique despces liquides: Si-OH
Si-O-Si-R R =
Alkyl (C18, C8, C3, C2)
Phnyl
Amino alkyl
Nitro alkyl
Diols , Cyano.
Notion de chromatographie de partage
Echelle de polarit inverse / Adsorption
End-Capping

Solut

Polaire

Moyennement
Polaire

Moyennement
Polaire

Non
Polaire

Eluant

Moyennement
Polaire

Trs
Faiblement
Polaire

Fortement
Polaire

Moyennement
Polaire

Exemples
CH
2
Cl
2
/
Hexane
80/20
CH
2
Cl
2
/
Hexane
5/95
CH
3
0H / H
2
0
40 / 60
CH
3
0H / H
2
0
90 / 10

HPLC
Partage
Phase
Normale
NH
2
, CN,
Partage
Phase
Normale
NH
2
, CN,
Partage
Phase
Inverse
C18, Phnyl
Partage
Phase
Inverse
C18, Phnyl
IV) La Phase Inverse
Application : Dosage de 6 PAH ( polluants) en phase aqueuse
NFT 90-115 : Fluoranthne, Benzofluoranthne b et k; Benzopyrne a; (10
ppb) Benzoprylne, Indnopyrne (50 ppb)
Extraction au cyclohexane - Concentration 1ml sous vide
Purification sur colonne dalumine
Concentration sec et reprise dans 1ml de solvant:
Phase stationnaire: RP 18, Lichrosorb C18 L = 250 mm Diam:

Phase mobile: CH
3
-CN / H
2
O (85/15 ; 90/10) Dbit: 1ml mn
-1

Injection 20 l
Fluorimtrie: Excitation 360 nm Emission > 420 nm
La phase stationnaire
Apolaire Lipophile = Hydrophobe
Nature du greffon: CH
3
-(CH
2
)
n
-CH
2
-
si n augmente: La rtention augmente
Nombre de greffon: Plus le taux de greffage
est lev, plus la rtention est importante
Gnralisation la surface hydrocarbone
Pratique: Entre 8 et 15 % de Carbone

La phase mobile
Base: H
2
0 + CH
3
OH ou H
2
0 + CH
3
CN
Attention la perte de charge (Darcy)
Utilisation ventuelle de modificateurs:
THF, Actone, CHCl
3
Attention
la dtection
Influence de la teneur en eau : La rtention
augmente avec la teneur en eau
Elution en mode isocratique : Composition de
la phase mobile constante
Elution en mode gradient de concentration
Le solut
Rtention Inverse la polarit Plus
le solut est polaire, plus la rtention est faible.
Lie lhydrophobie: Cste de partage dans le
systme octanol / eau P
Rekker:
log P = Somme f
i
+ C
M
(somme k
j
)
fi = Incrments CM = Cste = 0,268 kj =
effets de proximit
log k = a log P + b


IV) La chane chromatographique
LInjection

Couramment : 20 l (1 50 l)
Injection en boucle Etalonnage
externe
Vanne dinjection Six Voies
Automatisation Passeurs automatiques
La dtection - Gnralits
Notion de drive (1 heure)
bruit long terme (10 mn)
bruit court terme (1 mn)
Sensibilit: Pente de la courbe:
Rponse = f (Concentration initiale)
Concentration minimale dtectable: n
fois le bruit court terme
Dtection directe et diffrentielle
Les diffrents Dtecteurs
Dtecteurs
Simples

Ultra violet
Fluorimtrie
Rfractomtrie
Diffusion de
lumire

Electrochimique
Conductimtrique
Dtecteurs
semi Informatifs

UV multi lambda
Fluorimtre
programmable



Multi lectrodes
Dtecteurs
intelligents

Spectomtrie de
Masse
FT IR
Barrette de diodes
RMN
Drivatisation pr et post colonne
Drivatisation Pr Colonne

Simplicit
Modification des conditions
chromatographiques
Ex: Acides amins (OPA)
Ractions reproductibles
Possibilit de ractions
secondaires
Drivatisation Post Colonne

Slectif
Multi dtection
Exemple:Vitamine C
Matriel plus sophistiqu
Modification du pic
chromatographique
VI) Les autres techniques HPLC
Technique Phase
stationnaire
Phase mobile Soluts
Paire dions
C8, C18 CH
3
CN,
CH
3
OH, H
2
O
Espces
ionisables
Echange
dions
Rsines
changeuses
Tampons
aqueux
Ions minraux
cations et
anions
Exclusion
Polymres
poreux
THF, Tampons
aqueux
Polymres
hydrophiles et
organiques
Chirale
Chirale
cyclodextrines,
Pirkle
Aqueuses et
organiques
Enantiomres
Chapitre N6
Labsorption Molculaire UV-Visible
Et
Labsorption atomique
Labsorption molculaire
Sommaire
Introduction
Dtermination de lindice Phnol NF T 90-109
Dtermination de As
3+
NF T 20-054
Dtermination du Fer total et du Fe
2+
NF T 90-017
Dtermination du Phosphore soluble NF X 31-161
Le spectrophotomtre dabsorption molculaire
Introduction
Absorption Atomique: Concerne les lectrons
atomiques (absorption et mission)
Absorption et mission Molculaire: Concerne les
lectrons des liaisons molculaires, les lectrons
dlocalisables (t).
Mmes concepts: Dualit Onde / nergie
E = h v = h c /
Spectre de la lumire
Domaine UV: 200-350 nm
Domaine Visible: 350 800 nm
Complmentarit Absorption / Couleur
Triangle des couleurs
Utilisation des proprits dabsorptions pour une
quantification
Nombreuses applications :
Cations , Anions, Molcules Organiques

Slectivit plus ou moins importante

Loi de Beer-Lambert: log
10
I
0
/I
t
= c.l.C
c : Coefficient dextinction molaire
. Quantification par talonnage externe

Dtermination de lindice phnol
Eaux NF T 90-109
Principe
Distillation des phnols en milieu acide
(H
3
PO
4
) en prsence de CuSO
4
(action
bactrienne) (Entranement la vapeur)
Enregistrement du spectre UV 254
et 270 nm (c # 6000 et 1500)
cuve quartz 1cm
Comparaison un talonnage externe
Applications: 0,025 0,5 mg/l
Dosage de larsenic
Corps gras NF T 20-054
Principe
Rduction de larsenic sous forme darsine AsH
3

par Zn en milieu HCl Absorption de larsine
par le dithyldithiocarbamate dargent: Ag(DDTC) AsH
3
+ 6
Ag(DDTC). 6 Ag + 3H(DDTC) + As(DDTC)
3
Formation dArgent collodal dispers: Rouge Violet
Mesure de la DO 540 nm cuve 1cm
Comparaison un talonnage externe
Application: masses de 1 20 g dArsenic
Dosage du fer
Eaux NF T 90-017
Fe
t
= Fe
dissous
+ Fe
suspension
Formation dun complexe color entre Fe
2+
et lortho
phnanthroline (1-10) Rouge Orang (510nm)
Fer total: Oxydation par le peroxodisulfate Fe
3+
Rduction par le chlorydrate
dhydroxylamine pH # 4,5 Fe
2+
Complexation (15mn lobscurit)
Fer dissous: Rduction du Fe
3+
dissous
Complexation
Fe
2+
dissous Complexation directe
Applications 10 g/l 10mg/l
Le phosphore soluble
Sols NF X 31-161
Principe: Mthode de Joret-Hbert Extraction
du phosphore soluble (sous toutes ses formes) par
loxalate dammonium (pH = 7)
Complexation du phosphore sous forme de complexe
phosphomolybdique rduit avec le ractif
sulfomolybdique (heptamolybdate dammonium, Acide ascorbique,
thiosulfate de sodium, formol)
Dveloppement chaud (100C, 5mn) dune
coloration violette
Mesure de la DO 825 nm
Domaine dapplication: 1 10 mg/l de P sols:
Expression du rsultat en P
2
O
5
Le spectrophotomtre
Source
Monochromateur
Fentes (Slit)
Cuve
Photomultiplicateur
Amplificateur
Calculateur
Sources et rayonnement incident
Lampes dcharge (lumire blanche)
Multi longueurs donde
- Deutrium (Domaine UV)
- Vapeur de mercure (Domaine visible)
Simple et double faisceaux
Slecteur: Monochromateur
Fente (Slit): Permet de rguler lnergie du
rayon incident
Cuves
Cuves:
- Plastique (jetables)Attention aux solvants organiques
- Verre (domaine du visible)
- Quartz (domaine UV)
A remplissage et circulation
(Cintique Passeurs automatiques)
Trajets optiques: 0,1 5 cm
fonction de la concentration et du coefficient dextinction
molaire c
Zro optique: Sur Blanc (0 dabsorbance)
Rayonnement transmis
Photomultiplicateur : Comptage des photons
transmis: Travail en Absorbance (A) ou en
Transmitance (T)
Amplificateur
Calculateur: Io, It, A (T), log
10
(A), C
Restitution du spectre, des concentrations
Gamme de linarit de Beer-Lambert
(talonnage externe)
Labsorption atomique
Sommaire
Introduction
Principe de labsorption et de lmission
Schma gnral dun spectromtre dAA
Les diffrentes parties du spectromtre
La quantification
Applications
Analyse de traces
Introduction
Analyse de cations minraux
Actuellement: Environ 60 lments du tableau de
Mendeleiev
Nombreuses applications: Mtallurgie, Gologie,
Environnement, Agriculture, Agro alimentaire
Impratif: Mise en solution de lchantillon
Eaux NF T90-112 Flamme Eaux
NF T90-119 Four Eaux NF
T90-131 Flamme Froide Sols NF X31-
151 Flamme
Principe
Atome = Noyau + lectrons
lectrons: Gravitent autour du noyau (Champs
lectrostatique): Notion dorbitales: Niveaux
dnergie quantifis

tat fondamental + nergie lectromagntique: tat
excit (Passage de le- dun niveau fondamental un
niveau suprieur) : Instable : Retour ltat
fondamental

Restitution calorifique: Absorption atomique
Restitution lumineuse: mission atomique

E = f (h, c et longueur donde)
Notion de transitions spectrales
Spectres de raies spcifiques chaque lment
Possibilit de dosage spcifique par lments
(Interfrences)
quation de Boltzman: N
e
= Cste x N
0
e
-(E/kT)
Emission: N
e
lev
Absorption: N
0
lev
Loi # Beer-Lambert A = I
0
/I
t
Log
10
A = K.l.C K = Coef. dabsorption
monochromatique
Schma gnral dun spectromtre
dAbsorption Atomique (Emission)
Une source de photons: Source dmission
Une source datomes: Source datomisation
Un monochromateur: Slecteur de radiations
Un dtecteur: Photomultiplicateur +
amplificateur

Source de photons
Tube dcharge cathode creuse
Cathode : lment doser (sel)
Anode: Lame de Zirconium
Tube rempli de gaz inerte (Ne, Ar)
Dcharge : Tension 500 - 800 volts
Intensit = qqes mA (suivant lment)
Obtention du spectre dmission de llment
doser
Lampes mono lment et multi lments
Gnrateurs datomes
Fonction de la nature des lments doser
Flamme: Cas gnral
Atomisation thermique: Dtection plus
basse
Flamme froide et gnrateurs dhydrures:
spcifique certains lments (Hg,As..)
Torche plasma


Atomisation en flamme
Objectif: Transformer des espces de la forme
ionique la forme atomique
Analyse dchantillons liquides exempts de particules
solides.
Capillaire: Transfert de lchantillon vers la
chambre de nbulisation
Nbuliseur: Formation dun brouillard dans le
comburant: Fines gouttelettes
Brleur: Transformation des espces
ltat atomique
Principales Flammes
Combustible

Hydrogne
Comburant

Argon
Temprature

1000 K

Propane
Butane
Air

Oxygne
2200 K

3200 K

Actylne
Air
Oxygne
Protoxyde
dazote
2500 K
3400 K
3200 K
Autres Gnrateurs datomes
Atomisation lectrothermique: Four -
Schage (# 100C)
- Dcomposition thermique (100 1800C)
- Atomisation (1800-2600C)
- Nettoyage Four (2800C)
Gnrateur de mercure
HgCl
2
+ SnCl
2
.Hg + SnCl
4
Gnrateurs dhydrures As, Sb
Formations dhydrures (AsH
3
) + Flamme
froide (1000C)



Slecteur de radiations et PM
Monochromateur: Slection dune longueur
donde
Bande passante: 0,05 0,1 nm si spectre
complexe sinon 0,5 2 nm
Photomultiplicateur: Permet de compter les
photons transmis
Amplificateur + calculateur
La quantification
talonnage externe (ajouts doss)
Flamme: Mesure en continu flux
constant..Permet de minimiser les fluctuations de
la flamme
Pb des interfrences (chimiques, spectrales)
Utilisation de modificateurs LaCl
3
, HNO
3
..
Ralisation de dilutions
Sensibilits: Flamme # ppm
Four # ppb
Exemples dApplications
Sols, Sdiments NF X 31-151
- Calcination 450C -
Solubilisation (HF,HCLO
4
) -
Evaporation et mise sec - Reprise
eau rgal(HCl/HNO
3
)
Dosage par absorption atomique (Cd,
Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Zn)
Eaux : Dosage du Hg par SAA sans
flamme NF T 90-113
Minralisation de lchantillon par KMnO
4
et
K
2
S
2
O
8
95C
Rduction par SnCl
2
Obtention de Hg
Entranement sous argon
Mesure 253,7 nm Cuve fentre
Limite de dosage 0,5 g/l
Eaux: Dosage de dix lments
mtalliques (directe et indirecte)
NF T90-112 (Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn, Ag,
Cd et Pb)
Flammes air / actylne -
Oxydantes Fe, Ni, Cu, Mn -
Rductrices Cr -
Normales Co, Zn, Ar, Cd et Pb
Ex du plomb: 283,3 nm et/ou 217 nm
Dosage direct
Elment Longueur donde Dtection (ppm)
Cr 357,9 0,1-10
Mn 279,5 0,05 - 4
Fe 248,3 0,1 - 10
Co 240,7 0,1 - 10
Ni 232 0,1 - 10
Cu 324,7 0,05 - 6
Zn 213,8 0,05 - 2
Ag 328,1 0,05 - 4
Cd 228,8 0,05 - 2
Pb 217 0,2 - 10
Dosage indirect
Complexation(APDC) et
extraction du complexe
par la MIBC
Dosage dans le phase
organique

Cr 1-200 ppb
Mn 1-200 ppb
Fe 1-200 ppb
Co 1-200 ppb
Ni 1-200 ppb
Cu 1 -200ppb
Zn 0,5 - 50ppb
Ag 0,5 - 25ppb
Cd 0,5 - 50ppb
Pb 1- 200 ppb