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EFECTO

DE LAS

TEMPERATURAS
ALTAS Y BAJAS

SOBRE LAS

MEMBRANAS
BIOLGICAS
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Introduccin

La membrana celular o tambin llamada membrana plasmtica es la
estructura que permite la separacin entre la clula y el ambiente
extracelular.


Es de fundamental importancia ya que controla el contenido qumico de la
clula.


Adems, travs de ella se transmiten mensajes hay diversidad de receptores
que son molcula de protena o glicoprotena con una estructura
tridimensional especfica a la cual puede unirse una sustancia (por ejemplo,
una citoquinina, un antgeno, etc.) con una estructura complementaria;
presente tpicamente en la superficie de una membrana.

La unin de una molcula complementaria a un receptor puede generar un
proceso de transporte, activacin o un cambio en los procesos que ocurren
dentro de la clula.
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Funciones:


Conservar la integridad estructural de la clula

Controlar el paso de sustancias hacia el interior y la salida de otras

Regular las interacciones celulares

Reconocer por medio de receptores antgenos, clulas extraas y
clulas alteradas

Establecer sistemas de transporte para molculas especificas

Efectuar la transduccin de seales fsicas, qumicas o ambas en los
diversos sucesos celulares.

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Si bien la pared celular es en su mayor parte permeable al agua y a los
solutos, la penetracin de las sustancias al interior de la clula no se
realiza por simple difusin.


Por el contrario, la membrana plasmtica acta como una barrera
selectiva, restringiendo dicho movimiento.


Este control sobre la entrada y salida de iones minerales, azcares,
aminocidos y otras sustancias es de suma importancia para que se
mantenga la actividad vital de la clula.
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Modelo del Mosaico Fluido
(Jonathan Singer y Garth L. Nicolson, Science 1972)

Es el modelo aceptado actualmente.

La estructura de la bicapa es bastante fluida.
Las molculas de protenas pueden desplazarse lateralmente por la bicapa,
tomando unas disposiciones (mosaico) que cambian en el tiempo y en lugar.
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La membrana citoplasmtica tiene espesor variable segn se trate de una
zona que contenga protenas o de una slo con lpidos expuestos.


En consecuencia su superficie parecer rugosa.


El conjunto, sin embargo, se presentara como una estructura de 9-10 nm
de espesor, que es el atribudo a una membrana biolgica.


Cualquier alteracin en la naturaleza de la membrana afecta su
permeabilidad.



En el curso de este trabajo prctico veremos el efecto de
distintos factores sobre las fracciones proteica y lipdica.
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Objetivos


- Reconocer la relacin estructura-funcin de las membranas biolgicas.


- Observar la alteracin que producen en las membranas las altas
temperaturas, las bajas temperaturas y los solventes orgnicos.


- Elaborar tablas y grficos que permitan interpretar los resultados.
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Materiales y mtodos


- Remolachas (Beta vulgaris var. esculenta) enteras y un trozo de las
mismas previamente congelado.

- Sacabocados, hojas de afeitar, cristalizador, tubos de ensayo, agua
destilada, pinza, pipetas de 10 ml


- Mechero, trpode, vaso de precipitado y termmetro


- Benceno


- Fotocolormetro o espectrofotmetro
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Se trabajar con remolacha ya que posee el pigmento caracterstico,
color rojo violceo.

Se trata de un pigmento hidrosoluble denominado betanina que se
acumula en vacuola.

Recordemos que la vacuola es una organela llena de fluidos y rodeada
por una membrana tpica el TONOPLASTO.


En consecuencia cualquier dao que les ocurra a las membranas
ocasionar la saluda del pigmento.



DAO SALIDA DEL PIGMENTO
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Experimento 1. Efecto de las altas temperaturas

a) Corte con un sacabocados 7 trozos de 4 cm de longitud de
parnquima radical de remolacha.

b) Quite los extremos suberizados.

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c) Lave con agua corriente para eliminar los pigmentos de las clulas rotas
y colquelos en un cristalizador con agua.
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d) Ubique uno de los cilindros en un tubo de ensayo con 10 ml de agua
destilada que ser el control o testigo de todos los experimentos a realizar.


e) Mientras tanto:
* Caliente 500 ml de agua en un vaso de precipitado a 70C,
* Sumerja un trozo de remolacha durante 5 minutos
* Pase a tubo de ensayo c/10 ml de agua destilada a T ambiente.
* Repita esta operacin a:

- 65C,
- 60C,
- 55C,
- 50C
- 45C.

f) Al cabo de una hora retire los trozos de remolacha de cada uno de los
tubos, agite el contenido de los mismos y mida la absorbancia en un
espectrofotmetro a 425nm usando como blanco agua destilada.
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Experimento 2. Efecto de las bajas temperaturas

Se trabajar con dos tratamientos que consisten en:

I) Tejido de remolacha sometido a congelamiento a unos -3 C
(congelador de heladera).

II) Tejido sometido a congelamiento a 20C (freezer)

Los tejidos han sido retirados 24 hs antes del trabajo prctico para
procesarlos.

a) Corte con un sacabocado un trozo de 4 cm de longitud de
parnquima radical de remolacha congelada previamente

b) Quite los extremos suberizados.

c) Sumerja los trozos de remolacha previamente congelados en un
tubo de ensayo conteniendo 10 ml de agua durante una hora.

d) Luego agite y mida la absorbancia como en el Experimento 1
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Experimento 3. Efecto de los solventes orgnicos

a) Sumerja el trozo de remolacha en un tubo de ensayo
conteniendo 10 ml de benceno durante 45 minutos.


b) Con sumo cuidado extraiga el cilindro con una pinza y
colquelo en un tubo de ensayo con 10 ml de agua destilada,
agite, retire el cilindro.


c) Mida la absorbancia como en el Experimento 1.
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Procesamiento de los Resultados


a) Tabule los resultados obtenidos en los distintos experimentos.


b) Realice un grfico con los valores correspondientes al Exp.1.


c) Interprete los resultados.
Responda las preguntas del cuestionario de la Gua