IAS2

28/09/2014 M.Sc. Segundo M.
Miranda Leyva Pgina 1

CURSO TERICO - PRCTICO
INSTRUMENTACIN Y
ANLISIS

V CICLO
FACULTAD DE FARMACIA Y
BIOQUMICA
28/09/2014 M.Sc. Segundo M. Miranda Leyva Pgina 2
Conferencias:
SELECCIN DE UN METODO
ANALITICO

Definicin del problema
Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad.
CALIBRACION DE LOS METODOS INSTRUMENTALES:
Curvas de calibrado
Mtodo de la adicin estndar
Mtodo del patrn interno
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
CURSO: INSTRUMENTACIN Y ANLISIS
Segunda
Semana
Profesor:

M.Sc. Q.F. Segundo M. Miranda Leyva

SELECCIN DE UN MTODO ANALTICO
Exige definir la naturaleza del problema analtico;
estableciendo:
a) Exactitud y precisin requeridas,
b) Muestra y nmero disponibles,
c) Intervalo de concentracin del analito,
d) Componentes de la muestra interferentes en el
anlisis, y
e) Componentes probables y lmites porcentuales; y
propiedades de la matriz.
Esta informacin tambin ha sido utilizada en la
seleccin del mejor diseo y los COMPONENTES
INSTRUMENTALES MAS ADECUADOS.

SELECCIN DE UN MTODO ANALTICO
El investigador o analista debe comprender las
condiciones acerca del mtodo de medicin,
diseo y los componentes instrumentales para
poder:
a) Seleccionar el instrumento adecuado para
una medicin, y
b) Usar efectiva y eficientemente el
instrumento seleccionado.
La seleccin deficiente de un principio fsico
en el diseo, o de un componente; limitar la
seguridad, sensibilidad y utilidad de un
instrumento.
Control de variables
Factores que influyen en las mediciones:
a) Sobre la propiedad que va a observarse o su medicin, y
b) Sobre el funcionamiento seguro del instrumento.

Se debe considerar entonces:
Condiciones bajo las cuales se harn las determinaciones
Variables con influencia conocida sobre las mediciones
Variables que deben ser reguladas y las no reguladas.

As todas las variables que afectan el valor de las propiedades
fsicas o su observacin, deben ser reguladas o sealrseles en
alguna forma un margen durante la medicin:
Temperatura, presin atmosfrica, ondas sonoras,
emanaciones radiactivas, campos elctricos o magnticos.
Otros factores y su control
a) Uso de curvas de calibracin.
Puede compensar multitud de factores cuyos efectos
no pueden calcularse con facilidad o regularse
convenientemente.
b) Uso de un testigo.
Puede asumirse que la mayora de las influencias
perturbadoras afectan igualmente al testigo y a la
muestra.
o Ejm. en fotometra de absorcin al visible, se
utiliza una solucin "BLANCO", con la finalidad de
conocer la absorcin propia del material de
inters solamente.
CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO
DE LOS INSTRUMENTOS
Criterios cuantitativos de funcionamiento de los
instrumentos,
Pueden usarse para decidir si un
determinado mtodo instrumental es o no
adecuado para resolver un problema
analtico.
Estas caractersticas se expresan en
trminos numricos que se denominan
parmetros de calidad.
Parmetros de calidad
Para un problema analtico dado,
Permiten al qumico reducir la eleccin
de los instrumentos a tan slo unos
pocos.
La seleccin entre estos puede
entonces basarse en los criterios
cualitativos de funcionamiento.
PRECISION
Para de datos analticos
Grado de concordancia mutua entre los datos que se han obtenido
de la misma forma.
La precisin mide el error aleatorio, o indeterminado, de un anlisis.
Los parmetros de calidad de la precisin son:
Desviacin estndar absoluta,
s = [(ui - )/N-1]
1/2
Desviacin estndar relativa,
RSD = s/
Desviacin estndar de la media,
s
m
= s/N
Coeficiente de variacin,
CV = (s/ ) 100%
Varianza, s
SESGO
Mide el error sistemtico, o determinado, de un
mtodo analtico.
El sesgo se define por la ecuacin:
exactitud = - x
t
(2-1)
Donde:
es la media de la poblacin para la
concentracin de un analito de una muestra cuya
concentracin verdadera es x
t
.
Para determinar la exactitud hay que analizar uno o
varios materiales estndar de referencia cuyas
concentraciones de analito se conozcan.
SESGO
Los resultados de dichos anlisis contendrn
tanto errores aleatorios como errores
sistemticos,
Al realizar suficientes anlisis el error aleatorio se
reduzca a un valor prximo a cero.
La media de 20 o 30 anlisis repetidos puede
suponerse, normalmente, que est libre de errores
aleatorios y,
Puede ser una buena estimacin de la media de
la poblacin en la ecuacin 2-1.
SESGO
Cualquier diferencia entre esta media y la
concentracin conocida de analito del material
estndar de referencia puede atribuirse a un
error.
En general, al desarrollar un mtodo analtico,
todos los esfuerzos se dirigen hacia
la identificacin de la fuente de error y
a su eliminacin o correccin
mediante el uso de blancos y la
calibracin del instrumento.
SENSIBILIDAD
La sensibilidad de un instrumento o de un mtodo
mide su capacidad de discriminar entre pequeas
diferencias en la concentracin del analito.
Dos factores limitan la sensibilidad:
la pendiente de la curva de calibracin y la
reproducibilidad o precisin del sistema de medida.
Dos mtodos que tengan igual precisin, el que
tenga mayor pendiente de la curva de calibracin
ser el ms sensible.
Un corolario a esta afirmacin es que si dos
mtodos tienen curvas de calibracin con igual
pendiente, el ms sensible ser aquel que
presente la mejor precisin.
Sensibilidad de calibracin
Segn la IUPAC,
Se define como la pendiente de la curva de
calibracin a la concentracin de inters.
Como parmetro de calidad tiene el
inconveniente de
No tener en cuenta uno de los factores que
determinan la sensibilidad, esto es, la
precisin.
Sensibilidad analtica
= m/s
s
(2-2)
Donde:
m; pendiente de la curva de calibracin y
s
s
; desviacin estndar de la seal correspondiente a la
concentracin de inters del analito.
Es relativamente insensible a los factores de amplificacin.
Al aumentar la ganancia de un instrumento por un factor de
cinco,
m se incrementar en cinco veces;
Habr tambin un aumento correspondiente en s
s
,
mantenindose la sensibilidad analtica prcticamente
constante.
Es independiente de las unidades de la seal medida (S).
Es dependiente de la concentracin,
Porque s
s
vara con ella.
LIMITE DE DETECCION
Concentracin o el peso mnimos de analito que
pueden detectarse para un nivel de confianza dado.
Depende de:
la relacin entre la magnitud de la seal analtica y el valor de
las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco.
a menos que la seal analtica sea mayor que la del blanco
en un mltiplo k de las variaciones del blanco debidas a
errores aleatorios, no ser posible detectar con certeza la
seal analtica.
Cerca al lmite de deteccin, la seal analtica se
aproxima a la seal media del blanco
bl
.

S
m
= S
bl
+ k s
bl

c
m
= (S
m
S
bl
)/m
INTERVALO DE
CONCENTRACION APLICABLE
El intervalo til de un mtodo analtico,
va desde la concentracin ms pequea con la que
puede se realizar medidas cuantitativas (lmite de
cuantificacin, LOQ)
hasta la concentracin a la que la curva de
calibrado se desva de la linealidad (lmite de
linealidad, LOL).
Lmite inferior de las medidas cuantitativas,
diez veces la desviacin estndar cuando la concentracin del
analito es cero
(10 s
bl
).
SELECTIVIDAD
Grado de ausencia de interferencias
debidas a otras especies contenidas en
la matriz de la muestra.
Ningn mtodo analtico est totalmente
inafectado por otras especies y,
Con frecuencia,
se deben minimizar los efectos de estas
interferencias.
CALIBRACION DE LOS METODOS
INSTRUMENTALES
Todos los mtodos instrumentales, excepto
dos, requieren una calibracin,
Proceso que relaciona la seal analtica medida con
la concentracin del analito.
Mtodos ms frecuentemente utilizados:
1. Realizacin y el uso de una curva de calibrado,
2. De la adicin estndar y
3. Del patrn interno.
GRAFICAS DE CALIBRACION EN
ANALISIS INSTRUMENTAL
La capacidad de las tcnicas de anlisis instrumental para manejar
un intervalo amplio de concentraciones de analito significa que
se calculan los resultados, y
se evalan los errores aleatorios de una manera concreta,
Es diferente a cuando se repite una sola medicin varias
veces.
Procedimiento habitual:
El analista toma una serie de muestras (normalmente tres o
cuatro, y posiblemente alguna ms) en las que se conoce la
concentracin del analito.
Las mediciones se realizan en el instrumento analtico en las
mismas condiciones que las usadas para las muestras
problema (es decir las "desconocidas").
Se establece la grfica de calibracin,
Se obtiene la concentracin de analito en cualquier muestra
problema por interpolacin.
GRAFICAS DE CALIBRACION EN
ANALISIS INSTRUMENTAL
Este procedimiento general plantea varias preguntas estadsticas
importantes.
1) Es lineal la grfica de calibracin? si es una curva, qu
forma tiene?
2) Teniendo en cuenta que cada uno de los puntos de la lnea
de calibracin est sujeto a errores, cul es la mejor lnea
recta (o curva) que pasa por esos puntos?
3) Suponiendo que la calibracin es realmente lineal, cules
son los errores estimados y los lmites de confianza para la
pendiente y la ordenada en el origen de la recta?
4) Cuando la grfica de calibracin se usa para el anlisis de
una muestra problema, Cuales son los errores y los lmites
de confianza para la concentracin determinada?
5) Cul es el lmite de deteccin del mtodo? Esto es, Cul
es la menor concentracin de analito que se puede detectar
con un nivel de confianza predeterminado?
A menudo se obtienen representaciones grficas
(curva patrn o curva analtica) que son lineales en
un amplio intervalo de concentracin (intervalo til)
lo cual es deseable, ya que estn menos sujetas a
error que las curvas no lineales. Sin embargo, no es
raro encontrar representaciones grficas no lineales,
las cuales requieren un elevado nmero de datos de
calibrado para establecer con precisin la relacin
entre la respuesta del instrumento y la
concentracin. Se obtiene la ecuacin de la curva de
calibrado por el mtodo de mnimos cuadrados que
permite calcular directamente la concentracin de las
muestras.
Curvas de calibrado
El xito del mtodo de la curva de calibrado
depende,
De la exactitud que tengan la concentracin de los
patrones y
De lo que se parezca la matriz de los patrones a la
de las muestras que se analizan.
Reproducir la matriz de muestras complejas suele
ser difcil o imposible y sus efectos dan lugar a
errores por interferencias.
Para minimizarlas, a menudo, es necesario
separar el analito del interferente antes de medir
la seal del instrumento.
Curvas de calibrado
m b
0,02184 0,00956
Cx = (Ap-b)/m
= 15,72527 ug/mL
y = 0,0232x - 0,0235
R
2
= 1
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 5 10 15 20 25 30 35
mL
A
B
S
PROM Lineal (PROM)
Curvas de calibrado
m b
0,0232 -0,02353
Cx = (Ap-b)/m
= 16,22989 ug/mL
Especialmente til para analizar muestras
complejas en las que la probabilidad de que
se produzcan efectos debidos a la matriz es
considerable.
Este mtodo puede aplicarse de diferentes
formas.
Una de las ms habituales implica la adicin de
diferentes volmenes de una disolucin patrn a
varias alcuotas de la muestra del mismo tamao.
Este proceso se conoce como adicin de muestra
(spiking).
Despus, cada disolucin se diluye a un volumen fijo
antes de efectuar la medida.
Cuando la cantidad de muestra es limitada,
Las adiciones estndar se pueden llevar a cabo por
adiciones sucesivas de volmenes del patrn a un
nico volumen del problema exactamente medido.
Las medidas, se van haciendo en la muestra original
y despus de cada adicin del patrn en la muestra.
En la mayora de las versiones del mtodo
La matriz de la muestra es casi idntica despus de
cada adicin y la nica diferencia es la
concentracin de analito, o la concentracin de
reactivo en el caso de que se aada un exceso de
un reactivo analtico.
Como los patrones se preparan en alcuotas de la
muestra, todos los dems componentes de la
mezcla sern iguales.
y = 0,2288x + 0,3514
R
2
= 0,9999
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
mL
A
B
S
PROM Lineal (PROM)
m b Cs Vx
0,2288 0,3514 10 1
Cx = (bCs/mVx)
= 15,35839 ug/mL
Clculo de la desviacin estndar del resultado
Cx Sm/m Sb/b
15,35839 0,008384 0,005107
Sc = 0,150773 ug/L
Un patrn interno es
una sustancia que se aade a todas las muestras, blancos y
patrones de calibrado en una cantidad fija.
Tambin puede ser un componente mayoritario de las
muestras y los patrones pero que est en una concentracin
lo suficientemente elevada como para que se pueda
considerar que es la misma en todos los casos.
En este caso el calibrado es una representacin grfica del
cociente entre la seal del analito y la seal del patrn interno
en funcin de la concentracin de analito de los patrones.
En las muestras, este cociente se utiliza para determinar la
concentracin de analito a partir de la curva de calibrado.
Si se elige y se usa adecuadamente un patrn interno,
se pueden compensar algunos errores aleatorios o
sistemticos. As,
Si las seales del analito y del patrn interno tienen una
respuesta proporcional al error aleatorio instrumental y a las
fluctuaciones del mtodo, la relacin entre dichas seales es
independiente de dichas fluctuaciones.
Si ambas seales se modifican de la misma forma por el efecto
de la matriz, tambin se compensan en ambas dichos efectos.
Cuando el patrn interno es el componente mayoritario de las
muestras y de los patrones, tambin puede suceder que se
compensen los errores que se producen en la preparacin de
la muestra, disolucin y filtrado.
La mayor dificultad para aplicar el mtodo del patrn interno es
encontrar la sustancia adecuada que sirva a estos efectos, as como
para incorporarla a las muestras y a los patrones de forma
reproducible.
El patrn interno deber dar una seal similar a la del analito en
la mayora de los casos pero lo suficientemente diferente como
para que ambas seales sean claramente diferenciables por el
instrumento.
Se debe asegurar la ausencia de patrn interno en la matriz de
la muestra de tal forma que la nica procedencia del patrn sea
la cantidad aadida.
Por ejemplo, el litio es un patrn interno adecuado para las
determinaciones de sodio o potasio en suero sanguneo,
debido a que el comportamiento qumico del litio es similar al
de ambos analitos pero no aparece de forma natural en la
sangre.
El mtodo del patrn interno se utiliza, con frecuencia, para la
determinacin de elementos traza en metales por
espectroscopia de emisin.
Hoy es un da especial,
Muchas Gracias
A todos ustedes
Dsfrtalo a plenitud!

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