CANALES DE POTASIO EN

LAS VAS RESPIRATORIAS,

CLULAS EPITELIALES
ALVEOLARES y CARDIACAS
Fisiologa Humana

Jefe de Ctedra:
Mdico Neil Flores Valdez Mdico Internista

Mdico Encargado del Seminario:
Mdico Orlando Vargas Anahua Mdico Internista

Estudiante Encargado:
Diego Felipe Marca Ticona (2012-36784)
Canales de K
+
en las vas
respiratorias y clulas epiteliales
alveolares

Funcin: Transporte transepitelial de los iones y lquidos .
En las vas respiratorias normales , el equilibrio entre la absorcin
de Na
+
y la secrecin de Cl
-
es necesario para mantener un
volumen de lquido periciliar adecuado para la funcin ciliar correcta.
En los alvolos , la absorcin de Na
+
y Cl
-
es esencial para el
lquido de limpieza alveolar en el nacimiento, resolucin de edema
pulmonar en adultos.
CFTR y ENAC, ampliamente investigados.
Casi 40 diferentes tipos de canales de K
+
en las vas respiratorias y
las clulas epiteliales alveolares, pero su funcin es an
desconocida.
Una de las principales funciones del canal de K
+
en epitelios es
controlar el potencial de membrana mantener un gradiente
electroqumico para el transporte de iones y fluidos.


Identidad molecular de los canales
de K
+
expresada en las vas
respiratorias y las clulas epiteliales
alveolares

Canales Kv de 6TMD
El gen de KvLQT1 humano (KCNQ1, Kv7.1), responsable de la
arritmia cardiaca humana, fue identificado por clonacin posicional
en 1996.
La expresin de KvLQT1 se inform posteriormente en clulas
epiteliales nasales, traqueales, bronquiales (Calu-3, 16HBE14o-,
Nuli, Cufi) las clulas ciliadas de bronquiolos terminales, y clulas
epiteliales ATII
Entonces fue establecido que KvLQT1 se ensamblan con MinK para
formar el canal responsable de la Iks de corrientes cardacas.
En los pulmones, KvLQT1 podra estar asociada con la protena
relacionada a MinK (Mirp), posiblemente con MiRP1 (KCNE2, Calu-
3), MiRP2 (KCNE3, la trquea, Calu-3), o MiRP3 (KCNE4, pulmn),
que se expresan en las vas respiratorias y los pulmones
Esta muy baja conductancia de canal de K + (<3 pS) es activada por
AMPc y se inhibe por cromanol 293B. Entre todos los canales Kv
desde el epitelio respiratorio, KvLQT1 es probablemente el ms
estudiado.
2 grandes tipos de corrientes Kv en las clulas alveolares. 1) canal
de bajo umbral (tipo n) semejante a los canales de K
+
rectificadores
tardos. 12-pS, sensible a la 4-aminopiridina, se activa a -40 a -20
mV. 2) tipo L o de alto umbral tipo, se activa a potenciales ms
positivos (-20 o -10 mV).
Canales Kca de 6TMD
2 subfamilias: SK y SLO.
1) SK4, (canal de Gardos) en las clulas rojas de la sangre, IKCa o
KCa3.1, fue clonado en 1997. En los pulmones KCa3.1 ha sido
detectado mediante inmunohistoqumica en la trquea (en la
membrana basolateral), en los bronquios y los bronquiolos, pero no
en los alvolos. Se demostr la presencia de KCa3.1 en clulas
bronquiales no CF (Nuli) y CF (CUFI) y, aunque en este ltimo, la
expresin de la protena KCa3.1 y la corriente se redujeron en
comparacin con Nuli. Los canales de KCa, sensible al clotrimazol,
caribdotoxina, y TRAM34, se activa por 1-etil-2-benzimidazolinona
(1-EBIO) y sus derivados.
Comnmente localizadas en la membrana basolateral del epitelio
pulmonar, las corrientes KCa3.1 tambin se han medido en la
membrana apical de bronquial 16HBE14o-(2) y clulas Nuli. Se han
detectado transcripciones de otro miembro de la familia SK, SK1, en
16HBE14o-, pero no hay evidencia de corrientes SK1 en estas
clulas
canales Kca de gran conductancia (~ 200 pS), (BKCa, maxi-KCa, o
SLO1), sensibles a iberiotoxina y caribdotoxina, tambin se
expresan en clulas nasales, A549 y en ATII

Canal 2P 4TMD
Varios miembros de la familia K2P se han detectado en la lnea de
clulas de las vas respiratorias H441: Twik-1 y -2, Trek-1 y -2, Task-
2, -3 y -4, Thik-1, y KCNK7.
Su localizacin celular se ha investigado en clulas Calu-3: Twik-2 y
Trek-1 se han detectado en el nivel de la membrana de plasma,
sobre todo en la membrana apical, mientras que Task-2 parece
estar localizada en vesculas intracelulares por debajo de la
membrana apical . Agentes tales como bupivacana, lidocana,
quinidina y han puesto de manifiesto la presencia de corrientes K2P
funcionales a travs de la membrana apical de monocapas Calu-3.
Canales Kir de 2TMD
Se han encontrado muchas trasncripciones en los pulmones :Kir2.1
[en las clulas fetales ATII y en la lnea celular de cncer de pulmn
de clulas pequeas RERF-LC-MA ], Kir3. 1, -3,2, -3,3, -3,4 y
[tambin llamados GIRK1, -2, -3, y -4, expresado en lneas celulares
de cncer, incluyendo clulas A549], Kir4.2 (en clulas Nuli, datos
no publicados ), Kir6.1 [en ATII, Nuli, clulas cufi], y Kir7.1 [en los
extractos totales de pulmn].
Un IRK1 (Kir2.1), corriente de rectificacin interna, con 31 pS de
conductancia unitaria, se ha observado en las clulas alveolares del
feto. En las clulas alveolares adultos, hemos identificado un canal
de KATP, formado a partir de la rectificacin interna, subunidad
formadora de poros Kir6.1 y SUR2B subunidades de receptor de
sulfonilurea.
Este canal, sensible a ATP, se activa por pinacidil e inhibe por la
glibenclamida. La prueba de los canales KATP funcionales en la
membrana basolateral de clulas bronquiales (Nuli, CUFI) y
alveolares se ha generado en la cmara de Ussing experimentos de
corriente de cortocircuito. Sin embargo, hemos observado que la
corriente KATP y la expresin de la protena Kir6.1 se reduce en
comparacin con las clulas CUFI Nuli.
FUNCIONES DEL CANAL DE K+
PULMONAR EN LA FISIOLOGA
EPITELIAL DEL PULMN
Intercambio de gases y la
estabilidad alveolar
La capacidad pulmonar de adaptarse rpidamente a los cambios
ambientales en PO
2
es crucial para la supervivencia. Cuerpos
neuroepiteliales (NEB) en el epitelio de las vas respiratorias,
cuerpos carotdeos arteriales, y las clulas musculares lisas
pulmonares son los tres sistemas principales de deteccin de PO
2
.
Estas clulas expresan varios canales de iones, en particular los
canales de K
+
que son sensibles a los niveles de O
2
.
De hecho, el canal de dos poros de Task-3 y el canal dependiente
de voltaje Kv3.3, expresado en NEB nativo y el modelo
inmortalizada de NEB (la lnea celular H146), han mostrado ser
inhibida despus de la hipoxia aguda. La inhibicin de los canales
de K
+
parece ser un elemento clave de la deteccin de O
2
y un
determinante crucial de la respuesta celular a la hipoxia. De hecho,
se cree que la despolarizacin de membrana, debido a la inhibicin
hipxica del canal de K
+
, para inducir el flujo de Ca
+2
a travs de
canales de Ca
+2
activados por voltaje con la liberacin del
transmisor subsiguiente por las clulas NEB
http://jgp.rupress.org/content/141/2/151
http://ajplung.physiology.org/content/296/2/L145.full.html
Otro estudio inform de dos tipos de corrientes de K
+
activadas por
reoxigenacin despus de la hipoxia en esta lnea celular, el primero
es un tipo de rectificador tardo, y el segundo, un tipo inactivado
lento.
La naturaleza del sensor de O
2
y los mecanismos por los que los
cambios en O
2
regulan la actividad de los canales de K
+
siguen
siendo inciertas. Aunque la sensibilidad de O
2
intrnseca de la
subunidad formadora de poros no se puede excluir, el mecanismo
de inhibicin del canal de K
+
es ms probablemente dependiente de
protenas accesorias sensibles a O
2
.
As, los canales de K
+
de los sistemas de deteccin de O
2
, por
ejemplo, ORC y las clulas del msculo liso pulmonar, son
elementos clave de la funcin de adaptacin de los pulmones en
respuesta a los cambios ambientales en los niveles de O
2
.
Transporte de K
+
podra por lo tanto participar en el control de la
secrecin de agente surfactante, a travs de modulacin de la seal
de Ca
2+
.


Reparacin epitelial despus de la
lesin

Limpieza mucociliar de las partculas y patgenos atrapadas en el
moco, combinada con la accin de las molculas
inmuno/antimicrobianas. Se pueden desarrollar infecciones
bacterianas y respuestas inflamatorias, lo que lleva a una Lesin
epitelial. Las enfermedades inflamatorias crnicas, tales como CF o
el asma, por ejemplo, se caracterizan por el dao tisular y
remodelacin. Despus de la lesin, la reparacin epitelial es crucial
para restaurar la funcin respiratoria y la integridad de la barrera
contra las infecciones bacterianas.
Varios procesos estn secuencialmente acoplados en la
regeneracin del epitelio pulmonar: 1) desdiferenciacin,
propagacin, y migracin de las clulas sanas, 2) la proliferacin
celular, y 3) re-diferenciacin.
Los factores de crecimiento, como el factor de crecimiento
epidrmico (EGF), factor de crecimiento de hepatocitos, factor
transformador del crecimiento , y el factor de crecimiento de
queratinocitos, a travs de sus respectivos receptores,
inducen respuestas mitognicas, motognicas y morfognicas que
son cruciales para la reparacin epitelial.



Los canales de K + tambin podran estar involucradas en la
reparacin de los epitelios de las vas respiratorias. Se ha
demostrado que los procesos de reparacin alveolar y bronquial son
altamente dependientes de la actividad del canal de K
+
Ms
precisamente, la inhibicin de KATP o KvLQT1 reduce curacin
alveolar de heridas estimulada por EGF, la migracin celular, y la
proliferacin. Por el contrario, la curacin de heridas alveolares es
estimulada por el pinacidil, un canal activador de KATP, que
tambin aumenta la migracin celular. En el epitelio Nuli bronquial,
los inhibidores de KATP, KvLQT1 y KCa3.1 provocan un adicional y
significativo efecto inhibidor sobre la curacin de heridas, la
migracin celular, y la proliferacin, en condiciones estimulada por
EGF.
Adems, nuestros resultados sugieren que el retraso en la curacin
de la herida observada en monocapas de clulas bronquiales de la
CF (cufi) podra ser el resultado de defectos de sealizacin del
receptor de EGF junto con la reduccin de la funcin y expresin del
canal de K
+



Las Respuestas Inflamatorias
La inflamacin podra regular la funcin y expresin de los canales
de K
+
.
Se ha informado, por ejemplo, que la inflamacin estimula canales
KATP y disminuye la probabilidad de apertura de BKCa en las
clulas del msculo liso. TNF tambin ejerce una accin compleja
en los canales de K
+
regulando + a algunos de ellos y - a otros. En
las vas respiratorias, las corrientes de KCa3.1 bronquiales han
demostrado ser estimuladas por la interleucina (IL) -13. En FQ, la
modulacin de la expresin y funcin de los canales de K
+
por
molculas inflamatorias podra interferir con el transporte de iones,
fluidos yreparacin de los epitelios lesionados.
Por otro lado, la inhibicin del canal de KATP disminuye la
infiltracin neutroflica, as como los niveles de TNF e IL-6 en los
pulmones y el intestino en un modelo de isquemia-reperfusin.
Tambin se ha demostrado que LPS y TNF intensifican las
corrientes Kv1.3 y expresin en los macrfagos. Por otra parte, la
activacin de macrfagos inducida por TNF y LPS , as como la
proliferacin de los macrfagos se reducen despus de la inhibicin
de los canales Kv1.3.
Los canales de K
+
podran participar en las respuestas inflamatorias
complejas en los pulmones mediante la regulacin de las funciones
celulares inmunes.

Control del transporte transepitelial
y de lquidos
Las funciones de transporte de iones y fluidos del epitelio
pulmonar son esenciales para la fisiologa pulmonar en todas
las etapas de la vida.
En las vas respiratorias, el equilibrio entre la secrecin de Cl
-

y la absorcin de Na
+
es necesario para mantener el volumen
periciliar adecuado crucial para la funcin ciliar. En pacientes
con FQ, la reduccin de la secrecin de Cl
-
y la
hiperabsorcin de Na
+
lleva a una limpieza mucociliar
ineficiente y la acumulacin de moco que favorecen las
infecciones crnicas y la inflamacin.
El control adecuado de la absorcin de Na
+
, secrecin de Cl
-
,
y transporte de lquido es por lo tanto necesario para la
funcin pulmonar normal, as como para la resolucin de
patologas caracterizadas por anormalidades de transporte
de iones.
Los canales de K
+
, mediante el control del potencial de
membrana y la creacin de un gradiente electroqumico para
el transporte de Na
+
y Cl
-
, son por lo tanto elementos clave
en el control del volumen de la superficie del lquido y su
composicin.

Canales de K+ y secrecin de
Cl- en las vas respiratorias
En las vas respiratorias, dos principales tipos de canales de K
+
,
llamados, canales KVLQT1 y KCa3.1, se han asociado con el
control de la secrecin de Cl
-
. De hecho, la inhibicin farmacolgica
de los canales KVLQT1 y KCa3.1 reduce fuertemente el transporte
de Cl- en las clulas nasales, traqueales y bronquiales. Por el
contrario, se ha demostrado que la activacin KCa3.1, por
compuestos tales como 1-EBIO, CC-EBIO, 4-clorobenzo
isoquinolina (CBIQ), y clorzoxazona, por ejemplo, estimula la
secrecin de Cl
-
a travs de CFTR y / o canales de Cl
-
activados por
Ca
+2
(CACC) en las clulas de las vas respiratorias sin CF.
En cultivos primarios de clulas bronquiales humanas de pacientes
F508, 1-EBIO no logr estimular la secrecin de Cl
-
a 37 C. Sin
embargo, este compuesto aumenta significativamente las corrientes
de Cl
-
en las clulas cultivadas a 26 C, la cual aument el
procesamiento de CFTR F508 en la membrana. Desde entonces, la
activacin del canal KCa3.1 se ha propuesto como una estrategia
prometedora para favorecer el transporte de Cl
-
en los tejidos con
FQ a travs de CFTR residuales o parcialmente rescatados, como
canales de Cl
-
alternos

Canales de K+ y absorcin de
Na+
La absorcin de Na
+
depende de la entrada pasiva de Na
+
a travs
de canales apicales de Na+ (canal dependientes de nucletidos
cclicos, canal altamente selectivo, y / o el canal no selectivo) y de
salida activa por la bomba Na
+
-K
+
- ATPasa basolateral, mientras
que los K
+
son reciclados por los canales de K
+
basolaterales, de
acuerdo con el modelo de Ussing. En las clulas ATI, se han
detectado corrientes de K
+
, pero la identidad molecular exacta de
estos canales de K
+
es an desconocida (ATI;. Fig. 1B). En las
clulas ATII, se han identificado tres tipos de canales de K
+
(canales
KvLQT1, KATP y KCa3.1) , en el cultivo primario de membrana
basolateral. Estos canales juegan un papel importante en el
transporte alveolar de Cl
-
y Na
+
. Curiosamente, tambin se observ
que la modulacin a largo plazo de canales de K + (tratamientos de
24 h con inhibidores o activadores KvLQT1 o KATP) regula no slo
el transporte de Na
+
y Cl
-
, sino tambin controla la expresin de
ENAC y CFTR, as como la absorcin de lquido a travs de
monocapas ATII.
La activacin de KATP aumenta la limpieza alveolar en el pulmn
humano resecado.
El relevante papel de los canales
apicales de K+ en el transporte
trasnepitelial

Aunque se ha supuesto que los canales de K +, como
KvLQT1 y KCa3.1, que controlan el gradiente electroqumico
para el trasporte de Na
+
y Cl
-
se encuentran en la membrana
basolateral, se inform recientemente sobre la localizacin
apical de estos canales en las clulas bronquiales.
Se identific canales K2P K
+
en la membrana apical de las
clulas Calu-3. Estos canales pueden participar en la
salida/reciclaje de K
+
a travs de la membrana apical y
podran ayudar a la secrecin transepitelial de aniones. Por
ltimo, muchos canales Kv tambin se han detectado en la
membrana apical de las clulas ATII. Se ha propuesto que
podran estar implicados en la secrecin de K
+.


INACTIVACIN TIPO C DE LOS
CANALES DE K
+

DEPENDIENTES DE VOLTAJE :
CONSTRICCIN O
DILATACIN DE POROS?




1) cmo la inactivacin de tipo C de canales KV dependientes de voltaje altera la
boca externa del poro, y
2) cmo es que la puerta V o los segmentos TMS4 que lo controlan estn
relacionados a la inactivacin de tipo C.
Importancia funcional de la
inactivacin de canales Kv
El uso ms claro de inactivacin tipo C es en los canales
humanos ERG (HERG o KV11) en las clulas cardiacas
ventriculares. Estos canales se inactivan rpidamente por la
despolarizacin y llevan a cabo su funcin principal durante
la repolarizacin de la meseta del potencial de accin: tiran
de nuevo el Vm al potencial de reposo y lo mantienen ah, lo
que impide arritmias, hasta que cierran lentamente sus
puertas V.

Cul es el evento final en la
inactivacin tipo C?
Una cadena de eventos que comienza con la despolarizacin
provoca la inactivacin de tipo C, consideramos en primer lugar el
evento final de la cadena (constriccin cerca de la boca del poro).
Se sustituye el residuo treonina en la posicin 449 en SHB con una
cistena . Cd
+2
en el medio externo promueve la inactivacin de tipo
C en este mutante con una potencia que sugiere que se une a ms
de una y tal vez a todas las 4 cistenas. No hay ninguna prueba
directa que demuestre que los cambios en la reactividad de
cistenas de ingeniera en la boca externa del poro acompaan
provocan la inactivacin de tipo C en canales KV,.
La hiptesis de la constriccin de poro, se han investigado
estructuras cristalinas de la canal bacteriana. Estos canales son en
gran parte independientes de voltaje y por lo tanto carecen de una
caracterstica clave en la inactivacin de tipo C en canales de K
+

eucariontes dependientes de voltaje. Sin embargo, las corrientes a
travs de KcsA, activados por cambios en el pH, disminuyen con el
tiempo y este comportamiento de puerta pueden implicar cambios
estructurales similares a las de la inactivacin de tipo C de los
canales KV dependientes de voltaje.

Para explorar esta posibilidad, se cristaliz una construccin
KcsA. Sus principales caractersticas son las siguientes: (a) un
cambio drstico en ocupacin de K
+
del filtro de selectividad
con probable reorganizacin de los grupos carbonilo, que no se
resuelven, (b) una constriccion 2-A en la posicin de Gly77,
equivalente a G372/G444 c) una dilatacin considerable del
filtro de selectividad en posicin S3. Cualquiera de estos tres
cambios podran hacer al canal no conductor.
Enlazamiento de K+ por el filtro de
selectividad
En el agua, estn fuertemente unidas a las molculas dipolares de
agua que los rodean con una energa libre total de ~ 73 kcal / mol (~
306 kJ / mol) Para lograr una mnima energa libre en el filtro, un in
K
+
deshidratado debe unirse a los carbonilos circundantes .
La funcin principal del filtro de selectividad es excluir Na
+
, que est
presente en alta concentracin en el medio extracelular y fluira
hacia el interior, particularmente a un Vm negativo, no fueron
excluidos. Los carbonilos de los filtro estn demasiado separados
para unirse al ion Na
+
de manera eficaz y por lo tanto frente a una
barrera de alta energa a la entrada.



Almers y Armstrong (1980) plantearon la hiptesis que en
retirada de K
+
, los carbonilos del filtro (postulado), que
normalmente se unan al K
+
, se repelen entre s en su ausencia
y desestabilizan el filtro. Cabe destacar que cuando la puerta V
del canal permanece cerrada por mantener un Vm a -80 mV
durante nula exposicin a K
+
(sin pulsos despolarizantes), la
conductancia de K
+
se mantiene durante al menos 10 min.
La despolarizacin facilita la prdida de K
+
desde el filtro de
selectividad mediante la apertura de la puerta V, y ~ 40% de la
conductancia se pierde con cada pulso despolarizante. Estos
resultados demuestran claramente la unin estable de K
+
en el
filtro cuando la puerta V est cerrada, as como la necesidad de
K
+
para mantener la estructura de filtro
Iones K+ e inactivacin tipo C
El K + externo tiene un marcado efecto sobre la inactivacin de tipo C en canales
KV
Los aumentos en la concentracin de K
+
extracelular ([K
+
]
o
) retrasan la
inactivacin tipo C con una afinidad aparente a unos pocos, una concentracin
fisiolgicamente relevante, y acelera la recuperacin de corriente inica de la
inactivacin tipo C en los potenciales. Por lo tanto, las elevaciones en [K
+
] o,
despus de una rfaga de potenciales de accin, tienen el poder de alterar la
excitabilidad neuronal, al afectar inactivacin de tipo C
Se observ una aceleracin de inactivacin tipo C cuando el suministro de iones
K
+
desde el interior se ve reducida, ya sea mediante la reduccin de la
concentracin de K
+
intracelular ([K
+
] i) o cuando el flujo de salida de K
+
es
impedido por bloqueadores de los canales o por el cierre de la N- puerta
La eliminacin completa de K
+
produce un aumento transitorio (unos pocos
segundos) de la permeabilidad de Na
+
en los canales de SHB. El aumento de la
permeabilidad de Na
+
es seguido por la prdida total de la conduccin. Este
estado desnaturalizado o disfuncional tiene anomalas que se extienden al
aparato de puerta: reduccin de movimiento de puerta dependiente carga (Qg) y
una alteracin en el tiempo de la corriente de puerta (Ig) Este estado disfuncional
no es un estado inactivado de tipo C,

Significativamente, la T449V y T449Y mutantes de SHB, que no se
someten a inactivacin de tipo C, no se vuelven desnaturalizados /
disfuncionales ni permeables al Na
+
en ausencia de K
+
lo que
demuestra la estrecha relacin de tipo C inactivacin y la dilatacin
del filtro.
En general, parece razonable poner a prueba la sugerencia de que
la inactivacin de tipo C es el resultado de una dilatacin de sitio
ms exterior del filtro de selectividad, suficiente para evitar la
conductancia de K
+
. La dilatacin se limita al sitio exterior por la
presencia de alta [K
+
] i, que mantiene los sitios filtro interior intacta.
. Una reduccin en la ocupacin de K
+
en el sitio 4 debilita las
interacciones electrostticas entre los iones K
+
permeables en el
filtro y aumenta la ocupacin de K
+
en el sitio ms exterior,
protegiendo as la integridad estructural del filtro.

La inactivacin de tipo C es ms
probable despus de la activacin de
los sensores de voltaje TMS4 y / o la
apertura de la puerta V