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Regulacin de la actividad enzimtica, 1

v =
k
+2
e
0
s
K
m
+ s
Regulacin de la actividad enzimtica
I. Sobre e
0
: Regulacin de la concentracin enzimtica

II. Sobre K
m
y k
+2
: Regulacin de la actividad intrnseca
de la enzima

1. Regulacin alostrica
2. Regulacin por modificacin covalente
=
V
max
s
K
m
+ s
Regulacin alostrica
Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste fino
de la actividad enzimtica, a travs de efectos de
retroalimentacin (negativa o positiva)
Regulacin por modificacin covalente
Procesos a nivel supracelular (orgnico); regulacin
a gran escala de actividades enzimticas, a travs de
modificacin covalente de enzimas, provocadas por
seales (transduccin de seales)
Retroalimentacin negativa en vas metablicas, 1
Thr a-cetobutirato Ile
Treonina
desaminasa
Sntesis de Isoleucina
El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera
enzima de la misma, Treonina desaminasa
Retroalimentacin negativa en vas metablicas
Asp + CP Carbamil aspartato CTP
Sntesis de pirimidinas
ATCasa
El producto final de la va, CTP (citidin trifosfato) inhibe a la
primera enzima de la ruta metablica, Aspartato transcarbamilasa

Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP
ATP
+
Rutas metablicas controladas por retroalimentacin
Glicolisis Fosfofructokinasa ATP
Neoglucognesis FBP fosfatasa AMP
Bios. cs. Grasos AcetilCoA carboxilasa AcilCoA
Bios. Colesterol HMGCoA reductasa Colesterol
Bios. Purinas PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP
Ruta
Enzima
Inhibidor
En el estudio de las enzimas controladas por realimentacin
negativa, se comprobaron una serie de regularidades en las mismas:

1. Primer paso de una ruta metablica o punto de ramificacin
2. Enzimas de naturaleza compleja: subunidades; la enzima puede
desensibilizarse a sus inhibidores por diversos mtodos.
3. Los inhibidores se comportan como competitivos (elevan el valor
de la K
m
aparente, pero sin embargo no son anlogos estructurales
del substrato
Estas ltimas caractersticas lleva al concepto de alosterismo:
Una accin sobre la actividad enzimtica que se desarrolla
fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1960)
s s i
Centro
activo
Centro
alostrico
Centro
alostrico
Centro
activo
En ausencia de inhibidor,
el substrato se fija normal-
mente al centro activo
Cuando el inhibidor ocupa
el centro alostrico, tiene
lugar un cambio conformacional
en el centro activo que impide la
fijacin del substrato
Inhibicin alostrica
Otra caracterstica importante de las enzimas alostricas
es que presentan cinticas anmalas, normalmente
cinticas sigmoides:
v
s
La presencia de una
sigmoide implica
la existencia de
cooperatividad en la
fijacin del substrato
La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijacin de una
molcula de substrato favorece la fijacin del siguiente, y as
hasta ocuparse toda la molcula
s s s s s s
s
s
s s
+ + +
1 2 3
En trminos de Km veramos que K
m1
> K
m2
> K
m3

Existe tambin cooperatividad negativa, cuando la fijacin de
una molcula de substrato dificulta la fijacin del siguiente.
El comportamiento cooperativo implica:



1. Que hay ms de un sitio de fijacin de substrato
por molcula de enzima (estr.cuaternaria)

2. Que hay interacciones entre los sitios de fijacin
Un sistema alostrico clsico es la Hemoglobina:
1. La fijacin de su substrato, O
2
, es de tipo sigmoide

2. La fijacin del substrato puede inhibirse por efectores
(H
+
, CO
2
, 2,3-BPG) que no actan sobre el Centro Ac-
tivo (grupo hemo)

3. Las subunidades, por separado, presentan cintica
michaeliana en la fijacin de O
2

Cinticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina
s
0 2 4 6 8 10 12
Y
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Mioglobina
Hemoglobina
Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
pH 7.4
pH 7.0
pH 6.6
(Efecto Bohr)
Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
0
0.1 mM
1 mM
Inhibidores y activadores
alostricos
s
0 2 4 6 8 10 12
Y
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
(+ Inhibidor)
(+ Activador)
(sin efectores)
V
+

V
0

V
-

Los efectores alostricos operan sobre el grado de
cooperatividad del sistema:
- Los inhibidores alostricos aumentan el grado de
cooperatividad

- Los activadores alostricos disminuyen el grado de
cooperatividad; a concentraciones elevadas de activador,
la cintica pasa a ser michaeliana, y deja de ser sigmoide.
y
Ks
Ks
h
h
_

1
Ecuacin de Hill
Obsrvese que para h=1, esta ecuacin se reduce a una forma
normalizada de la ecuacin de Michaelis-Menten:
h > 1, cooperatividad positiva
h = 1, no hay cooperatividad
h < 1, cooperatividad negativa
y
v
V
k x
k e
s
K s
K
s
K
s
K s
K s
mx m
m
m
a
a
_

2
2 0
1
1
1
1
s
s s s s s
s
s s
s
L
i
i i i
i i
i
i i
i
Forma R
Forma T
Modelo MWC


y
L
n
n
_




a a
a
1
1
1
a: Concentracin normalizada de substrato, s/K
m


L: Constante alostrica: a mayor valor de L, mayor
grado de cooperatividad (positiva)

n: Nmero de sitios de fijacin de substrato