MEDICION DEL CRECIMIENTO

BACTERIANO
MTODO APLICACIONES
Cuenta directa al microscopio
o determinacin del No. de cels.
Recuentos de bacterias en leche y vacunas
Cuenta viable Recuentos de bacterias en leche, agua,
alimentos, suelo, cultivos, entre otros.
Determinacin de la densidad celular
(turbidimetra)
Ensayos microbiolgicos, estimacin del
desarrollo bacteriano en caldo o
suspensiones acuosas.
Determinacin de la masa microbiana
(peso hmedo y seco)
Medicin del desarrollo bacteriano de
suspensiones espesas de cultivos, a travs
de centrifugacin, lavado, secado y peso.
Cuantificacin de algunos componentes
celulares especficos.
Determinar protenas o nitrgeno
mediante anlisis qumicos
Produccin de algunos metabolitos Se refiere al trabajo de aislamiento y del
metabolismo celular
Cuantificacin del consumo de algunos
componentes del medio de cultivo
Ensayos microbiolgicos
RESUMEN DE LOS METODOS DE MEDICION DEL CRECIMIENTO
BACTERIANO
MEDICION DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

Existen muchas formas de cuantificar el crecimiento bacteriano para determinar
la velocidad del crecimiento y el tiempo de generacin.


Mtodos directos


1) Cuenta directa al microscopio
2) Cuenta viable

- Placa extendida
- Placa vertida
- Recuento de microorganismos por diluciones seriadas


3) Determinacin de la densidad celular (turbiedad)


4) Determinacin de la masa microbiana (peso hmedo y seco)

METODOS TRADICIONALES
DE RECUENTO DIRECTO DE MICROBIOS AL MICROSCOPIO

Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy
pequeos de suspensiones de bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales
denominados cmaras de Petroff-Hausser. Para que la medida sea correcta es
necesario que la densidad de clulas sea del orden de 10
5
por ml.
Recuento de viables: consiste en sembrar un volumen determinado de cultivo o
muestra sobre el medio de cultivo slido adecuado para estimar el nmero de
viables contando el nmero de colonias que se forman puesto que cada una de
estas deriva de una clula aislada. Para que la medida sea correcta desde el punto
de vista estadstico, es necesario contar de 30 a ms de 300 UFC.
Medida del nmero de partculas usando contadores electrnicos de
partculas. Estos sistemas no nos indican si las partculas corresponden a
clulas vivas o muertas; pero nos pueden dar una idea del tamao de las
partculas.

TABLAS DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

No. de tubos con
turbidez
inoculados a partir
de tres diluciones
sucesivas


NMP
No. de tubos con
turbidez
inoculados a partir
de tres diluciones
sucesivas


NMP
0 1 0 0.18 5 0 0 2.3
1 0 0 0.20 5 0 1 3.1
1 1 0 0.40 5 1 0 3.3
2 0 0 0.45 5 1 1 4.6
2 0 1 0.68 5 2 0 4.9
2 1 0 0.68 5 2 1 7.0
2 2 0 0.93 5 2 2 9.5
3 0 0 0.78 5 3 0 7.9
3 0 1 1.1 5 3 1 11.0
3 1 0 1.1 5 3 2 14.0
3 2 0 1.4 5 4 0 13.0
4 0 0 1.3 5 4 1 17.0
4 0 1 1.7 5 4 2 22-0
4 1 0 1.7 5 4 3 28.0
4 1 1 2.1 5 5 0 24.0
4 2 0 2.2 5 5 1 35.0
4 2 1 2.6 5 5 2 54.0
4 3 0 2.7 5 5 3 92.0
5 5 4 160.0
5 5 5 280.0

NOTA: Valores del nmero ms probable (NMP) de clulas en la primera dilucin
de tres tubos sucesivos de diluciones seriadas, usadas para inocular cinco tubos
(vase figura 8.10) Esta tabla puede utilizarse para cualquier microorganismo.
El nmero de tubos con turbidez de tres diluciones sucesivas es de 5, 3, 1, En
esta tabla se observa que el nmero ms probable de clulas viables en la
muestra (1 ml) a partir de la primera dilucin (1:1 000) que existe en cada
tubo es de 11.0. Por lo tanto, el nmero de clulas viables en la muestra original
es de 11 000 por mililitros (1 000 x 11.0) = 11 000.




RECUENTO DIRECTO EMPLEANDO FILTROS DE MEMBRANAS
(MUESTRA DE AGUA, alimento y suelo)
.Medida de la masa de clulas: el sistema se basa en que las clulas en suspensin
dispersan la luz causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en
suspensin y, por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el parmetro
de medida ms fcil de usar en los cultivos de laboratorio. La densidad de clulas
debe ser del orden de 10
5
por ml.
Se emplea la espectrofotometra para medir la masa celular, Se basa en la dispersin de la luz
por partes de las clulas microbianas. Cuando la concentracin de clulas alcanza unos 10
millones de clulas (10
7
) por mililitro el medio aparece ligeramente turbio. Un aumento de la
concentracin hay mayor turbidez y se transmite menos luz a travs del medio.
Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN,
protenas, peptidoglicano, otros, por unidad de volumen de cultivo.
Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran
producen una disminucin del potencial redox del medio en que se
encuentran como consecuencia del consumo de oxgeno (utilizacin de
colorantes sensibles a oxidacin-reduccin tales como el azul de metileno).
1. CUANTIFICACIN DE ALGUNOS COMPONENTES
CELULARES COMO:
Nitrgeno total o protenas
- Se cultiva la bacteria
- Se lavan para que queden libre de medio de cultivo
- Se prctica un anlisis qumico para determinar la
cantidad de protenas o nitrgeno

2. CUANTIFICACIN DEL CONSUMO ALGUNOS
COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO COMO:
- Fermentacin de carbohidratos
- Condiciones de oxgeno
- Nitritos a nitratos

3. PRODUCCIN DE ALGN METABOLITO COMO:
- cidos
- Alcoholes
- CO
2

- c. Lctico
- c. sulfihdrico
Caractersticas de cultivo en medio
lquido
INOCULACIN
Aislamiento por extensin con varilla
Agregar 15 ml de agar fundido y mantenido a 45C
AISLAMIENTO POR VACIADO EN PLACA
10
-1
10
-2
10
-3
10
-4
10
-5
10
-6
10
-7
10
-8
10
-9
10
-10
AISLAMIENTO POR ESTRA
TUBO RODADO
AISLAMIENTO DE BACTERIAS
PRODUCTORAS DE ANTIBITICOS
Caractersticas de cultivo en medio
slido (morfologa colonial)




- Tamao

- Forma

- Color

- Elevacin

- Bordes

- Aspecto

- Consistencia

Morfologa colonial
Cultivo de anaerobios