INMUNODIAGNOSTICO DEL VIRUS

DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
VIH

Lic TM William Edwin Alvarado Juarez

VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA
HUMANA
El VIH es un virus de la familia de los
lentivirus. Virus ARN.
Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH2.
Los VIH-1 se clasifican en tres grupos
distintos (M,N,O), el ms importante es
el grupo M que se subdivide en 9
subtipos de la A a la K. En Amrica del
Norte, Central y Sudamrica predomina
el grupo B.

Lentivirus de la familia Retroviridae

PROTENA
P24 DEL
CORE
PROTEINA DE
CUBIERTA
EXTERNA GP120

TRANSCRIPTASA
INVERSA

RNA
GENMICO DE
8500
NUCLETIDOS

MEMBRANA
LIPDICA

Ciclo Vital del VIH

Rpida replicacin
10 billones de
viriones diarios
Alta tasa de mutacin
1 sustitucin del
genoma por ciclo
Recombinacin
7-30 recambios por
ciclos

Estimacion de la Vida Media de Compartimentos

Celulares y Extracelulares del VIH
Viriones libres
Linfocitos CD4 infectados
CD4 en reposo sin DNA del VIH integrado
Viriones en las celulas dendriticas foliculares

Macrofagos Infectados

?
30
Finzi. Cell 1998;93:665.

60

90

120

CD4 en reposo con

Provirus integrado
provirus

?
Vida Media, dias

PRUEBAS DE LABORATORIO
Mtodos Directos:
Evidencian/cuantifican la
presencia de antgenos
en la muestra.

PCR cualitativa,
PCR cuantificada
cultivo y aislamiento viral,
antigenemia P-24)

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

PRUEBAS DE LABORATORIO
Mtodos Indirectos:
Evidencian la presencia o
ausencia de anticuerpos
totales en la muestra.
Son los ms utilizados.
Pruebas rpidas
ELISA

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

Diagnstico de VIH
Se usan dos niveles de prueba
serolgicas:
Pruebas de Tamizaje:
Ensayos inmunoenzimticos
Test de aglutinacin
Test de deteccin rpida

Tienen alta sensibilidad.

La posibilidad de tener falsos negativos es bajo.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

Pruebas rpidas disponibles en el mercado

Multispot
HIV-1/HIV-2
Uni-Gold
Recombigen
OraQuick
Advance

Reveal
G2

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

10

PRUEBAS DE ELISA:
Primera Generacin: Los antgenos
utilizados provienen del lisado viral de un
cultivo
Segunda Generacin: Los antgenos
corresponden a protenas recombinantes
o Pptidos sintticos.
Tercera Generacin: Pptidos
recombinantes sintticos de VIH-1, 2, 0.

Cuarta Generacin: Se adicion el p24.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

11

 Pruebas de confirmacin: Tienen alta

especificidad

Western Blot
Inmunofluorescencia Indirecta.
Radioinmunoprecipitacin
LIA

PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA

POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO
POSITIVO.
Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

12

Western Blot
Prueba de confirmacin
Principio: Ensayo
inmunoenzimtico
Detecta anticuerpos contra
protenas especficas del
VIH 1
Interpretacin: visual
Muestras: suero y plasma
Volumen: 20 l
Tiempo: 3.5 hrs
Sensibilidad: 100%
Especificidad: 100%
Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

13

Nomenclatura de las bandas en Western Blot

Gen Protena
env Precursora de la
envoltura
Glucoprotena externa
Glucoproteina
transmembrana

Denominacin CDC
gp160
gp160

gag Precursora del core

Precursora del core
Protena principal
Protena de la matriz

p55
p40
p24
p17

pol Transcriptasa inversa

Transcriptasa inversa
Endonucleasa

p66
p51
p32

gp120
gp41

OMS
Al menos 2
bandas

gp120

p24

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

14

Ventajas de las pruebas rpidas

de VIH
Versatilidad y existencia de diferentes principios
inmunolgicos as como en las muestras biolgicas que se
pueden utilizar.
No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas.
La realizacin y la interpretacin de los resultados obtenidos
es fcil.
Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y
cuando se combinan los resultados definitivos los podemos
obtener en menos de una hora
Personal a nivel tcnico las puede realizar con la debida
capacitacin y supervisin de un profesional con experiencia.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

15

Fortalezas de las pruebas rpidas

de VIH
Algunas se pueden almacenar a temperatura
ambiente.
Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo
comparado con el ELISA.
Los resultados obtenidos son igual de
confiables que los resultados del ELISA y con
menos limitaciones tcnicas.
Algunas requieren poca inversin econmica.
Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

16

Debilidades de las pruebas rpidas

de VIH
El costo comparado de estas pruebas con el
ELISA puede a veces ser mayor.
Presencia de falsos positivos por lo que
necesitan confirmacin de los resultados
obtenidos.
El periodo de ventana es mas largo por lo que
podemos tener resultados falso negativo
comparado con el ELISA de cuarta generacin.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

17

Causas de resultado falsopositivo:

Relativas al suero:
Relativo a la calidad y manipulacin de la muestra:
Calidad, extraccin, almacenamiento y contaminacin de la misma,
estabilidad y calidad de los reactivos.

Relativas a la presencia de auto anticuerpos:

Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).

Relativas a otras condiciones:

Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades
hemato -oncolgicas, alcoholismo, embarazo, etc.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

18

Causas de resultado falsonegativo:

Periodo de ventana
Tratamiento con inmunosupresores
Procesos malignos
Trasplante de mdula sea
Disfunciones de las Clulas B
Factores reumatoides
Prdida de estabilidad de los reactivos
Reactivos que detectan principalmente p24
Pobre respuesta inmune

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

19

Seleccin de pruebas rpidas de

VIH apropiadas
Es necesario tomar en cuenta tres factores:
El objetivo de hacer la prueba.
Sensibilidad y especificidad de la prueba.
Prevalencia de la infeccin de VIH en la poblacin
que ser tamizada con las pruebas.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

20

Eleccin de Pruebas rpidas de

VIH
Los tres objetivos para hacer un tamizaje de
anticuerpos contra VIH son:
Tamizaje de donadores de sangre u rganos.
Para fines epidemiolgicos
Diagnstico de personas infectadas.

Laboratorio de enfermedades infecciosas Hospital Roosevelt

21