UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS

INGENIERA BIOQUMICA
MDULO DE OPERACIONES UNITARIAS II
EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE ADN POR CENTRIFUGACIN
Docente: Ing. Pablo Amancha
Integrantes:
Calero Estefana
Chicaiza Pedro
Daz lvaro
Guevara Cristina
Sexto BQ

EXTRACCIN Y PURIFICACIN
DE ADN POR CENTRIFUGACIN

OBJETIVOS

Extraer ADN de una muestra de sangre

utilizando el mtodo de purificacin
centrifugacin.
Objetivos Especficos.
Analizar los contaminantes que presenta
una muestra de ADN.
Identificar la pureza del ADN mediante
la utilizacin de un espectrofotmetro
de luz.

MARCO
REFERENCIAL

Inicia con la
Extraccin de ADN

Datos moleculares

Diversidad Gentica

Extraccin de ADN

Mayor cantidad de ADN

Libre de protenas, lpidos e inhibidores de enzimas.

Etapas en la extraccin de ADN.

Lisis celular. Los cidos nucleicos se liberan.

o Tampn de extraccin. EDTA, Tris-HCl y
CTAB
o El detergente (CTAB)-lisis.
o CTAB captura los lpidos.
o Protenas entran en contacto con M.C
Separacin de protenas y lpidos
Se separan por centrifugacin.
Grupos fosfato. Fase acuosa.
Protenas (Desnaturaliza) y Lpidos . Solventes
orgnicos(Cloroformo).

 Purificacin y Precipitacin del

ADN
o Son eliminados los lpidos y
las protenas
o Adicin de etanol y sol de
iones de sodio o
amonio(une grupos
fosfato).
o ADN insoluble
o Centrifugacin(1800rpm).
ADN- Fondo del tubo.
o Etanol (100%)2,5ml .
Lavado (70%). Eliminacin
por evaporacin.
Redisolucin del ADN o
Hidratacin.
Cuantificacin de ADN.
o Espectrmetro.

Aplicaciones del ADN en diferentes campos.

Ingeniera gentica.

Medicina.

Bioinformtica

La nanotecnologa de ADN.

FUNDAMENTOS
TERICOS

 Comnmente conocida como "huella gentica

(Prueba de ADN).
Herramienta muy utilizada.
Se basa en la atraccin de los iones salinos hacia las
cargas negativas del ADN.
Se obtienen cidos nucleicos purificados a partir de
diferentes fuentes mediante la reaccin de PCR.
Es importante obtener y purificar la mayor cantidad de
ADN obtenido, libre de otros compuestos. (ADN de alta
calidad).
Pruebas de ADN para:

Estudios de filiacin

COSTOS DEL
EXAMEN DE
ADN

 Fiscala General del Estado en Quito:

No tiene costo
Cruz Roja Ecuatoriana:
$480 (casos privados)
$340 (casos judiciales)
Institucin privada:
$400 aproximadamente

COMPARACION
CON OTROS
TIEMPOS

 En
1928
Frederick
Griffith,
investigando
una
enfermedad infecciosa mortal, la neumona, estudi las
diferencias entre una cepa de la bacteriaStreptococcus
pneumoniaeque produca la enfermedad y otra que no
la causaba.
Griffith inyect las diferentes cepas de la bacteria en
ratones. La cepa S mataba a los ratones mientras que la
cepa R no lo haca.

 En los aos 40 Oswald Avery en compaia de Colin

McLeod y Maclin McCarty continuaron con el
experimento
de
Griffith,despusde
haber
realizado las mismas pruebas observaron que el
responsable de la transformacin de las sepas
cuando seconvertanen letales alser unidas era
por el ADN y no por unaprotenacomo secreaen
ese entonces, claro est que en esapocaa pesar
de la evidencia que tena Avery no era lo
suficientemente concluyente como para dejar de
lado la idea de que el factor responsable era
unaprotena.

DIMENSIONAM
IENTO

 Esta tcnica por lo general es muy fcil de llevarla a

cabo especialmente en los laboratorios de
investigacin estudiantil ya que solo se requiere de
alrededor de 4 o 5 horas para extraer el ADN y el
tiempo vara de acuerdo a la estructura celular. Las
personas encargadas de llevar a cabo esta tcnica
de extraccin suelen trabajar con un para evitar
contaminacin dentro de este proceso y dentro de
un laboratorio en completa asepsia con materiales
que no tienen gran costo con excepcin de la
centrifuga; adems se usan bases para romper la
pared celular de clulas vegetales y alcohol para
precipitar el ADN

ASPECTOS
IMPORTANTES

Aspectos Importantes
La extraccin de ADN es un procedimiento importante
de la biologa molecular.
En la biologa molecular se estudia la bases moleculares
de la vida; es decir, relaciona las estructuras de las
biomolculas (ADN-ARN) con las funciones especficas
que desempean en la clula y en el organismo.

Equipos importantes
Entre las mquinas utilizadas para extraer el ADN estn:
"Batidoras", las cuales rompen las clulas para acceder
al ADN,
"Frasco de gel", el cual separa las secuencias de ADN en
un gel usando una carga elctrica, y
Centrifugacin, la cual hace girar una solucin de ADN y
luego lo precipita (extrayndolo) utilizando sales.

VENTAJAS

Ventajas.
La centrifugacin selectiva constituye un mtodo de
purificacin eficaz.
Suele asociarse a otros mtodos, como la cromatografa
de columna centrifugada.
Algunos procedimientos combinan la adsorcin selectiva
en matriz cromatogrfica y la elucin por
centrifugacin para purificar de forma selectiva un tipo
de cido nucleico

En su aplicacin
Identificacin de criminales
Una razn por la cual la extraccin de ADN es
importante es porque proporciona el anlisis del ADN si
hay algn caso de investigacin criminal que lo
requiera. La mayora de las veces, un sospechoso es
declarado culpable slo por el resultado que se obtiene
del anlisis de muestras de ADN, especialmente cuando
no se cuenta con otras evidencias.

Comparacin
del
tiempo
de
procesamiento,
concentracin, rendimiento y pureza entre las
muestras de ADN extradas por los diferentes
mtodos.
Mtodo de
extraccin

Tiemp Material Concentracin

o
de partida
de ADN
(mg)a
(g/L)b

Mtodo
30 min
calentamiento
Mtodo del
19 h
fenol-cloroformo
Mtodo del
4h
acetato de
potasio
Mtodo del
4h
acetato de
potasio
modificado
Mtodo del CTAB
4h

1,88 (0,34)

0,5785 (0,111)

Rendimiento (g
ADN/mg de
material de
partida)c
15,81 (4,15)

Pureza

1,89 (0,36)

0,1305 (0,039)

3,49 (0,92)

1,96

1,85 (0,20)

0,1414 (0,027)

3,81 (0,77)

1,93

1,86 (0,32)

0,2675 (0,028)

7,38 (1,52)

1,94

1,85 (0,38)

0,1650 (0,025)

4,67 (1,48)

1,90

0,79

CONCLUSIONES

 La Extraccin de ADN es factible en una muestra de sangre utilizando el

mtodo de purificacin centrifugacin el cual es muy eficaz al purificar
de forma selectiva el tipo de cido nucleico.
Se analiz que los contaminantes presentes en una muestra de ADN son
las protenas, lpidos y ARN.
Se identific la pureza del ADN mediante la estimacin de la
concentracin de del ADN utilizando un espectrofotmetro de luz
ultravioleta a una longitud de onda de 260 y 280 nm. As al establecer
una relacin entre las dos concentracin 260nm (ADN)/280nm
(Protenas) la pureza del ADN fue de 1,8.

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