Metabolismo y Fisiologa

Biologa Celular

Nutrientes
1- Fuente de energa

luz
qumica

2- Macronutrientes
H
K
O
Mg
C
Na
N
95%
Ca
S
Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
Vitaminas
Purinas y pirimidinas
Aminocidos

Macronutrientes

Tipos nutricionales

Fuente de
energa

Fuente de
C

Ejemplos

Cianobacterias,
Fotoauttrofos
Luz
CO2
bacterias
prpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Fotohetertrofos
Luz
orgnicos
bacterias
prpuras y
verdes
Compuestos
Algunas
Quimioauttrofos o inorgnicos CO2
Eubacterias y
littrofos
ej.: H2, NH3,
muchas Archaea
NO2-, H2S
La mayora
Quimiohetertrofos Compuestos Compuestos Eubacterias,
o hetertrofos
orgnicos
orgnicos
algunas Archaea

Condiciones para el crecimiento microbiano

Medios de cultivo

agua
fuente de energa

Crecimiento

Nutrientes

fuentes de C, N, otros
elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento

temperatura

Condiciones
de cultivo

pH
luz
aireacin
actividad de agua
potencial redox

Factores de crecimiento
Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir
pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que
no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas

ADN, ARN

* aminocidos esenciales

sntesis proteica

* vitaminas

coenzimas

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin
mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro
Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra
cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se
realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio slido
Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se
desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de
estras.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica
* lquidos
* slidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-slidos

Segn su composicin
* definidos o sintticos: composicin qumica conocida
* no definidos o complejos: composicin qumica no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, de suelo, sangre

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los
nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentracin fisiolgica
* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar
los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los
nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composicin permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentracin fisiolgica
* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar
los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Cultivo en medio lquido

Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento
se puede manifestar por enturbiamiento, por formacin de velo o
pelcula, o por sedimento.
Cultivo en medio slido
Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o
la punta suavemente sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior,
cuidando de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el
centro del agar. Tambin se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estras o
baado) o incorporada (mezclando el inculo con el agar
semifundido)

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin
mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro
Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra
cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se
realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio slido
Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se
desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de
estras.

Cultivo puro
Las colonias se describen por examen macroscpico en
funcin del tamao, la forma, el borde, la elevacin, la
transparencia y el color. Esto resulta a veces muy til en la
identificacin
A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un
examen microscpico que debe mostrar clulas
razonablemente semejantes respecto al Gram y a la
morfologa.
Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no
selectivo por el mtodo de estras. Esto se conoce como
reaislamiento.

Divisin celular: fisin binaria

Gemacin,
ej.
levaduras

Crecimiento de un microorganismo en medio

de cultivo lquido

1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria

Crecimiento en un volumen fijo de medio o

cultivo cerrado (batch)
Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento
Fase lag - las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen
Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0
cuando:
vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento
Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de
divisin celular

Factores del ambiente

fsicos: temperatura, gases, pH, presin osmtica
qumicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
biolgicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetacin, afectan las
actividades microbianas
Los distintos factores actan simultneamente y resulta
difcil el anlisis integrado de los efectos.

 Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15oC

organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados

Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos

- rango: 0-35C, ptimo 20-30oC
Pseudomonas - crecen en el refrigerador

Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C

la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)

Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65oC

membrana contiene alto % de cidos grasos saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje

Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90oC

Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

Oxgeno
Clasificacin de los microorganismos segn
el efecto del oxgeno:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21% o ms)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaeroflicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosfrico (5-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxgeno, pero el desarrollo es mejor con
oxgeno.
Ej. Levaduras, E. coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
obligados: no toleran el oxgeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium

Cultivos en anaerobiosis
tubos con medio de cultivo llenos por completo.
medios con sustancias que reaccionan con el oxgeno y lo excluyen.
dispositivo especial (cmara anaerbica)
cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada,
centeno)

Otros gases
N2

componente principal de de la atmsfera (78%). Gas inerte: no es usado

por la mayora de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO txico para la mayora de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4

liberado a la atmsfera por microorganismos metanognicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO 2 por bacterias metanotrficas

CO2

importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintticos o quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmsfericos, para ciertas sntesis

H2 poco usado, txico para la mayora de los microorganismos, brinda

energa a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP

pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solucin, medida por el log 1/(H+)
Clasificacin de los microorganismos segn
su pH ptimo
Neutrfilo:

pH ptimo 7 - Ej.: bacterias

patgenas humanas.

Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de

las archeobacterias y hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos

Medios de cultivo
MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

Agar sangre
S. epidermidis en agar sangre

Agar sangre
HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

HEMLISIS COMPLETA

HEMLISIS PARCIAL

Pseudomonas aeruginosa
Siembra en medio OF
Metabolismo oxidativo

Prueba de la catalasa