GUA DE VALIDACIN DE

MTODOS ANALTICOS
POR EL COLEGIO NACIONAL DE
QUMICOS FARMACUTICOS
BILOGOS DE MXICO, A.C.

Por qu hay que validar?

Porque es necesario demostrar que el mtodo funciona para lo
que fue diseado
y para qu?
para tener evidencia documentada de que esa demostracin se
hizo y se hizo bien

OBJETIVO DE LA VALIDACIN

ESTADO REGULATORIO
Farmacopeicos
No Farmacopeicos

APLICACIN
Producto a granel
Producto terminado
Materia prima
Impurezas (Indicadores de estabilidad)

COMO SE CLASIFICAN LOS

MTODOS ANALTICOS

NATURALEZA DE LA RESPUESTA
Fisico- Qumicos
Biolgicos

COMO SE CLASIFICAN LOS

MTODOS ANALTICOS

PROPOSITO
Cuantificacin
Prueba Lmite
Prueba Identificacin

NATURALEZA DEL SISTEMA DE MEDICIN

El instrumento permite medir una seal de ruido

(Cromatogrfo)
El instrumento NO permite medir una seal de ruido
(Bureta)

COMO SE CLASIFICAN LOS

MTODOS ANALTICOS

Y QUE PARMETROS DE
DESEMPEO DEBO REALIZAR?

Para demostrar que el sistema de medicin funciona y funciona bien

Es decir que se cumplan los parmetros cromatogrficos establecido
en el desarrollo, tales como
Resolucin
Coleo

Factor de Capacidad
Etc.

POR QU DEBO HACER

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA?

Se inyecta 5 veces la solucin que se establezca para

adecubilidad

Y como preparo la muestra?

Puede ser una solucin de estndar o una solucin que se
prepara solo para determinar la adecubilidad, eso depender
de cada mtodo

Y COMO VOY A REALIZAR LA

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA?

Se debern obtener resultados de respuesta y de los

parmetros cromatogrficos establecidos y se vera que tan
diferentes son
Y como?
Calculando cuanta variacin hay entre ellas (Coeficiente de
variacin)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
COEFICIENTE DE VARIACIN
Criterios de aceptacin
CV> 2.0% para la respuesta analtica
y los parmetros cromatograficos segn lo
que se haya establecido en el desarrollo

Y COMO SE SI CUMPLE CON LA

ADECUABILIDAD?

Para demostrar que la respuesta es directamente proporcional a la

concentracin
Es decir que mientras mas activo tenga la respuesta ser mayor y
mientras menos tenga menor ser la respuesta y cuando no haya
activo no habr respuesta

PORQUE DEBO HACER LINEALIDAD

DEL SISTEMA?

Se eligen 5 diferentes concentraciones (niveles)y se preparan

3 muestras de cada nivel Pero el nivel central debe ser el
100%
Y como se eligen los niveles?

Y COMO VOY A REALIZAR LA

LINEALIDAD DEL SISTEMA?

Y como preparo las

muestras?

Se deben preparar solo

con el analito y puede
ser con pesadas
independientes o 3
soluciones stock y de
cada una se hace una
curva de 5 niveles

Se debern obtener resultados de respuesta, que se relacionaran con los valores

de concentracin a los cuales se preparo cada muestra
Y como?

Con una regresin lineal CONCENTRACION VS RESPUESTA

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
b0 b1 r2, IC (B1)
Criterios de aceptacin
r2 > 0.98
IC (B1), no debe incluir el cero

Y COMO SE SI ES LINEAL?

Mediante la
estimacin
por mnimos
cuadrados

Para demostrar que la respuesta de una misma concentracin se puede

reproducir
Es decir que mientras sea la misma cantidad de activo la respuesta debe ser
muy muy parecida

PORQUE DEBO HACER PRECISIN

DEL SISTEMA DEL SISTEMA

Se preparan 6 diferentes muestras al nivel central 100%

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar solo con el analito y puede ser con pesadas
independientes o de alcuotas una misma solucin stock
Se puede utilizar alguna de las soluciones stock preparada para linealidad
del sistema

Y COMO VOY A REALIZAR LA

PRECISIN DEL SISTEMA?

Se debern obtener resultados de respuesta, que se relacionaran con los

valores de concentracin a los cuales se prepararon las muestras
Y como?

Calculando cuanta variacin hay entre ellas (Coeficiente de variacin)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
COEFICIENTE DE VARIACIN
Criterios de aceptacin
CV > 1.5%

Y COMO SE SI ES PRECISO?

Para demostrar que la respuesta es directamente proporcional a la

concentracin SI PERO ahora tambin debo demostrar que todos los
excipientes de la formula y el procesamiento de la muesta no interfieren en la
proporcionalidad
Es decir se va a retar a la linealidad del mtodo con el producto y la
preparacin

PORQUE DEBO HACER LINEALIDAD

DEL MTODO

Se eligen 3 diferentes concentraciones (niveles) y se preparan 3 muestras de

cada nivel Pero el nivel central debe ser el 100%
Y como se eligen los niveles?
Se utilizan los niveles extremos y el central establecidos en linealidad del
sistema
Y como preparo las muestras?
Se deben preparar con pesadas del analito y del placebo
La cantidad utilizada del placebo ser la correspondiente al 100% para todas
las muestras

Y COMO VOY A REALIZAR LA

LINEALIDAD DEL MTODO?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado y se relacionara con el porciento adicionado
Y como?
Con una regresin lineal

CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
^
b0 b1 r2, IC (B1), IC (B0), y, CVY/X, S, CV, IC ()
Criterios de aceptacin
r2 > 0.98
IC (B1), debe incluir la unidad
IC (B0), debe incluir cero
CVY/X 2%
IC () debe incluir el 100% o el promedio aritmtico del porciento
de recobro se incluya en el intervalo de 98% al 102%
CV del recobro no mayor al 2%
Trazar la grafica de la regresin

Y COMO SE SI ES LINEAL EL
MTODO?

Para demostrar que la respuesta de una misma concentracin se puede

reproducir es exacta
Es decir que mientras sea la misma cantidad de activo la respuesta debe ser
muy muy parecida y cercana al valor verdadero

POR QUE DEBO HACER PRECISIN Y

EXACTITUD DEL MTODO?

Se preparan 6 diferentes muestras al nivel central 100%

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar con pesadas independientes del analito y del placebo

Y COMO VOY A REALIZAR LA PRECISIN

Y EXACTITUD DEL MTODO?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado y se relacionaran entre si para saber que tan diferentes
son
Y como?
Calculando cuanta variacin hay entre ellas (Coeficiente de variacin e
intervalos de confianza)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
y, S, CV, IC ()
^

Criterios de aceptacin
CV del recobro no mayor al 2%
IC () debe incluir el 100% o el promedio aritmtico del porciento
de recobro se incluya en el intervalo de 98% al 102%

Y COMO SE SI ES PRECISO Y
EXACTO EL MTODO?

Para demostrar que el mtodos es capaz de reproducir la

respuesta de a una misma concentracin en das y con analistas
diferentes
Es decir que se obtenga el mismo resultado sin importar quien y
ni cuando realice la determinacin

POR QUE DEBO HACER PRECISIN

INTERMEDIA DEL MTODO?

Se preparan 3 diferentes muestras al nivel central 100% por cada analista

Y en 2 das diferentes, es decir 6 muestras totales de los 2 dias

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar con muestra de producto terminado o con pesadas

independientes del analito y del placebo

Y COMO VOY A REALIZAR LA

PRECISIN INTERMEDIA DEL MTODO?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado y se relacionaran entre si utilizando como factores de
diferencia el analista y el da para saber que tan diferentes son
Y como?
Calculando cuanta variacin hay entre analistas y entre das (Coeficiente de
variacin, intervalos de confianza)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
^
y, S, CV
Criterios de aceptacin
CV del recobro no mayor al 2%

Y COMO SE SI ES PRECISO EL
MTODO?

Para demostrar que la muestra y el estndar son estables a

ciertas condiciones en un lapso de tiempo establecido y son
capaces de reproducir una respuesta similar a una muestra de
reciente preparacin
Es decir que se la muestra cuantifique la misma cantidad si se
analiza al momento de preparacin o algunos das despus

POR QUE DEBO HACER ESTABILIDAD

ANALITICA DE LA MUESTRA Y DEL
ESTANDAR PROCESADOS?

Se preparan 3 diferentes muestras al nivel central 100% y 3 estandares

Se cuantifican en das diferentes(0, 24, 48, 72 horas) con estndares de reciente

preparacin, y son almacenadas en ciertas condiciones establecidas

Los estndares preparados para estabilidad se cuantifican como si fueran

muestras

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar con muestra de producto terminado o con pesadas

independientes del analito y del placebo, para el caso de los estndares tambin
se hace por pesadas independientes

Y COMO VOY A REALIZAR ESTABILIDAD

ANALITICA DE LA MUESTRA Y DEL
ESTANDAR PROCESADOS?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado y se relacionaran entre si utilizando como factores el
tiempo de almacenamiento para saber que tan diferentes son
Y como?
Calculando cuanta variacin hay entre cada dia (Diferencia absoluta)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
^ ^
y0 y1, |di|
Criterios de aceptacin
|di| 2%

Y COMO SE SI ES ESTABLE LA
MUESTRA Y EL ESTNDAR?

Para demostrar que el mtodo proporciona resultados confiables a pesar

de realizarse con insumos diferentes o con cambios intencionales o no
en las condiciones establecidas
Es decir que la muestra cuantifique la misma cantidad sin importar
diferencias de preparacin o materiales
Diferencia entre tolerancia y robustez
Robustez: factores internos del mtodo analtico o de la
naturaleza del mtodo analtico. (Cambio de pH, proporcin de
fase mvil, etc.)
Tolerancia: Factores externos del mtodo analtico, condiciones
no controlables del analista. (Cambio de equipo, columna HPLC,
etc.)

PARA QUE DEBO HACER LA

TOLERANCIA Y ROBUSTEZ?

Se preparan 3 diferentes muestras al nivel central 100%

Se determinan los factores a modificar, la eleccin de los factores se har de

acuerdo a la probabilidad de ocurrencia, es decir que tan factible es que durante
la realizacin del anlisis de rutina ocurra ese cambio

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar con muestra de producto terminado o con pesadas

independientes del analito y del placebo.

Y COMO VOY A REALIZAR LA

TOLERANCIA Y ROBUSTEZ?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado y se relacionaran entre si para saber que tan diferentes
son
Y como?
Calculando cuanta variacin hay segn el cambio realizado (Diferencia absoluta)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
^ ^
y0 y1, |di|
Criterios de aceptacin
|di| 2%

Y COMO QUE EL METODO ANALITICO

ES ROBUSTO Y TOLERANTE ?

Para conocer y demostrar cual es la repuesta mnima que el

mtodo es capaz de reconocer sin importar si se puede saber a
que concentracin corresponde la respuesta
Es decir cuanto es lo menos que se detecta de respuesta en el
equipo

PARA QUE DEBO HACER EL LMITE

DE DETECCIN?

Para conocer y demostrar cual es la repuesta mnima que el

mtodo es capaz de cuantificar
Es decir cuanta es la cantidad mnima que se puede cuantificar
con exactitud

PARA QUE DEBO HACER EL LMITE

DE CUANTIFICACIN?

Caso 1. Se preparan 6 diferentes muestras al nivel inferior del limite de

especificacin.

Caso 2. Se prepara una curva a tres niveles diferentes por triplicado.

Y como preparo las muestras?

Se deben preparar con muestra de producto terminado o con pesadas

independientes del analito y del placebo.

Y COMO VOY A REALIZAR EL LMITE

DE CUANTIFICACIN?

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales se calculara el

porciento recuperado.
Y como?
Evaluando el porciento recuperado se realizara un tratamiento estadisco
diferente para el Caso 1, para el Caso 2 aplicar la siguiente formula:
LC=(3.3 x Sb0)/b1

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
Caso 1: , IC(), CVX/Y
Caso 2: , CVX/Y, b1, r2, Sbo, IC(1)

Criterios de aceptacin
Caso 1: IC() se debe encontrar del 95.0 -105.0 %
CVX/Y = No mayor del 10.0%
Caso 2: CVX/Y = No mayor del 10.0%
r2 = 0.98
IC(1) = No debe incluir el cero

Y COMO SE CUAL ES MI LIMITE DE

DETECCION?

Para demostrar que cualquier respuesta que aparezca no se

confunda e interfiera en la cuantificacin del analito de inters
Es decir que no exista duda de que se esta cuantificando

PARA QUE DEBO HACER

ESPECIFICIDAD?

Y como preparo las muestras?

Se preparan muestras al nivel central 100%

Se preparan las posibles combinaciones entre condiciones de degradacin,

adicin de analito y adicin de placebo a una proporcin del 120 % como lo indica
la tabla que sigue:

Y COMO VOY A REALIZAR LA

ESPECIFICIDAD?

Degradacin
Hidrolisis Acida
Hidrolisis
Bsica
Oxidacin
Fotoltica
Temperatura
Hidrolisis Acida
Hidrolisis
Bsica
Oxidacin
Fotoltica
Temperatura
Hidrolisis Acida
Hidrolisis
Bsica
Oxidacin
Fotoltica
Temperatura
Principio Activo
Placebo
Placebo
Adicionado

Adicin de
Analito

Adicin de Placebo

--------------------

----

------------------------

Condicin de
degradacin

-------------

Se debern obtener resultados de respuesta, con los cuales determinara si

existe interferencia con la respuesta del pico de inters
Y como?

Calculando la pureza cromatogrfica del pico (4 pases de pureza)

QU RESULTADOS DEBO OBTENER?

Calcular
Angulo y umbral de pureza
Criterios de aceptacin
Cumple con los 4 pases de pureza

Y COMO SE SI ES EL MTODO ES
ESPECIFICO?