TEORIA CELULAR

Todos los organismos vivos estn compuestos por

una o mas clulas

Las reacciones qumicas, procesos biosintticos y

reacciones liberadoras de energa ocurren dentro de la
clula

Las clulas se originan de otras clulas

Las clulas contienen la informacin hereditaria de
los organismos de la que son parte, y sta pasa de una
clula progenitora a una clula hija

LA CELULA Unidad morfolgica y funcional que constituye a

los seres vivos

Crecimiento y divisin celular

CICLO CELULAR

El ciclo celular consiste en tres fases: interfase

mitosis , y citocinesis . Antes de que una clula
eucaritica pueda comenzar la mitosis y dividirse
efectivamente, debe duplicar su DNA, sintetizar
histonas y otras protenas asociadas con el DNA de
los cromosomas, producir una reserva adecuada de
organelas para las dos clulas hijas y ensamblar
las estructuras necesarias para que se lleven a cabo
la mitosis y la citocinesis. Estos procesos
preparatorios ocurren durante la interfase, en la
cual, a su vez, se distinguen tres etapas: las fases
Gl, S y G2.

R. Restriccin
G. Gap
S. Sntesis
VER FIG 10-3

PROCARIOTAS

EUCARIOTAS

Monmeros de los cidos

Nucleicos:
LOS NUCLEOTIDOS

Uracilo

Monmeros de los Acidos Nucleicos

LOS NUCLEOTIDOS

ESTRUCTURA DEL DNA

MODELO DE WATSON Y CRICK

Estructura del DNA: El Modelo

de Watson y Crick

REPLICACION DEL DNA Y ENZIMAS INVOLUCRADAS

La replicacin del DNA es el proceso por el cual el DNA es perpetuado. Es un
proceso semiconservativo, esto quiere decir que las molculas finales
contienen una hebra nueva, recin sintetizada, y la complementaria, hebra antigua,
que sirvi como templado (molde).

El DNA es replicado por DNA polimerasas, esta utilizan una hebra como templado,
sobre la cual realizan la sntesis de la hebra complementaria utilizando los
desoxinucletidos trifosfatos adecuados. La cadena de DNA naciente siempre crece
en sentido 53, es decir, el nucletido que se agrega une su a-fosfato al grupo 3OH libre de la cadena en sntesis, este enlace ocurre entre las pentosas que
componen los nucletidos.
Estructuras formadas para la Replicacin del DNA

OJO DE REPLICACION:

Es la estructura se forma al separase la doble hebra de DNA durante

la replicacin. En ella se pueden distinguir los llamados tenedores de
replicacin, esto pueden ocurrir en una o ambas hebras y es donde esta
ocurriendo la sntesis de DNA.

FRAGMENTOS DE OKAZAKI:

Estos son los Fragmentos de RNA-DNA que son resultados de la

sntesis de DNA en la hebra discontinua. Estos son sintetizados en
direccin 53 pero discontinuamente, luego de la remocin de los
primers (RNA) son unidos por la DNA Ligasa.

Estructuras Formadas Para La Replicacin Del DNA

REPLICACION DEL DNA Y ENZIMAS INVOLUCRADAS

La replicacin del DNA es el proceso por el cual el DNA es perpetuado. Es un
proceso semiconservativo,

Ver modelo
Watson y Crick

Flujo de la informacin gnica:

Dogma central de la biologa (hiptesis
central)

Transcripcin
El RNA COMO MENSAJERO
Tipos de RNA
Mensajero (RNAm)
Transferencia (RNAt)
Ribosmico (RNAr)

Transcripcin y maduracin de mensajeros

en eucariotas (splicing)

Ensamble de las subunidades del ribosoma

Estructura de RNA de transferencia

FLUJO DE INFORMACION GENETICA EN LA CELULA EUCARIOTICA

Flujo de la informacin desde DNA a Protenas

Traduccin: Sntesis de protenas

Flujo de la informacin desde DNA a Protenas

Descifrando el Cdigo: Niremberg
Extractos celulares
RNAs de fuentes diversas
AA*
Extractos celulares
Mensajero sinttico poliU
AA* uno por reaccin

Polipeptidos

Fenilalanina phe- phe- phe

Extractos celulares
Mensajero sinttico (AG)n
AGA GAG AGA GAG
AA* uno por reaccin

Arginina - Ac glutmico arg-glu-arg-glu

Extractos celulares
Mensajero sinttico (AGC)n
AGC AGC AGC AGC AGC
AA* uno por reaccin

Serina ser-ser-ser

El Cdigo gentico

Esquema general

Traduccin:
Sntesis de protenas

Iniciacin

La subunidad ribosmica ms pequea se une al extremo 5' de una molcula de

mRNA. La primera molcula de tRNA, que lleva el aminocido modificado fMet, se
acopla con el codn iniciador AUG de la molcula de mRNA. La subunidad
ribosmica ms grande se ubica en su lugar, el complejo tRNA-fMet ocupa el sitio P
(peptdico). El sitio A (aminoacil) est vacante. El complejo de iniciacin est
completo ahora

Elongacin

Un segundo tRNA, con su aminocido unido, se coloca en el sitio A y su anticodn se acopla con el mRNA. Se
forma un enlace peptdico entre los dos aminocidos reunidos en el ribosoma. Al mismo tiempo, se rompe el
enlace entre el primer aminocido y su tRNA. El ribosoma se mueve a lo largo de la cadena de mRNA en una
direccin 5' a 3', y el segundo tRNA, con el dipptido unido, se mueve desde el sitio A al sitio P, a medida que el
primer tRNA se desprende del ribosoma. Un tercer aminoacil-tRNA se coloca en el sitio A y se forma otro enlace
peptdico. La cadena peptdica naciente siempre est unida al tRNA que se est moviendo del sitio A al sitio P y
el tRNA entrante que lleva el siguiente aminocido siempre ocupa el sitio A. Este paso se repite una y otra vez
hasta que se completa el polipptido

Terminacin

Cuando el ribosoma alcanza un codn de terminacin (en este ejemplo UGA), el polipptido se
escinde del ltimo tRNA y el tRNA se desprende del sitio P. El sitio A es ocupado por un factor de
liberacin que produce la disociacin de las dos subunidades del ribosoma

TRANSCRIPCION EN PROCARIOTAS y SU REGULACION

Los grupos de genes que codifican esas molculas suelen transcribirse en una nica cadena
de mRNA. Estos mRNA se conocen con el nombre de mRNA POLICISTRONICOS

REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN

Lac+: aprox 3000 molec. de -gal/cel

Lac-: aprox 1molec. de -gal/cel

Trp-: RNAm Trp maximo

Trp+: RNAm Trp minimo

Un medio principal de regulacin gentica en las bacterias es el

sistema OPERON que comprende al promotor , a los genes
estructurales y al operador .
En los sistemas inducibles, como el opern lac, la molcula del represor es activa,
hasta que se combina con el inductor (en este caso, alolactosa).

En los sistemas inducibles, como el opern lac, la molcula del represor es activa,
hasta que se combina con el inductor (en este caso, alolactosa).
Control positivo del Opern Lac.
SISTEMA CAP-AMPc
CAP (Proteina activadora de los genes catabolicos) + AMPc
El complejo se une a la regin promotora la transcripcin es mxima
En presencia de Glucosa E. coli no usa lactosa como fuente de C.
Cuando los niveles de Glu disminuyen, aumentan los niveles de AMPc que
forman mas complejos CAP-AMPc que se unen a la region promotora activando
la transcripcion y comienza a degradarse lactosa.

En los sistemas represibles, como el opern trp, el represor se activa slo cuando
se combina con el correpresor . Fig 15-8

FUENTES DE VARIABILIDAD EN ORGANISMOS

FUENTES DE VARIABILIDAD: MUTACIONES

FUENTES DE VARIABILIDAD: MUTACIONES

Delecin: es la prdida de uno o varios nucletidos del DNA.
Ejemplo: CGTACGTA por CTACGTA.
Insercin:es la adicin de uno o varios nucletidos en la molcula del DNA. Si
la insercin es de un nucletido donde no altera el amino cido a ser codificado,
la mutacin pasa desapercibida.
Ejemplo: CGTACGTA por CGGGTACGTA, en este caso se afectar la protena.
Inversin: es el cambio de posicin de varios nucletidos en la molcula. Se
altera la informacin gentica.
Ejemplo: CGTACGTA por CGCATGTA.
Corrida del marco de lectura ("frameshift"): aqu se inserta o se pierde uno o
varios nucletidos, como resultado toda la informacin del gen se pierde ya que
se sustituyen unos amino cidos por otros.
Ejemplo: CGT ACG TAC GTA por CGA CGT ACG TAC cada tres representan
nucletidos codifican para un amino cido, sin embargo observamos que los
codones son diferentes.
Traslocacin: esta mutacin ocurre cuando segmentos de nucletidos se
separan y se unen en otro lugar del cromosoma.

FUENTES DE VARIABILIDAD EN BACTERIAS

CONJUGACION

El factor F (de fertilidad) de E. coli es un

plsmido presente en las clulas F+
dadoras y puede ser transferido a las
clulas F- receptoras; estas clulas
pueden transformarse en F+ y transferir,
a su vez, el factor F.

FUENTES DE VARIABILIDAD EN BACTERIAS

CONJUGACION

Cuando el factor F se integra al cromosoma de una

clula de E. coli (transformndolas en una clula
Hfr) (Alta frecuencia de recombinacin) parte del
cromosoma o (en raras ocasiones) todo el
cromosoma puede ser transferido a otra clula de
E. coli por conjugacin. En el momento de la
transferencia, el cromosoma se replica por el
mecanismo de crculo rodante y una copia de DNA
de cadena simple entra a la clula receptora
linealmente, de modo que los genes bacterianos
penetran uno tras otro, en una secuencia fija. Luego
se sintetiza la cadena complementaria
AUXOTROFIA en bacterias como sistema para
determinar conjugacion

FUENTES DE VARIABILIDAD EN BACTERIAS

TRANSDUCCION. Los virus como vectores

Los virus pueden servir como vectores de material
gentico, transportando genes de una clula a otra,
proceso conocido como transduccin . La
transduccin general ocurre cuando el DNA
hospedador, fragmentado en el curso de la
infeccin viral, se incorpora a nuevas partculas
virales que llevan estos fragmentos a una nueva
clula hospedadora. La transduccin especializada
ocurre cuando un profago, al liberarse del
cromosoma hospedador, lleva con l, como parte
del cromosoma viral, genes del hospedador que
luego son transportados a una nueva clula
hospedadora.

- El DNA viral puede entrar a la clula y comenzar una infeccin (ciclo ltico); o
- el DNA viral puede incorporarse al cromosoma bacteriano, replicarse con l y ser transferido a las
clulas hijas (ciclo lisognico).
Las bacterias que albergan a estos virus se conocen como lisognicas porque, de cuando en cuando, los
profagos se activan y establecen un nuevo ciclo ltico.

Clonado del DNA

41

Manipulacin del DNA

Estudio de una secuencia especfica de DNA que suele encontrarse
en un conjunto heterogneo de secuencias.
Aislamiento, amplificacin, secuenciacin y expresin de un
fragmento de DNA especfico
Esta tecnologa se denomina: Tecnologa del DNA recombinante,
clonacin gnica o ingeniera gentica
Ningn campo de la biologa ha permanecido igual tras esta revolucin tecnolgica

Propiedad bsica del DNA que permite su manipulacin:

El acoplamiento de cadenas por complementariedad. La
extraordinaria especificidad del reconocimiento entre secuencias
de bases complementarias constituye un poderoso instrumento
para la identificacin, aislamiento, clonacin,... De fragmentos de
DNA complementarios a uno dado

Herramienta bsica:
Endonucleasas (enzimas) de restriccin -> Enzimas de bacterias
que reconocen secuencias de DNA especficas y lo cortan por el
esqueleto azcar-fosfato.
Tipo I y III: cortan el DNA en puntos distintos al de
reconocimiento (al azar)
Tipo II: cortan justo en los puntos que reconocen, que son
repeticiones invertidas o palndromes
5-GGATCC- 3
3-CCTAGG- 5

Herramienta bsica enzimas de restriccin

Las enzimas de restriccin tipo II:

Proporcionan una forma de cortar el DNA de cualquier origen en
secuencias especficas, produciendo por tanto una poblacin
heterognea de fragmentos de extremos idnticos

CORTE Y LIGADURA DE FRAGMENTOS DE DNA

Las endonucleasas de restriccin

Dos tipos de cortes:

EcoRI: E. Coli
BamHI: Bacillus amyloliquefaciens

Corte plano:
extremos romos

Clonacin y secuenciacin del DNA

Corte escalonado:

46

CORTE Y LIGADURA DE FRAGMENTOS DE DNA

http://www.arrakis.es/~ibrabida/iggifanim.html

Clonacin del
DNA
DNA forneo (secuencia que
se desea clonar)

Vector
hbrido

Vector de clonacin
(vehculo)
Organismo husped (E. Coli)
Seleccin de vectores

Vectores
hbridos
(quimera)
Fragmentos de
distintas procedencias
que se unen in vitro
tras cortarse con la
misma enzima de
restriccin. Ligasa
sella zona hbrida

Vectores de
clonacin
Clonacin y secuenciacin del DNA

49

Insercin de los fragmentos de ADN. Esta insercin se

realiza en vectores de clonado, que son los agentes
transportadores capaces de introducirlos en las clulas
hospedadoras.
Los vectores de clonacin son pequeas molculas de ADN,
que tienen capacidad para autorreplicarse dentro de las
clulas hospedadoras.

Plsmidos. Son molculas de ADN circular, con un tamao

menor que el del cromosoma. Se replican con independencia
del cromosoma bacteriano ya que tienen su propio origen de
replicacin.

Husped: E. coli
Insercin del vector hbrido en el husped:
Plsmido: transformacin (solucin diluida
cloruro de calcio) y replicacin autnoma

Fago (transduccin, insercin en DNA husped)

Csmido (transduccin como fago y replicacin
como plsmido)

Seleccin de vectores hbridos

Plsmido: resistencia a antibiticos

Adems del origen de replicacin, los vectores de clonacin (plsmidos) deben

llevar otros genes denominados marcadores, que sirven para identificar las clulas
que contienen el vector de clonacin. Se suelen utilizar como marcadores, genes de
resistencia a antibiticos y genes de bioluminiscencia.
Genes de resistencia a antibiticos. Sirven para identificar bacterias que contienen
el vector de clonacin, porque estas bacterias sern resistentes al antibitico del gen
marcador.
Genes de luminiscencia.. En este caso, la clula que contenga el gen que se quiere
clonar, tendr la propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le incorpora
determina que se exprese esa caracterstica. Este sistema se emplea cuando la clula
hospedadora es una clula eucariota.

CLONADO
Se necesitan Endonucleasas de restriccin
Ligasa
Vector de clonado
Bacterias a ser transformadas
Sistema de seleccin

Mtodos transformacin
Electroporacin: se usa corriente elctrica para
introducir DNA (para bacterias y protoplastos)
Liposomas: DNA se encapsula en liposomas (vesculas de
membrana artificial, para cel animales ppalmente)
Biolstica : disparo de proyectiles de tungsteno u oro
recubiertos por DNA (para bacterias y cel vegetales9
Plsmidos (Ti de Agrobacterium tumefaciens y A
rhizogenes para plantas)
56

Clonacin del
DNA
DNA forneo (secuencia que
se desea clonar)

Vector
hbrido

Vector de clonacin
(vehculo)
Organismo husped (E. Coli)
Seleccin de vectores

60

Separacin fragmentos

Reptacin
de los
fragmentos
a travs del
gel de
agarosa
Clonacin y secuenciacin del DNA

61

DNA teido
con bromuro
de etidio
emite
fluorescencia
con luz UV

Clonacin y secuenciacin del DNA

62

ELECTROFORESIS

Sondeo de una secuencia de DNA en un conjunto

heterogneos de fragmentos

Se precisa de una sonda marcada (radioactividad, colorantes

fluorescentes,...), cDNA suele usarse como sonda
Transferencia en Southern (Southern blotting)

Transferencia Northern (Northern blotting): se hibrida con

RNA

Clonacin y secuenciacin del DNA

64

Transferencia en
Southern
(esquema resumen)

65

La reaccin
en cadena
de la
polimerasa
(PCR)

Clonacin y secuenciacin del DNA

66

Reaccion en cadena de la polimerasa PCR

Animaciones de tcnicas de la gentica

http://www.dnalc.org/ddnalc/resources/animations.html

Clonacin y secuenciacin del DNA

68