Difusin

doble
bidimensio
nal (mtodo
de
Ochterlon
y)

 Este

mtodo es utilizado para la deteccin

deantgenosoanticuerposen una muestra
biolgica.
Consiste en colocar en una placa de Petri agar
(agarosa) 1-1,5% al cual luego de solidificar se le
realizan perforaciones en forma de pocillos a
distancia conveniente y en dichas perforaciones
se colocan pequeas cantidades de Ag. (en los
pocillos exteriores) yAc. (en el pocillo del centro,
ejemplo: el suero sanguneo contiene
anticuerpos).

 la

placa se deja por 48 horas para su

revelado. Durante este tiempo, los antgenos
y los anticuerpos migrarn de
maneraradialhacia afuera de sus
respectivos pocillos.
Al encontrarse ambos a mitad de camino y,
de haber anticuerpos en contra de los
antgenos se unirn en una red de enlaces
llamado complejo inmune, el cual precipita
en el gel revelando una lnea blanquecina.

 cuando

las concentraciones colocadas en los

pocillos estn cerca de la equivalencia la
banda se formar a mitad de distancia entre
ellos.

Permite tener idea de los PMde cada reactivo ya

que al tratarse de una difusin radial, la
concavidad de la banda estar hacia el lado del
pocillo donde se halla colocado el reactivo de
mayor PM,y viceversa,si ambos PM son
semejantes la banda ser recta.

Es posible determinar la existencia o no de

epitopes comunes entre Ag.segnlas
caractersticas de las bandas formadas.

Difusin
simpleen
placaoinmun
o-difusin
radial(Mancin
i).

 Consiste

en una placa de agar o agarosa

al 3% en solucin salina,en el que se
encuentra disuelto el Ac. Sobre el agar
se realizan perforaciones en las que se
colocan las muestras.

 La

distancia a la que difunde un

Ag.hastaalcanzar la relacin de equivalencia
con su correspondiente Ac.yprecipitar, es
proporcional a la concentracin delmismo.
Entonces, cuando los sistemas son
equivalentes, aparece alrededor del pocillo
uncirculode precipitacin.

 Debido

a que la concentracin del reactivo

disuelto en el agar es constante,el dimetro
del crculo descripto por la banda de
precipitacin ser directamente proporcional a
la concentracin del reactivo que difunde.

Es necesario medir el dimetro del circulo

obtenido y ubicarlo en una curva estndar que
se construye de la siguiente manera:
se

colocaran en una serie de pocillos

cantidades conocidas de un estndar del Ag.
se incuba la placa a temperatura ambiente
hasta que el dimetro de los halos no se
modifique (48-72 hs).
Se mide el dimetro de los halos y se
construye una curva de calibracin
relacionando la superficie de los mismos
(elr2od2) con la concentracin.

 Existen

kits comerciales que traen la placa

con el Ac.yaincluido en ella , un estndar
de concentracin conocida y una tabla de
concentracin en funcin de los dimetros o
radios; de manera que no se necesita
realizar la curva estndar.