Introduo a Biologia Mole

Prof Daniela de Oliveira Pi

NOS SERES HUMANOS

DNA

NCLEO

CLULA

ORGANISMO

CROMOSSOMOS
(DNA+PROTENAS)

Informao
das
protenas e
RNAs que sero
sintetizadas
pelas clulas do
organismo ao
longo da sua vida.
-Capacidade de se autoduplicar para originar
outras clulas.
-

1953: Watson and C

Estrutura do DNA

Dogma
Central
da
Biologia
Molecula
r

 1961 BRENNER, JACOB e MESELSON

mRNA a molcula que leva

informao do DNA no ncleo para a
maquinaria de produo de protenas
no citoplasma

O CDIGO GENTICO
DESVENDADO!!!

1966 NIRENBERG,
KHORANA e OCHOA
Seqncias sucessivas
de trs nucleotdeos
do
DNA
(codon)
determinam
a
seqncia
de
aminocidos de uma
protena

A CLULA

DNA
1. Regulao transcricional
HnRNA

2. Regulao no
processamento do
RNA primrio
3. Regulao no
transporte do
mRNA para o
citoplasma

RETCULO
ENDOPLASMTICO
RUGOSO

4. Regulao da
sntese proteca
5. Regulao
ps-sntese
Protena
sintetizada

DIFERENCIAO
CRESCIMENTO
FUNO CELULAR
RESPOSTA AO
AMBIENTE

Ncle
o
Cromossoma

DNA

Gen
e
Promotor

Exon

Intron

DNA

CIDO
DESOXIRRIBONUCLEICO
(DNA)
Contm toda a informao gentica de um
organismo

Esta informao est arranjada em

unidades hoje conhecidas como
genes

ESTRUTURA DOS
CIDOS
NUCLEICOS
As molculas de
compostas
por
nucleotdeos:

DNA e
quatro

RNA so
diferentes

Adenina, Guanina e Citosina comum

para DNA e RNA
Timina encontrada somente no DNA
Uracila encontrada somente no
RNA

ESTRUTURA DOS
CIDOS
NUCLEICOS
Todos os nucleotdeos
apresentam uma estrutura em
comum:
radical
fosfato

pentos
e

ESTRUTURA DOS
CIDOS
NUCLEICOS
As bases nitrogenadas podem ser
divididas em dois grupos de acordo
com sua estrutura:

ESTRUTURA DOS
CIDOS
NUCLEICOS
O grupo hidroxil ligado ao
carbono 3 da pentose de
um
nucleotdeo
forma
uma ligao fosfodister
com o fosfato do outro
nucleotdeo

5 C-A-G 3

DN
A

Duas fitas de polinucleotdeos associadas

formando uma estrutura de dupla hlice onde as
pentoses e os radicais fosfato compe a fita e as
bases projetam-se para o interior da mesma

As fitas mantm-se unidas atravs da formao

de pontes de hidrognio entre as bases o que
contribui para a estabilidade da dupla hlice

. Adenina (A) pareia com Timina (T) atravs

de 2 pontes de hidrognio
. Guanina (G) pareia com
atravs de 3 pontes de hidrognio

Citosina

(C)

DNA

Antiparalelismo
As fitas do DNA
esto dispostas
em direes
opostas

Complementariedade
Cada base de uma fita pareada com a base complementar da outra
fita

Complementariedade

Fita velha

Durante a
replicao do DNA
as duas fitas
velhas ou mes
servem de molde
para cada fita nova
ou filha
complementar, que
est sendo
sintetizada.
Fita
nova

A Dupla Hlice
Fatores que estabilizam a dupla
hlice:
interaes hidrofbicas Entre as bases
nitrogenadas
foras de van der Walls
pontes de hidrognio
Entre os grupos
fosfato do DNA e
interaes inicas
os ctions (Mg2+)
presentes na
soluo fisiolgica

A Dupla Hlice
A dupla hlice apresenta
dois tipos de sulcos aos
quais se ligam as protenas
da cromatina
Sulco menor

Sulco maior

Protenas:nveis
estrutural

de

complexidade

O Empacotamento do DNA:
a estrutura terciria do DNA
DNA em procariontes: DNA circular nas formas nosuper-helicoidal (esquerda) e super-helicoidal (direita)

A Dupla Hlice

A forma predominante de toro da espiral do

DNA para a direita ou sentido horrio

Propriedades Qumicas e Fsicas do

DNA

REPLICAO DO
DNA
Conservativa ou
Semiconservativa?
Unidirecional ou Bidirecional?

REPLICAO
SEMICONSERVATIV
A

Evidncia baseada em um experimento clssico de

Meselson-Stahl em 1958
Clulas de E. coli foram inicialmente colocadas
em um meio para crescimento contendo sais de
amnia preparados com 15N (nitrognio pesado
heavy) at todo o DNA celular conter o istopo.
As clulas foram, ento, transferidas para um
meio contendo 14N (nitrognio leve light).
As amostras foram analisadas com gradiente de
densidade que separa as duplas H-H, L-L e H-L em
bandas distintas.

PNAS
44:671, 1958

A
replicao
conservativa

The Meselson-Stahl experiment

semi-

ORIGEM DA
REPLICAO
Experimento com SV40 (Simian Virus)
DNA viral de clulas infectadas com SV40
foi cortado com a enzima de restrio EcoRI,
que reconhece um stio nico.
A partir de um ponto vai se formando
uma bolha chamada bolha de replicao
comprovando a existncia de um ponto de
origem da replicao
Caractersticas da origem de replicao:
. estrutura repetitiva

ORIGEM DA
REPLICAO
ORIGE
M

Stio de
restrio EcoRI

Cromossomo
viral circular

EcoR
I

Bolha de
replica
o

ORIGEM DA
REPLICAO

REPLICAO
BIDIRECION
AL
Um experimento atravs da
autoradiografia de molculas de DNA
marcadas de culturas de clulas
mamrias revelou grupos de replicons
(unidades de replicao) com um
ponto de origem de replicao central
OR

OR

Sntese de DNA em Eucariontes: As

Bolhas de Replicao
Nos eucariontes, a
replicao
requer
mltiplas
origens,
devido ao tamanho de
seu
genoma.
A
replicao

bidirecional e,
em
ambas
as
fitas,
simultnea.
Este processo
bolhas
replicao.

gera
de

Regies Codificadoras e
No-Codificadoras do DNA
O DNA formado por 2 regies:
Intergnicas

Gnicas

Regio Gnica
a poro que codifica
para um produto final,
que pode ser uma cadeia
polipeptdica ou um RNA

Intergnicas

Gnicas

Regio Intergnica
a poro regulatria,
que sinaliza o incio ou o
final de um gene, que
influencia a transcrio
gnica, ou que o ponto
de incio para a
replicao do DNA

PROCESSO DE
REPLICAO
Os
mecanismos
celulares
responsveis pela replicao do DNA
foram descobertos primeiramente em
bactrias.
A replicao em eucariotos ocorre
atravs de protenas anlogas e com
processos semelhantes replicao
do DNA de E. coli

PRINCIPAIS ENZIMAS ENVOLVIDAS

(SISTEMA DE REPLICAO
DO DNA)
1. DNA
Polimerases
2. Endonucleases
3. Helicases
4. Topoisomerases
5. Primases
6. Telomerases

DNA
POLIMERASE
So incapazes de quebrar as pontes
de hidrognio que ligam as duas fitas
do DNA
S alongam uma fita de DNA/RNA prexistente
Catalisam a adio de um nucleotdeo
no radical hidroxil da extremidade 3 da
cadeia que est se formando. Desta
forma, as fitas s podem crescer no
sentido 5
3

DNA Polimerases
principais enzimas envolvidas no processo;
responsveis pela adio de nucleotdeos e
reparo
requerem um modelo e um primer (segmento
de RNA sintetizado pela primase)
complementares para incio alongamento
3 tipos principais : I, II, III
I : importante no sistema de reparo
III: principal e mais complexa (mais de 10
subunidades)

Adio de nucleotdeos
1

NUCLEASES
- Degradam o DNA, clivando-o em
pedaos menores
1. EXONUCLEASES: clivam o DNA a
partir do final da molcula
2. ENDONUCLEASES: clivam em
qualquer local da molcula

OUTRAS ENZIMAS
ENVOLVIDAS NO PROCESSO
DE REPLICAO

HELICASES constituem uma classe de enzimas que

podem se mover ao longo da fita dupla de DNA
utilizando a energia da hidrlise de ATP para
separar as duas fitas da molcula.
SSB (single-strand-binding) ligam-se a cada uma
das fitas impedindo o reanelamento das mesmas.
PRIMASE RNA polimerase que sintetiza pequenas
molculas de RNA utilizadas como iniciadores
durante o processo de replicao do DNA.
TOPOISOMERASES Responsveis por aliviar a
toro na parte da fita que no est sendo

PROCESSO DE
REPLICAO
O movimento da forquilha de replicao
revela uma fita molde no sentido 3 5 e
outra no sentido oposto 5 3
Desta
forma,
as
fitas
novas
sintetizadas em sentidos opostos
FITA
LEADING

crescimento
segue
a
direo do movimento da
forquilha de replicao
FITA
LAGGING

crescimento
no
sentido
oposto ao movimento da

so

PROCESSO DE
REPLICAO
FITA LEADING sintetizada continuadamente a
partir de um iniciador na fita molde 3
5
FITA LAGGING sintetizada descontinuadamente
a partir de mltiplos iniciadores
Stios descobertos no molde da fita lagging
so copiados em pequenos iniciadores de RNA
pela primase.
Cada iniciador alongado pela DNA polimerase
resultando na formao dos FRAGMENTOS DE
OKAZAKI.
DNA polimerase remove o primer do RNA do
fragmento adjacente e preenche os gaps entre

PROCESSO DE
REPLICAO

PROCESSO DE
REPLICAO

A sntese de DNA feita na direo 5 3 e

semidescontnua

TELOMERAS
E
Os cromossomos de eucariotos so lineares
e apresentam seqncias repetitivas em suas
extremidades denominadas telmeros
A sntese da fita leading continua at o
trmino da fita molde de DNA, no entanto, no
telmero a extremidade feita pela primase na
fita lagging no digerida.
Como o iniciador instvel, ele se degrada
com o tempo diminuindo, assim, o tamanho
do cromossomo.
Telomerase age evitando a perda do fim do

TELOMERAS
E

REGULAO
-nica fase regulada da
replicao, de forma que s
ocorra uma vez por ciclo
celular ;
-afetada pela metilao de
DNA
-DAM metilase na (5) GATC
sobre a fita parental

Ncleo
RNA polimerase

Gene

Transcrio
hnRNA

Processamento
mRNA

Traduo
Citoplasma

protena

O RNA ou ARN
O cido Ribonuclico um polinucleotdeo que difere do
DNA em trs aspectos bsicos:
O acar uma
DN
Ribose;
A-T
A
T-A
formado, geralmente,
G-C
por uma fita simples
C-G
que pode enrolar-se;
No existe a base
pirimdica Timina e no
seu lugar se encontra a
RN
base Uracila.
A-U
A
Os pareamentos
U-A
G-C
seguem a ordem A-U e
C-G
G-C).

RNA - o cido ribonuclico; possui a funo de sntese

protica. O RNA encontrado no ncleo principalmente
no nuclolo, e no citoplasma (ribossomos).
Composio qumica - formada por cido fosfrico,
pentose (ribose) e pelas bases nitrogenadas ( A, G, C e
uracila (U )).
A molcula de DNA responsvel pela formao do RNA.
O RNA apresenta-se constitudo por um nico filamento
de nucleotdeo, cuja seqncia de bases determinada a
partir de um molde de DNA.

Tipos de RNA

1-RNA mensageiro (RNAm) - formando no ncleo tendo como molde

uma das fitas de uma molcula de DNA. A produo de um RNAm,
cujas bases so complementares as bases de uma das hlices de
uma molcula de DNA, recebe o nome de transcrio. Este fenmeno
pode ser definido de forma mais simples como sendo a passagem
das bases de uma linguagem do DNA para a linguagem de RNAm. EX:

T - A - C - T - G - A !
!
!
!
!
!
A- U-G - A - C - U
Cdon incio
cdon
aa A
aa B

DNA
RNAm
protena

3 bases correspondem a um aa, e um

conjunto de bases uma protena.

Sntese Protica
A enzima RNA-polimerase
abre a dupla hlice do DNA
e inicia a produo de uma
molcula de RNAm, no
sentido 5 3.
Os nucleotdeos so ligados
respeitando a ordem A-U,
G-C.
Ao final da transcrio a
RNA-polimerase se desliga
do DNA, a molcula de
RNAm est formada e
segue para o citoplasma
onde ser traduzida.

A Transcrio

Observe a complementao de
uma fita de DNA para RNA
DNA

A T A C AT G G G C T A G A A

RNA

U A U G UA C C C G A U C U U
RNAm

Sempre com a adenina se ligando a uracila

e a guanina se ligando a citosina.

partir de DNA especiais. uma

molcula cadeia curta, ( o menor
RNA) que transporta os aa que
esto dispersos no citoplasma at
os ribossomos. O RNAt tem
formato de folhas de trevo e
contm outros tipos de bases,
alm das comumente encontradas
nos outros RNAs. Cada RNAt
capaz
de
reconhecer
um
determinado
aa
determinado
cdon, no RNAm. Todo RNAt tem
um
filamento
livre
de
sua
molcula composta pela seguinte
seqncia de bases: ACC. nesse
local que ocorre a associao com
o aa. Em cada regio da molcula
existe uma seqncia de 3 bases
denominadas
anticdon,
que
reconhece a posio do aa no
RNAm.

Tipos RNAs (2/2)

RNA TRANSPORTADOR

3-RNA ribossmico (RNAr) o RNA que

ocorre em maior quantidade nas clulas.
Esse RNA encontrado no nuclolo, onde
produzido, e no citoplasma, associado s
protenas, formando os ribossomos.

Tipos de RNA
RNAm O RNA mensageiro formado no ncleo
e contm a mensagem - o cdigo transcrito a partir
do DNA - para a sntese das protenas. Cada conjunto
de trs nucleotdeos no RNAm chamado de CDON.

RNAt O RNA transportador est presente no

citoplasma e responsvel pelo transporte dos
aminocidos at os ribossomos para a sntese
protica. No RNAt existe uma seqncia de
nucleotdeos correspondente ao cdon chamada de
ANTI-CDON.

RNAr O RNA ribossmico ou ribossomal faz

parte da estrutura dos ribossomos e participa do
processo de traduo dos cdons para construo das
protenas.

SNTESE DE PROTENAS:
A sntese comea quando ocorre a transcrio das bases de DNA para RNA. Essa
transcrio o cdigo gentico. O RNAm formado no ncleo passa para o citoplasma,
deslocando-se para os ribossomos. Os RNAt que esto no citoplasma, atravs de suas
molculas, unem-se ao aa livre levando at o ribossomo. L o anticdon do RNAt
reconhece no cdon do RNAm o aa, que ser codificado. Assim, ocorrendo
sucessivamente, at dar origem a uma protena.

Ncleo

Ncleo
RNAm
DNA-RNAm
DNA

RNAm

Transcrio

Protenas

Traduo

A sntese completa de uma protena leva de 20 a 60 seg, e o

RNAm pode ser traduzido por vrios ribossomos, que mantm
Distncia entre si de aproximadamente 80 nucleotdeos.

Os ntrons e os xons
Nos eucariontes, o RNA transcrito pelo gene normalmente
chamado de pr-RNA, no sentido de que ele ainda no est
pronto para ser traduzido, produzindo protenas. O pr-RNA
seria, assim uma verso ainda no acabada do RNAm, que
precisa ser primeiro processado no ncleo para, em seguida,
migrar ao citoplasma.
xon
ntron xon ntron
ntron xon
A
Os ntrons so retirados e os xons so
soldados um ao outro

Sntese Protica

A Traduo

O RNAm transcrito no
ncleo chega ao citoplasma
e se liga a um ou mais
ribossomos.
O ribossomo l o primeiro
cdon e um RNAt com o
anticdon correspondente
transporta um aminocido
e se liga ao cdon.
O ribossomo se desloca, no
sentido 53 e l o
prximo cdon.
Os aminocidos so unidos
por ligaes peptdicas.
Ao final da traduo o
polipeptdeo se desliga e se
constitu na protena.

O ribossomo acomoda dois tRNAs

carregados

4.
4. Terminao
Terminao

Dogma Central da Biologia Molecular

Foi estabelecido em 1956 por Francis Crick.

Postulava que o sentido da construo das molculas
sempre de DNA Protena fluxo unidirecional da informao.
O DNA o molde para formar DNA (replicao) e RNA
(transcrio). Este por sua vez o molde para formao das
protenas (traduo).
Hoje se sabe que, em alguns vrus, o RNA pode replicar-se e,
em outros, o RNA pode produzir DNA (transcrio reversa)
utilizando o maquinrio gentico da clula-hospedeira.
Porm, no possvel se sintetizar cidos nuclicos a partir de
protenas.
Os novos conhecimentos permitiram que se ampliasse o
dogma central sem contudo perder a unidirecionalidade, ou
seja, de cido nuclico protena.
Projeto Protemico.

Diferenas entre RNA e

DNA

O RNA uma molcula intermediria na

sntese de protenas, ela faz a
intermediao entre o DNA e as
protenas.

DNA

RNA

Ele formado por uma cadeia de

ribonucleotdeos, que, por sua vez, so
formados por um grupo fosfato, um
aucar (ribose), e uma base nitrogenada
(veja abaixo).
As principais diferenas entre o RNA e o
DNA so sutis, mas fazem com que o
ltimo seja mais estvel do que o
primeiro. O RNA formado por uma fita
simples, o acar de seu esqueleto a
ribose e uma de suas bases pirimdicas
(de anel simples) diferente da do DNA

DNA e RNA
Os processos de sntese de protenas na clula so controlados pelo metabolismo de controle.As duas
principais personagens do metabolismo de controle so as molculas de DNA e RNA. O DNA (cido
desoxirribonuclico) o patrimnio gentico, que contm as instrues para a sntese de todas as
protenas que a clula capaz de realizar. O RNA atua como mensageiro (RNA mensageiro) entre o
DNA e o ribossomo, local de sntese de protenas.
DNA (cido desoxirribonuclico)

RNA (cido ribonuclico)

Se localiza somente no ncleo

Se localiza no ncleo e no citoplasma

Apresenta forma de dupla hlice com

duas fitas

Apresenta apenas uma fita

formado com a pentose (acar)

desoxirribose

formado com a pentose ribose

Bases nitrogenadas participantes: A, T,

C, G

Bases nitrogenadas participantes: A, U,

C, G

Cdigo Gentico
Genoma
Conjunto de
molculas de DNA

Codon que d
origem sntese
de
qualquer
protena

Cdigo Gentico correspondncia entre cada tripleto (codon) de

RNA e cada um dos 20 aminocidos habituais das protenas (desde
1964)
No cdigo gentico h 64 trincas possveis, apenas 61 delas
correspondem a aminocidos. As tres trincas restantes so usadas

Orao do DNA

Creio no DNA todo poderoso

criador de todos os seres vivos,
creio no RNA,
seu nico filho,
que foi concebido por ordem a graa do DNA polimerase.
Nasceu como transcrito primrio
padeceu sobre o poder das nucleases, metilases e poliadenilases.
Foi processa, modificado e transportado.
Desceu do citoplasma e em poucos segundos foi traduzido protena
Subiu pelo retculo endoplasmtico e o complexo de Golgi
E est ancorado direita de uma protena G
Na membrana plasmtica
De onde h de vir a controlar a transduo de sinais
Em clulas normais e apoptticas
Creio na Biologia Molecular
Na terapia gnica e na biotecnologia
No seqenciamento do genoma humano
Na correo de mutaes
Na clonagem da Dolly
Na vida eterna.
Amm