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ESTANDARIZADOS
MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGICOS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECIFICOS
SECCIN I
SECCIN II
Estructura de un laboratorio de
microbiologa clnica
rea
de trabajo del ambiente
preparacin de medios de
cultivo
microbiolgicos
SECCIN IV
SECCIN V
SECCIN I:
ESTRUCTURA DE UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
CLNICA
Las reas de trabajo son aquellas en las cuales se realizan los anlisis
especficos y las actividades relacionadas.
SEALES DE PROHIBICIN
Tienen forma redonda, el pictograma es negro sobre fondo
blanco, los bordes y banda transversal descendente, de
izquierda a derecha, atravesando el pictograma a 45
respecto a la horizontal, sern de color rojo (este color
deber cubrir, como mnimo, el 35% de la superficie de la
seal).
SEALES
EQUIPOS
INCENDIOS
RELATIVAS
DE
LUCHA
LOS
CONTRA
RECOMENDACIONES ESPECFICAS
PARA
LOS
LABORATORIOS
DE
MICROBIOLOGA CLNICA
Todos
los
aparatos
destinados
y su nivel de contencin.
BARRERAS DE CONTENCIN
PRIMARIA
Bioseguridad:
VESTIMENTA PROTECTORA
BATA
GUANTES
MASCARILLAS
GAFAS
BARRERAS SECUNDARIAS: EL
AMBIENTE DE LABORATORIO
Bioseguridad:
PAREDES
VENTANAS, PUERTAS
SUPERFICIES DE TRABAJO
GRIFOS
CIRCULACIN DE AIRE
FILTROS HEPA
BIOSEGURIDAD
Tcnica del
personal
BARRERAS DE PROTECCIN
(VESTIMENTA PROTECTORA, CSB)
LAVADO DE MANOS
rea de
almacenamiento
de material,
medio de cultivo
rea de desecho
y lavado.
rea de
esterilizacin.
rea de preparacin
de medios de
cultivo
rea de preparacin
de medios de cultivo
Este ambiente debe contar
con mesas de trabajo para la
preparacin de los medios y
para colocar balanzas, el
medidor de pH, los platos
calientes con agitacin, y
otros
elementos;
tambin
debe
incluir
vitrinas,
estanteras y espacio para el
equipo de refrigeracin, y
para la incubadora o la
cmara de crecimiento (o para
ambas).
rea de esterilizacin.
El rea de esterilizacin,
puede estar constituida por
dos reas conectadas entre
s (esterilizacin y lavado)
Lavar, preparar y envolver
correctamente el material que
se someter a esterilizacin.
Seleccionar los mtodos de
esterilizacin adecuados para
las diversas necesidades del
laboratorio de microbiologa.
Comprobar la efectividad del
proceso de esterilizacin.
rea de desecho y
lavado.
rea de
almacenamiento de
material, medio de
cultivo
Cambio de color
La evaporacin
La deshidratacin
Crecimiento
microbiano.
Seccin III:
MEDIOS DE CULTIVO
MICROBIOLOGICOS
Un medio de cultivo est
constituido por una mezcla de
agua y sustancias que en
conjunto proporcionan los
requerimientos nutricionales para
el desarrollo de los
microorganismos
Requisitos:
Nombre del medio y lista de
componentes, incluido cualquier
suplemento.
Fecha de vencimiento del medio.
Condiciones de almacenamiento.
Control de esterilidad.
El laboratorio debe
registrar la fecha :
de recepcin
de apertura del
envase.
de caducidad
AGAR: utilizado como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
Clasificacin
Su aspecto fsico
Lquidos.
semislidos
slidos,
Clasificacin
Por su
uso:
Medios selectivos
Medios
enriquecimiento.
Medios
diferenciales
Medios de
transporte
Medios Simples:
AGAR NUTRITIVO:
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su
uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
FUNDAMENTO:
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de
microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.
Instrucciones
Suspender 31 g de
polvo por litro de agua
destilada. Mezclar y
dejar reposar 5
minutos. Calentar
suavemente agitando
y hervir 1 o 2 minutos
hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a
121C durante 15
minutos.
pH final: 7.3 0.2
ALMACENAMIENTO
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Medios Enriquecidos
Componentes ( gr/l)
Infusin de
375.
Preparacin
Suspender 40 g del polvo en un litro
msculo de
corazn
Peptona
Cloruro de sodio
Agar
minutos
10.0
5.0
15.0
hasta
mezclar
obtener
perfectamente
una
suspensin
FUNDAMENTO:
B.
Medio preparado: mbar. Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.
MEDIOS DIFERENCIALES :
AGAR HIERRO
AZUCARES (TSI)
TRES
Medio
universalmente
empleado
para
la
diferenciacin
de
enterobacterias, en base
a la fermentacin de
glucosa,
lactosa,
sacarosa
y
a
la
produccin
de
cido
sulfhdrico.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la
pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados
.
para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa
y glucosa son los hidratos de carbono
fermentables.
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario
para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato
de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los
cuales se combinan con el cido sulfhdrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo
de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de
sodio
mantiene
el
balance
osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos,
que se detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
A: cido
K: alcalino
Caractersticas del medio: Medio
preparado: rojo
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C
MEDIOS DE TRANSPORTE:
I. STUART MEDIO DE TRANSPORTE
Medio destinado a la recoleccin, transporte y
preservacin de muestras. Es til para mantener
la
viabilidad
de
gonococos
de
otros
ALMACENAMIENTO
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Especificaciones
El fabricante debe especificar en cada medio:
a.- Contenido de humedad (medio
deshidratado).
Seccin IV:
MATERIALES Y EQUIPOS MS UTILIZADOS EN EL
REA DE PREPARACIN DE MEDIOS
PLACAS PETRI
AUTOCLAVE
HORNO DE
ESTERILIZACIN
BALANZA
ANALTICA
REFRIGERADOR
MECHERO DE
BUNSEN.
Tambin puede utilizarse otros controles comerciales, tales como las tiras
reactivas, tapes para autoclave, cpsulas spot, etc.
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
CONTROL DE CALIDAD
QUMICO:
MTODO:
1 ml de Solucin de NO3Ag
EVALUACIN:
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
PROTOCOLO DE CONTROL DE
CALIDAD INTERNO DE MEDIOS DE
CULTIVO:
Control de esterilidad
Control de funcionalidad.
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
CONTROL DE ESTERILIDAD:
Seccin V:
CALIDAD
CONTROL DE
CONTROL DE FUNCIONALIDAD:
Seccin V: CONTROL DE
CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO: MICROBIOLGICA
CEPAS DE REFERENCIA .ATCC
Cada lote preparado de medio de
cultivo se prueba antes de su uso
rutinario, por eficiencia o calidad,
mediante la inoculacin de
microorganismos cuyo
comportamiento conocemos, tanto
para reacciones positivas como
negativas. Puede utilizarse para ello
cepas bacterianas domsticas o
cepas control comercial (ATCC).
es probado con:
CONTROL DE CALIDAD
Seccin V: CONTROL DE
CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO: MICROBIOLGICA
MTODO ECOMETRICO
Figura 2. Prueba Ecomtrica de agar xilosa lisina desoxicolato, se sembraron tres cepas que crecen en el
medio de cultivo (S. typhimurium, S. enteritidis y C. freundii) y tres cepas que son inhibidas (S. aureus, S.
epidermidis y B. subtilis).
(d)Hemlisis.
(e)Cristales en el medio.
(f)Presencia de burbujas.
(g)Presencia de cogulos.
(i)Contaminacin.
VALOR DE PH INCORRECTO:
TURBIDZ O PRECIPITACIN
OSCURECIMIENTO
GEL BLANDO
Sobrecalentamiento.
Solucin incompleta.
Alteracin del Ph.
Exceso de calentamiento.
Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
Alteracin en el Ph.
Prueba ecomtrica
GRACIAS POR SU
ATENCION