EL MICROSCOPIO

Tema 06 del Programa

Unidad 1 del libro
Pgina 3

IES Miguel de Cervantes.

Murcia
Hematologa.
Profesores:
Snchez Moreno, A.
Pina Alburquerque, J.A.

HISTORIA: EL INVENTO

Se invent,
hacia 1610, por
Galileo, segn
los italianos, o
por Jansen, en
opinin de los
holandeses

(http://personales.mundivia.es/mggalvez/micro2.htm )

EL NOMBRE
La palabra
microscopio fue
utilizada por
primera vez por los
componentes de la
"Accademia dei
Lincei
Micro=pequeo
Scopein=ver

GALILEO GALILEI
1609:Desarrolla
un occhiolino o
microscopio compuesto
de una lente convexa y
una cncava.
La Accademia dei
Linceii era una sociedad
cientfica a la que
perteneca Galileo y
publicaron un trabajo
sobre la observacin
microscpica del aspecto
de una abeja

MALPIGHI
Las primeras
publicaciones
importantes aparecen
en 1660 y 1665
cuando Malpighi
observa los capilares
sanguneos y Hooke
publica su obra
Micrographia

ANTONY VAN
LEENWENHOEK (1632-1723)
En el siglo XVII un
comerciante
holands, utilizando
microscopios simples
de fabricacin propia
describi por primera
vez protozoos,
bacterias,
espermatozoides y
glbulos rojos

MICROSCOPIO DE
LEEUWENHOEK

CARACTERSTICAS DEL
MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK
El primitivo
microscopio de
Leeuwenhoek tena
dos lupas
combinadas con las
que lleg a alcanzar
260 aumentos, lo cual
le permiti visualizar
algunos protozoos e
infusorios

MICROSCOPIOS DEL SIGLO

XVIII

ERNST ABBE
Las mejoras mas
importantes de la
ptica surgieron
en 1877 cuando
Abbe publica su
teora del
microscopio

CALR ZEISS
Mejora la
microscopa de
inmersin
sustituyendo el
agua por aceite de
cedro lo que
permite obtener
2000 aumentos

FUNDAMENTO DE LA
MICROSCOPA
Cuando el observador
se acerca el objeto se
agranda
Pero a menos de 25
cm no se ve con
claridad
Si se aumenta el
ngulo visual se ve
con claridad

EVOLUCIN DEL
MICROSCOPIO

EVOLUCIN DEL
MICROSCOPIO

1751

Actual

ESQUEMA DEL
MICROSCOPIO
Un tubo cilndrico aloja el
sistema ptico
ocular/objetivo. Una
platina de original diseo
permite observar las
preparaciones, que son
iluminadas por un espejo
cncavo que concentra
la luz sobre el objeto a
estudiar (actualmente
una bombilla).

ESQUEMA DEL
MICROSCOPIO

PARMETROS PTICOS
Aumento
Poder de
resolucin
N de campo
Profundidad de
foco
Contraste

AUMENTO
Se calcula
multiplicando el
aumento del
objetivo por el
aumento del
ocular

PODER DE RESOLUCIN
Distancia si dos
puntos se distinguen
Mayor, cuando menor
es la longitud de onda
Mayor, cuanto mas
grande es la apertura
numrica
Mayor, con aceite de
inmersin

Apertura numrica (A.N.) de un

objetivo

El producto de n sen a
constituye una las caractersticas ms
importantes de la lente.
Los fabricantes marcan el nmero de la
apertura numrica en la montura del
objetivo junto con el aumento.
La calidad de un objetivo es tanto mayor
cuanto ms elevada es su apertura
numrica.
Es aconsejable situar el aumento total
entre 500 y 1000 veces el valor de A.N.

Ejemplo: Para un objetivo de aumento 40X y A.N. 0,65 debemos usar un ocular
que logre valores comprendidos entre los siguientes aumentos:
500 0,65=325 aumentos
10000,65=650 aumentos
Debemos por tanto emplear oculares de 10X y 15X
Un ocular x20 producir imgenes de mayor aumento (800) pero sern poco
ntidas

Nmero de campo
Es el dimetro
de la imagen
observada a
travs del
ocular,
expresado en
milmetros
Campo de visin real = Nmero de campo / Aumento del objetivo.

PROFUNDIDAD DE CAMPO

Es inversamente proporcional al cuadrado de la apertura

numrica (A.N.)
Cuanta mayor sea la Profundidad de campo, tanto menor
ser el Poder de resolucin.

CONTRASTE
Diferencia de
absorcin de luz
entre el objeto y
el medio
Puede
aumentarse con
las tinciones

BUENOS PARMETROS

MICROSCOPIO PTICO
COMPUESTO

PARTE MECNICA QUE SE

PUEDE DESMONTAR
Estativo

Cabezal

Tornillos
de la
platina

Oculares
Objetivos

Condensador

SISTEMA DE SOPORTE O
ESTATIVO
Tubo
Platina

Pe

Brazo

SISTEMA DE AJUSTE (1)

Anillo de
ajuste de los
oculares
Tornillo que
permite
mover el
cabezal
Tornillos del
condensador

Palanca de
cierre del
diafragma

Tornillos
reguladores
de la platina

SISTEMA DE ENFOQUE
Freno

Tornillo
macromtrico

Tornillo
micromtrico

PLATINA

Pinza

Escala

PARTE PTICA
Sistema de
iluminacin:
fuente de luz,
condensador y
diafragma
Lentes: objetivos
y oculares

SISTEMA DE ILUMINACIN:
FUENTE DE LUZ
Suele ser una
lmpara halgena de
intensidad graduable
Se enciende y apaga
con un interruptor
En el exterior puede
tener un filtro

Filtro

Lmpara

Interruptor y
graduacin de la luz

CONDENSADOR Y
DIAFRAGMA
Condensador:
concentra la luz de la
lmpara en un punto
de la preparacin
Diafragma o iris (est
dentro del
condensador):si se
cierra mejora el
contraste, pero
empeora la resolucin

LENTES: OBJETIVOS
Estn colocados en el
revolver
Tienen un sistema de
amortiguacin
Un anillo coloreado
indica los aumentos
Son de 4, 10, 40 y
100 (inmersin)
aumentos

OBJETIVOS

Rojo
4x

Blanco
100x

Amortiguacin

Amarillo
10x

Azul
40x

Tipos de objetivos.
(a) Objetivo acromtico que contiene una lente frontal y dos
pares internos
(b) (b) objetivo semi-apocromtico, con cuatro pares de lentes
(c) (c) objetivo apocromtico que contiene un triplete, dos
pares, un menisco y una lente esfrica frontal.

LENTES: OCULARES

Ajuste de la distancia
interpupilar

Oculares

OCULARES: 10x; 15x; 20x

TETRAOCULARES

MATERIAL NECESARIO:
PORTAS Y CUBRES

ACEITE DE INMERSIN
Hoy no son de
madera de cedro,
sino sintticos
Los hay de baja,
media y alta
viscosidad
Su empleo es
imprescindible con el
objetivo de inmersin
(100x)

MANEJO DEL MICROSCOPIO

No poner la
preparacin al revs
Regular la luz a
intensidad media
Ajustar condensador
y diafragma al medio
Empezar por poco
aumento

Mirando por fuera

subir la platina
Enfocar y ajustar
Pasar al siguiente
aumento y enfocar
Al acabar retirar la
preparacin
Apagar la luz

CONSERVACIN DEL
MICROSCOPIO
Ponerle su funda al
guardarlo
Limpieza de lentes
con papel de gafas
El exceso de
disolvente al limpiar
las lentes desgasta el
cemento de unin.
Usar pincel y pera de
aire

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio
ptico

Tipos de
microscopio
s

Microscopio
electrnico

Microscopio
ptico Simple

Lupa

Microscopio
ptico
Compuesto

M.O. Normal
Campo oscuro
Contraste de fases
Fluorescencia

Transmisin (TEM)
Barrido (SEM)

Otros Microscopios

De Fuerza Atmica
Confocal

Lupa y microscopio optico

PODER DE OBSERVACIN
DEL MICROSCOPIO

MICROSCOPA DE CAMPO
OSCURO

Treponema pallidum

MICROSCOPA DE
CONTRASTE DE FASES

Clulas epiteliales 20 x

MICROSCOPIA DE
FLUORESCENCIA

Clulas epiteliales 200 x

Microscopio electrnico.
ERNST RUSKA

El microscopio
electrnico de
transmisin
(T.E.M.) consigui
aumentos de
100.000 X. Fue
desarrollado por
Max Knoll y Ernst
Ruska en
Alemania en 1931

PRIMER MICROSCOPIO
ELECTRONICO
Utiliz un haz de
electrones en
lugar de luz para
enfocar la
muestra.
Posteriormente, en
1942 se desarrolla
el microscopio
electrnico de
barrido (SEM).

PRIMER M.E. EN ESPAA

(1949)

MICROSCOPIO
ELECTRNICO

MICROSCOPIO
ELECTRNICO DE BARRIDO

Otros microscopios

Microscopio de Fuerza Atmica

(AFM, de sus siglas en ingls
Atomic Force Microscope): Es de
tipo mecano-optico.

Microscopio confocal: De tipo

optico.

Otros microscopios
Microscopio de Fuerza Atmica (AFM, de
sus siglas en ingls Atomic Force
Microscope):

Es un instrumento mecano-ptico capaz de detectar

fuerzas del orden de los piconewtons. Al rastrear una
muestra, es capaz de registrar continuamente
su topografa mediante una sonda o punta afilada de
forma piramidal o cnica. La sonda va acoplada a un
listn o palanca microscpica muy flexible de slo unos
200 m
Es similar al Microscopio de Efecto Tnel, pero a
diferencia de aquel, las muestras pueden ser materiales
no conductores (muestras biolgicas).

MICROSCOPIA DE FUERZA
ATOMICA (AFM)

- Para saber ms:

http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_fuerza_at%C3%B3mica

MICROSCOPIA DE FUERZA
ATOMICA (AFM)

Microscopio ptico confocal:

Microscopio confocal:
- Es unmicroscopioque emplea una tcnica ptica de
imagen para incrementar elcontrastey/o reconstruir
imgenes tridimensionales.
Utiliza iluminacin
puntual y un "pinhole"
espacial (colimador de
orificio delimitante) en
un plano ptico
conjugado frente al
detector para eliminar
la informacin que
est fuera del plano
focal.
La muestra debe ser
fluorescente.

Microscopio confocal:
-Slo la luz que est dentro de este plano puede ser
detectada, de modo que la calidad de imagen es
mucho mejor que las de campo amplio.
Puesto que slo se
ilumina un punto cada
vez en el microscopio
confocal, se requiere una
exploracin (scanning) en
el espcimen para
obtener imgenes bi o
tridimensionales.
Se impone la
Microscopa Confocal
Laser de Barrido.

Microscopio confocal:
(a) grano de polen
(b) muestra de hgado de
ratn
(c) corte grueso de
corteza cerebral de rata.
Se emplearon varios marcadores
fluorescentes.

(d) auto fluorescencia de

una porcin de raz de
helecho.

Tomado de Claxton N, Fellers T,

Davidson M. (2008). Laser Scanning
Confocal Microscopy (119). En
http://www.medic.ula.ve/histologia/ane
xos/microscopweb/MONOWEB/capitul
o6_7.htm

Microscopio confocal:
Micrografas comparativas entre las tcnicas de fluorescencia con
iluminacin convencional o de campo amplio (serie superior, a, c, e) y la
iluminacin en microscopa confocal (serie inferior b, d, f).

Izquierda:
hipotlamo de
ratn
Centro: msculo
liso de rata.
(marcadas con
diversos
fluorocromos)

Derecha: Grano
de polen de
girasol,
autofluorescente

Microscopia confocal en dermatologa y oftalmologa.

http://www.grupodedermatologia.es/web/detalleCV/116/6/microscopia_conf
ocal_laser_examen_lunares_cancer.aspx
http://www.dermatolarg.org.ar/index.php/dermatolarg/article/viewArticle/6
32
http://www.actasdermo.org/es/aplicaciones-clinicas-microscopia-confocalreflectancia/articulo/13125016/
http://www.oftalmo.com/sco/revista-22/22sco03.htm

Microscopio de fuerza atmica:

Imagen tomada con
microscopio de fuerza
atmica:
Antibiticos sobre la
superficie de clulas
sanguneas humanas
(glbulos rojos).

M.E DE BARRIDO

Glbulo rojo

M.E. DE BARRIDO

Glbulo blanco

M.E. DE TRASMISIN

Bacilos en divisin

Microscopio ptico

Extensin sangunea: Hemates y leucocitos

FIN
Para saber ms:
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo6_7.htm