Introduo

Processos Bioqumicos So processos que utilizam reaes

bioqumicas ou biomolculas no preparo de produtos de
interesse econmico. Atualmente utilizado o conceito de
biotecnologia, considerado mais amplo.
Biotecnologia Segundo a Federao Europia de
Biotecnologia a biotecnologia uma cincia interdisciplinar, que
faz uso integrado da bioqumica, microbiologia e engenharia
qumica para atingir a aplicao tecnolgica das capacidades

Essa definio interessante, porem no engloba outros aspectos da biotecnologia,

como a agronomia, medicina e meio ambiente/ecologia.
No curso ser discutido o uso da biotecnologia para a obteno de substncias
qumicas, produtos farmacuticas e alimentos.
Na tabela abaixo so mostrados alguns produtos obtidos por biotecnologia. Esses
produtos podem ser metabolitos dos microorganismos/clulas ou produtos de
biotransformao por -os.
Qumicos

Farmacuticos

Alimentos

Solventes

Antibiticos

Bebidas Alcolicas

cidos
orgnicos

Vitaminas

Laticnios

Polmeros

Vacina

Vinagres

Detergentes

Hormnios

Inseticidas

Nos produtos qumicos e farmacuticos pode haver uma concorrncia entre

processos qumicos/biotecnologicos, como na produo de etanol.
Na vitamina A era utilizado um processo biotecnologico, que foi substituido por
processo qumico e atualmente h a tendencia a utilizar um novo processo
biotecnologico.

Microorganismos(-os) de uso industrial

Tradicionalmente -os so utilizados pela industria de biotecnologia.
Bactrias So -os procariontes, ou seja, entre outras caractersticas no
apresentam uma membrana separando o ncleo do material citoplasmtico.
Seu tamanho celular pequeno (mx. 10mm), levando a uma tima relao
rea volume, facilitando as trocas com o meio e tornando seu metabolismo de
um modo geral muito acelerado. Apresentam parede celular e membrana
plasmtica.

Bactrias se dividem por cissiparidade, no ocorrendo diviso sexual. Para

compensar essa desvantagem, as bactrias podem trocar informao gentica
umas com as outras utilizando plasmideos, que so fragmentos de DNA
circular.

Morfologia Bacteriana

(1) cocos, ou bactrias esfricas. Os cocos podem se organizar como

(2) diplocos (5) sarcinas (6) estafilococos (7) estreptococos. Cocos que
no apresentam um formato perfeitamente esfrico so (3) gonococos
(4) Pneumococos (8) bacilos ou bactrias cilndricas (9) vibrios (10) e
(11) espirilos.

Colorao de gram

Colorao de Gram uma tcnica de colorao para diferenciao de

microorganismos atravs das cores, para serem observados em microscpio
ptico. A tcnica recebeu este nome em homenagem ao mdico
dinamarqus Hans Cristian Joaquim Gram.
Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactrias, aps serem
tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas. Assim, as
que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam
vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A tcnica de Gram
fundamental para a taxonomia e identificao das bactrias, sendo muito
utilizada atualmente, como tcnica de rotina em laboratrios de
bacteriologia.

Parede Celular

Principais doenas causadas por

bactrias

Tuberculose: causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis.

Hansenase (lepra): transmitida pelo bacilo de Hansen (Mycobacterium lepra).
Difteria: provocada pelo bacilo diftrico.
Coqueluche: causada pela bactria Bordetella pertussis.
Pneumonia bacteriana: provocada pela bactria Streptococcus pneumoniae.
Escarlatina: provocada pelo Streptococcus pyogenes.
Ttano: causado pelo bacilo do ttano (Clostridium tetani).
Leptospirose: causada pela Leptospira interrogans.
Tracoma: provocada pela Chlamydia trachomatis.
Gonorria ou blenorragia: causada por uma bactria, o gonococo (Neisseria
gonorrhoeae).
Sfilis: provocada pela bactria Treponema pallidum.
Meningite meningoccica: causada por uma bactria chamada de
meningococo.
Clera: doena causada pela bactria Vibrio cholerae , o vibrio colrico.
Febre tifide: causada pela Salmonella typhi.

Fungos
Fungos So microorganismos eucariontes (ncleo separado por membrana).
Seu tamanho maior que as bactrias (min. 10mm), tendo um metabolismo
mais lento devido a menor relao rea/volume. Apresentam parede celular
e membrana citoplasmatica. No microscpio h uma grande diversidade de
formas.
Fungos: vegetais ou animais?
Em 1969 passaram a ser classificados no Reino Fungi
Estima-se que existam mais de 1,5milhes de espcies
Imprtancia nas diversas reas

Classificao do ponto de vista macroscpico:

Bolores Formam os chamados miclios, no crescendo em meio liquido

Leveduras So fungos que crescem bem em meio liquido, ou seja,
submersos.
Os fungos podem se reproduzir utilizando reproduo assexuada
como as bactrias ou reproduo sexuada, passando por clulas com
metade do material gentico original.
Fungos e bactrias so de um modo geral bastante flexveis quanto
aos seus aspectos nutricionais, podendo se adaptar a uma grande
variedade de fontes de alimento. Porm no so autotrficos, ou seja, no
conseguem aproveitar a energia da luz do sol como plantas e algas.

Bolores

So fungos multicelulares,
filamentosos, constitudos por hifas
(miclio)
Hifas cenocticas ou septadas, com
espessura varivel (2 a 15 m)
Hifa vegetativa e hifa reprodutiva
Hifas hialinas e hifas escuras
Hifa em raquete, nodular ou em espiral

Hifas - Bolores

Leveduras

So fungos unicelulares, arredondados ou ovais, com dimetro entre 3 e 10

m

As leveduras se apresentam como clulas isoladas e algumas podem

formar pseudo-hifas
A prpria clula desempenha as funes vegetativas e reprodutivas

Cogumelos
nome comum dado s frutificaes de alguns fungos,pertencentes ao Reino
Fungi. Possuem corpo frutfero composto por uma base.

Podem ser:
Comestveis
Txicos
Medicinais
Alucingenos

Importncia dos Fungos

Outros microrganismos
Clulas de mamferos Fora os fungos e bactrias, podem ser
utilizadas em processos industrias. So utilizadas linhagens de
clulas que conseguem viver e se reproduzir bem fora do seu
organismo original. So muito maiores (atingem at 100mm) e mais
exigentes que os m-os do ponto de vista nutricional, apresentando
um metabolismo mais lento. So utilizadas na produo de vrus e
na produo de protenas que no podem ser produzidas por
outros meios.

Vrus So as formas vivas mais simples. Como sua bioqumica muito limitada
sempre tem que se reproduzir utilizando uma clula hospedeira. Tem muita
importncia em medicina, veterinria e agronomia. Industrialmente so produzidos
para a preparao de vacinas e kits para diagnstico clinico.

Algas e protozorios So utilizados em processos muito especficos.

Seleo de microrganismos

Os microrganismos so selecionados tradicionalmente a partir de

fontes naturais. Nessa fonte (solo, por exemplo), o m-o de interesse
se encontra contaminado com outras espcies. Para isola-lo so
necessrios procedimentos especficos.
Mtodo de diluies : nesse mtodo a mistura de m-os diluda de
forma seqencial, diminuindo a concentrao de m-os presentes.
Essas diluies so inoculadas em meio slido. Cada nova colnia
formada em meio slido tende a se apresentar como uma espcie
isolada.
Meios de cultura Como ser visto mais a frente, os m-os
apresentam exigncias nutricionais diferentes. Utilizando-se meios
de crescimento seletivos, pode-se enriquecer o material no
microorganismo de interesse.
Uso de inibidores Como ser discutido mais adiante,
determinadas substncias qumicas podem inibir seletivamente o
crescimento de microorganismos, diminuindo a contaminao por
inibir algumas espcies presentes no meio.

Melhoramento de -os

Como j foi dito, os primeiros m-os foram isolados de fontes

naturais. Os rendimentos de produtos obtidos, porm era baixo.
Logo foi determinado que um dos fatores que limitava o rendimento
era o prprio m-o . Por isso foram desenvolvidas tcnicas para
preparar linhagens mais produtivas do m-o.
Como j foi dito, fungos podem se reproduzir de forma
sexuada. Uma forma de obter linhagens mais produtivas foi cruzar
linhagens que apresentavam caractersticas desejadas, para obter
uma nova linhagem que englobasse as duas caractersticas. Por
exemplo, cruzar uma linhagem que cresce rpido, mais com baixo
rendimento, com uma de crescimento mais lento, mais com bom
rendimento de produto.
A principal tcnica para produzir m-os mais produtivos foi a
induo de mutaes. As mutaes na verdade so mudanas na
estrutura do DNA induzida por agentes fsicos e qumicos. Seguem
a lgica mostrada na prxima folha.

A mutao um processo que ocorre naturalmente. Em processos de seleo

foram utilizados agentes que apenas induziram que essas mutaes
ocorressem de forma mais rpida. Esses agentes provocam leses na estrutura
qumica do DNA. As clulas tem enzimas que so especializadas em reparar
essas leses, s que no processo de reparo podem ocorrer erros nas
seqncias de bases nitrogenadas, levando a produo de protenas mutantes

Informao

Funcionalidade

DNA

Protenas

Metabolismo
Piora - descarte

Mutao

DNA

Protenas

Mutante

Mutantes

Mudanas
no
Metabolismo
Melhora

Exemplos de algumas leses qumicas que podem ser utilizadas

para induzir mutaes. A deaminao conseguida utilizando-se
nitritos, que em meio fisiolgico esto em equilbrio com o cido
nitroso. Vrios reagentes eletrofilicos podem ser utilizados, como o
iodometano e as mostardas nitrogenadas. As radiaes so Ultra
violetas e raio X.
A mutao foi utilizada com xito para desenvolver cepas altamente
produtivas de antibiticos e vitaminas, entre outros. Apesar desses
sucessos, o processo apresenta vrios inconvenientes. No h
controle sobre as mutaes, sendo que a maioria dos mutantes no
vivel. Por esse motivo, o custo elevado, o tempo longo e a
principio no h uma garantia de sucesso.

Manipulao gentica de -os

O uso de tcnicas de mutao no desenvolvimento de m-os mais produtivos

comeou em torno de 1940. No final da dcada de 1960 o conhecimento
acumulado de gentica microbiano foi ajudado pela descoberta de enzimas que
podiam manipular de forma controlada o DNA, iniciando a era da engenharia
gentica.
O fundamento dessa tcnica o uso dos plamideos, fragmentos de DNA
circular que as bactrias podem trocar umas com as outras. Esses fragmentos
podem ser abertos com enzimas seletivamente, e novos fragmentos de DNA
contendo genes para a preparao de protenas de interesse. O esquema abaixo
mostra de forma resumida como feito o processo.
Gene A
Gene B
Gene A

Gene A

Gene B

Plasmideo

Gene A

Gene B

Plasmideo

Plasmdeos
Plasmdeos so molculas de DNA extra cromossomais que podem ser
passados de bactria bactria, carregando consigo informaes genticas (e
at mesmo novos genes). Essas molculas extra cromossmicas podem ter um
baixo ou alto peso molecular, fator este que ir determinar o nmero total de
cpias que podem ser feitas a partir de um nico plasmdeo. Esta relao
inversamente proporcional, ou seja, quanto maior o peso molecular menor o
nmero de cpias a serem feitas. Existem alguns tipos de plasmdeos:

O plasmideo codifica vrios genes, como o gene A. Utilizando-se enzimas o

plamideo pode ser aberto, um novo gene B introduzido e o plasmideo pode
ser fechado e inserido na bactria. A bactria ir produzir a protena
codificada em B, que pode ser o produto de interesse. Outra possibilidade
que a protena seja uma enzima que ir produzir um metabolito que o
produto de interesse.

Caracterizao de -os

A caracterizao de um microorganismo purificado e selecionado importante para

demonstrar que no ocorreu uma contaminao do microorganismo por outra espcie e
o m-o selecionado manteve sua caractersticas. Pode ser feita de vrias maneiras.
Provas bioqumicas : Utilizando-se alguns testes que so sensveis ao metabolismo do
m-o, pode-se verificar se a cepa escolhida ou no. O inconveniente destes mtodos
o tempo demorado para a obteno de resposta.
Morfologia/cor das colnias em meio slido
Testes Imunoqumicos : Quando inoculados em animais, m-os estimulam a produo de
protenas especificas pelo sistema imunolgico. Essas protenas so chamadas de
anticorpos e reconhecem seletivamente o m-o que foi inoculado. Desta forma existem
anticorpos comerciais que reconhecem determinados m-os, e produzem reao colorida
na presena deles. Laboratrios tambm podem preparar seus prprios anticorpos,
precisando ter animais disponveis. Esses mtodos so rpidos, sensveis e seletivos. O
grande inconveniente que os reagentes so caros.
Anlise de Protenas totais : Uma das caractersticas de uma cepa de m-o o perfil
eletrofortico de protenas celulares totais. Se a cepa permaneceu estvel, esse perfil
no varia. A estabilidade pode ser determinada comparando o perfil da cepa em anlise
com uma cepa de referncia.
Anlise de isoenzimas: Teste semelhante a analise de protenas totais, s que na
eletroforese se utiliza um reagente que desenvolve cor somente na presena de
determinada enzima. O perfil eletrofortico de uma cepa dessa forma um marcador de
sua identidade. Tem uma sensibilidade maior que o anterior.
Anlise gentica: O DNA do microorganismo pode ser analisado por eletroforese aps
extrao e fragmentao com enzimas. O perfil eletrofortico deve ser o mesmo de uma
cepa de referncia.

Armazenagem de -os
Os m-os podem ser mantidos de duas formas principais
Repiques sucessivos : Por esse mtodo o m-o
transferido de um meio de crescimento para outro, aps
um intervalo de tempo. Esse mtodo antigo e tem
vrias desvantagens. Durante a manipulao
h
sempre o risco de contaminao. O m-o pode sofrer
mutaes ao longo do tempo.
Liofilizao : Nesse mtodo uma amostra de m-o
congelada a gua presente removida por vcuo
molecular. desta forma uma secagem frio. A
remoo do excesso de gua e a reduo de
temperatura contribuem para estabilizar o m-o, podendo
esse ser guardado por longo tempo em meio
refrigerado, como freezer e nitrognio lquido.

Fornecimento de -os de referencia

ATCC American Type Culture Collection

Maior coleo de m-os do mundo. Fornece

cepas de referencia.
Fora a ATCC as empresas multinacionais
mantm suas prprias colees, com cepas
geneticamente manipuladas de alta
produtividade. O acesso a essas cepas
restrito por razes de segurana industrial.
INCQS Fiocruz

Fornece cepas de referncia no Brasil.