ENZIMAS

Eng. Qumica Gisanara Dors

Estgio de Docncia

ENZIMAS - HISTRICO
Catlise biolgica incio sc. XIX
digesto da carne: estmago;
digesto do amido: saliva.
Dcada de 50
Louis Pasteur - concluiu que a fermentao do
acar em lcool pela levedura era catalisada por
fermentos = enzimas.
Eduard Buchner (1897)
extratos de levedo podiam fermentar o acar at
lcool;
enzimas funcionavam mesmo quando removidas
da clula viva.

ENZIMAS - HISTRICO
James Sumner (1926)
Isolou e cristalizou a urease;
Cristais eram de protenas;
Postulou que todas as enzimas so protenas.
John Northrop (dcada 30)
Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas;
Dcada de 50 sc. XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas;
Ficou evidenciado carter protico.
Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.

ENZIMAS

Aminocidos:
H

Definio:
Catalisadores biolgicos;
R
C*
COOH
Longas cadeias de pequenas molculas
chamadas aminocidos.
NH2
Funo:
Viabilizar a atividade das clulas, quebrando
molculas ou juntando-as para formar novos
compostos.
Com exceo de um pequeno grupo de
molculas de RNA com propriedades catalticas,
chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so
PROTENAS.

ENZIMAS PROTENA
Classificao protenas
Protenas globulares
Protenas fibrosas
Estrutura das protenas
Primaria

Secundaria

Terciria

Quaternria

ENZIMAS
Protenas globulares
Estrutura terciria

Protenas com alto peso

molecular, maioria entre 15 a
1000 Kilo Daltons Unit (KD)
OBS: 1 Dalton = 1 unidade de
peso molecular (AMU)

ENZIMAS ESTRUTURA
Estrutura
Enzimtica

Holoenzima
Protena

Ribozimas
RNA

Apoenzima ou
Apoprotena

Cofator

Pode ser:
on inorgnico
molcula orgn

Coenzima
Se covalente
Grupo Prosttico

ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS

Apresentam alto grau de especificidade;
So produtos naturais biolgicos;
Reaes baratas e seguras;
So altamente eficientes, acelerando a
velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida);
So econmicas, reduzindo a energia de
ativao;
No so txicas;
Condies favorveis de pH, temperatura,
polaridade do solvente e fora inica.

ENZIMAS
Comparao das enzimas com catalisadores qumicos.
Caracterstica

Enzimas

Catalisadores Qumicos

alta

baixa

Natureza da estrutura

complexa

simples

Sensibilidade T e pH

alta

baixa

suaves

drstica (geralmente)

alto

moderado

batelada

contnuo

Consumo de energia

baixo

alto

Formao de subprodutos

baixa

alta

difcil/cara

simples

Atividade Cataltica (temperatura ambiente)

alta

baixa

Presena de cofatores

sim

no

Estabilidade do preparado

baixa

alta

Energia de Ativao

baixa

alta

alta

baixa

Especificidade ao substrato

Condies de reao (T, P e pH)

Custo de obteno (isolamento e purificao)
Natureza do processo

Separao catalisador/ produtos

Velocidade de reao

ENZIMAS NOMENCLATURA
Sculo XIX - poucas enzimas identificadas
- Adio do sufixo ASE ao nome do substrato:
* gorduras (lipo - grego) LIPASE
* amido (amylon - grego) AMILASE
- Nomes arbitrrios:
* Tripsina e pepsina proteases

10

ENZIMAS NOMENCLATURA
1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio
Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e
classificar.
Cada enzima cdigo com 4 dgitos que
caracteriza o tipo de reao catalisada:
1 dgito - classe
2 dgito - subclasse
3 dgito - sub-subclasse
4 dgito - indica o substrato

11

ENZIMAS CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
1. Oxido-redutases
1.1.atuando
1.2.atuando
1.3.atuando
1.4.atuando
1.5.atuando
1.6.atuando

(reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons)

em CH-OH
em C=O
em C=Oem CH-NH2
em CH-NHem NADH, NADPH

2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas)

2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre
3.Hidrolases (reaes de hidrlise)
3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos

12

ENZIMAS CLASSIFICAO
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua,
amnia e gs carbnico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros )
5.1.racemases
6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre
duas pr-existentes, sempre s custas de energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C

13

ENZIMAS CLASSIFICAO
Subclasses

14

ENZIMAS NOMENCLATURA
ATP + D-Glicose

ADP + D-Glicose-6-fosfato

IUB - ATP:glicose fosfotransferase

E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase
7 - subclasse - Fosfotransferases
1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato

Nome trivial: Hexoquinase

15

ENZIMAS CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas
Catalase

H2O2
Ex: Decomposio do H2O2
Condies da Reao

H2O +

O2

Energia livre de Ativao

KJ/mol
Kcal/mol

Velocidade
Relativa

Sem catalisador

75,2

18,0

Platina

48,9

11,7

2,77 x 104

Enzima Catalase

23,0

5,5

6,51 x 108

16

ENZIMAS CATALISADORES
No so consumidos na reao

H2O2

Catalase

E+S

H2O + O2

E+P

17

ENZIMAS CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes

1 molcula de Catalase

decompe
5 000 000 de molculas
de H2O2
pH = 6,8 em 1 min

Nmero de renovao = n de molculas de

substrato convertidas em produto por uma nica

molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.

18

ENZIMAS CATALISADORES

Energia

No alteram o estado de equilbrio

Abaixam a energia de ativao;
Keq no afetado pela enzima.
No apresenta efeito termodinmico global
G no afetada pela enzima.

Diferena entre
a energia livre
de S e P

Energia de ativao sem enzima

Energia de ativao com

enzima

Caminho da Reao

19

ENZIMAS
COMPONENTES DA REAO

E+S

ES

Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima

P+E

20

ENZIMAS STIO ATIVO

Regio da molcula enzimtica
da reao com o substrato.

que participa

Pode possuir componentes no proticos:cofatores.

Possui aminocidos auxiliares e de contato.

Poro protica
Cofator
APOENZIMA

Ativador:ons inorgnicos
que condicionam a ao
cataltica das enzimas. Fe+
Coenzima: molcula
orgnica complexa.NAD+

HOLOENZIMA
Grupamento
prosttico

21

ENZIMAS COFATOR
Algumas enzimas que contm ou necessitam
de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA

COFATOR

PEROXIDASE

Fe+2 ou Fe+3

CATALASE
CITOCROMO OXIDASE

Cu+2

LCOOL DESIDROGENASE

Zn+2

HEXOQUINASE

Mg+2

UREASE

Ni+2

22

ENZIMAS COENZIMAS
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
- transportadoras de hidrognio
- transportadoras de grupos qumicos

Transportadoras de hidrognio

23

ENZIMAS COENZIMAS
Transportadoras de grupos qumicos

24

ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das

enzimas originou Chave-Fechadura , que
considera que a enzima possui sitio ativo complementar
ao substrato.

25

ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o o

substrato sofrem conformao para o encaixe. O
substrato distorcido para conformao exata do
estado de transio.

26

ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA
Enzyme Commission: uma unidade (U) de
atividade a quantidade de enzima que catalisa a
transformao de 1 micro mol de substrato ou a
formao de 1 micro mol de produto por minuto.
Expressa: U = micro moles produto/minuto
Atividade especfica = U/mg de protena
Enzima pura, condies que permita a velocidade da
reao seja mxima o substrato [S] de modo a
permitir que toda a enzima [E] [ES].
V = K[E] = K[ES]

27

ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA

Fatores que alteram a velocidade de reaes

enzimticas:
- pH;
- temperatura;
- concentrao das enzimas;
- concentrao dos substratos;
- presena de inibidores.

28

ENZIMAS
INFLUNCIA DO PH
O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes
no estado de ionizao dos componentes do sistema
medida que o pH varia.
Enzimas grupos ionizveis, existem em estados
de ionizao.

29

ENZIMAS
INFLUNCIA DO PH
A estabilidade de uma enzima ao pH depende:
- temperatura;
- fora inica;
- natureza qumica do tampo;
- concentrao de ons metlicos contaminantes;
- concentrao de substratos ou cofatores da enzima;
- concentrao da enzima.
ENZIMA

pH TIMO

Pepsina

1,5

Tripsina

7,7

Catalasa

7,6

Arginasa

9,7

Fumarasa

7,8

30

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

temperatura dois efeitos ocorrem:

(a) a taxa de reao aumenta, como se observa na
maioria das reaes qumicas;
(b) a estabilidade da protena decresce devido a
desativao trmica.
Enzima temperatura
tima para que atinja sua
atividade mxima, a
temperatura mxima na
qual a enzima possui uma
atividade cte. por um
perodo de tempo.

31

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

O efeito da temperatura depende:

- pH e a fora inica do meio;
- a presena ou ausncia de ligantes.
Acima desta temperatura, o velocidade de reao
devido a temperatura compensado pela perda de
atividade cataltica devido a desnaturao trmica.
ENZIMA

TEMPERATURA TIMA (C)

Pepsina

31,6

Tripsina

25,5

Urease

20,8

32

ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA

Ea Lei de Arrehenius
k Ae Ea / RT
Ea 1
log k
log A
2,3RT T

Ea pode ser determinada

medindo-se a cte de
velocidade da reao em
temperaturas.
Curva A: grfico usual.
Curva B: o grfico mostra
uma variao definida na
inclinao, se em
determinada temperatura,
uma etapa se torna
limitante da velocidade.
Curva C: uma queda
brusca na curva indica
inativao enzimtica.

33

ENZIMAS
INFLUNCIA DA [E]
Velocidade de transformao do S em P qtidade
de E.
Desvios da linearidade ocorrem:
- Presena de inibidores na soluo de enzima;
- Presena de substncias txicas;
- Presena de um ativador que dissocia a
enzima;
- Limitaes impostas pelo mtodo de anlise.
Recomenda-se:
- Enzimas com alto grau de pureza;
- Substratos puros;
- Mtodos de anlise confivel.

34

ENZIMAS
INFLUNCIA DA [S]
[S] varia durante o curso da reao medida que S
convertido em P.
Medir Vo = velocidade inicial da reao.
[E] = cte.

vo

[S] pequenas Vo linearmente.

[S] maiores Vo por incrementos
cada vez menores.
Vmax [S] Vo insignificantes.
Vmax atingida E estiverem na
forma ES e a [E] livre insignificante,
ento, E saturada com o S e V no
com de [S].

Vmax

[S]

35

ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Victor Henri (1903): E + S ES

1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra

E+S

K1
K-1

Etapa rpida

ES

Kp

E+P

Etapa lenta

36

ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Cintica Enzimtica

Determinar as constantes de afinidade do S e

dos inibidores;
Conhecer as condies timas da catlise;
Ajuda a elucidar os mecanismos de reao;
Determinar a funo de uma determinada
enzima em uma rota metablica.

37

ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA

v=
v = Vmax [S]
Km
1

Vmax [S]
Km + [S]
v = Vmax
2

Vmax
2

1- [S] Km>>[S]
2- [S] [S]>>Km

3- v = Vmax
Km

[S]

38

ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Afinidade da enzima ao substrato.
Km depende:
aspectos especficos do mecanismo de reao;
n de passos da reao;
velocidades relativas dos passos individuais.
ENZIMA

SUBSTRATO

Km (mM)

Catalase

H2O2

25

Hexoquinase

ATP

0,4

Quimotripsina

D-Glicose

0,05

D-Frutose

1,5

Gliciltirosinilglicina

108

N-benzoiltirosinamida

2,5

39

ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Vmax:
E+S
E+S

K1
K-1

ES

K1
K-1

Vmax = K3[Et]

ES

Kp

E+P
K2

EP

K-2
V

Vmax = Kp[Et]
K3

E+P
Vmax

[2E]

Vmax

[E]

[S]

40

Enzimas
ordem da reao
Quando a formao de
[S] [S] <<Km
P for proporcional [S]
v = Vmax [S]
v = K[S]
a velocidade da reao
Km
de 1a ORDEM
V

Quando a velocidade
da reao independe
da [S] a reao de
ORDEM ZERO

[S] [S]>>Km
[S]

v = Vmax

41

ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico dos Recprocos de Lineweaver-Burk
1
v

Km
Vmax [S]

1
Vmax

1
v

Inclinao =

1
Vmax
-1
Km

1
[S]

Km
Vmax

42

ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Eadie-Hofstee
v
vV
K
max
m [S]

Vmax
v

Inclinao =

-Km
Vmax
Km
v
[S]

43

ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Hanes-Woolf
K
[S]
1
m

[S]
v
V
V
max
max

[S]
v

Inclinao =

1
Vmax

Km
Vmax
-Km

[S]

44

ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico da equao integrada de Michaelis-Menten
[S]o Vmax
2,3
1 ([S]o [S])
log

t
[S]
Km Km
t
Vmax
Km
2,3log[S]o
t
[S]

Inclinao =

-1/Km

Vmax
([S]o-[S])
t

45

ENZIMAS
INIBIO ENZIMTICA
Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma
reao enzimtica.

INIBIDORES

REVERSVEIS

COMPETITIVOS

IRREVERSVEIS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

46

ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E
livre.
I anlogo no metabolizvel, derivado de um S
verdadeiro, S substituto da E ou um P da reao.
I compostos com estrutura
molecular lembra S

afinidade da enzima pelo

substrato

[substrato] necessria para

obter a mesma [ES]
Km aparente
da enzima

47

ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
ES

K2

E+P

E+S

K1

I
KI

EI

[ E ][ I ]
KI
[ EI ]
Vmax [ S ]
v
[I ]
K m (1
) [S]
KI

Michaelis-Menten

Km
1
1
[I ] 1

(1
)
Lineweaver-Burk
v Vmax Vmax
K I [S]

48

ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA

1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

49

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente,

aleatria e independentemente em um stio que lhe
prprio.
I no tem semelhana
estrutural com o S
[substrato] no diminui a
inibio
Km da enzima NO se altera
Vmax na presena do
inibidor

50

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

E+S
+
I

KS

KI

ES
+
I

K2

KI

EI + S

KS

E+P
[ E ][ I ] [ ES ][ I ]
KI

[ EI ]
[ EIS ]

EIS

Michaelis-Menten

Lineweaver-Burk

Vmax [ S ]
[I ]
[I ]

Km 1
) [ S ](1
)
KI
KI

1 Km
[I ] 1
1
[I ]

(1
)

(1
)
v Vmax
K I [ S ] Vmax
KI

51

ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA

1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

52

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em
um stio prprio, ao complexo ES.
I no tem semelhana
estrutural com o S
I favorece a formao do ES
Km e Vmax da enzima

53

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA

E+S

KS

ES
+
I

K2

KI

EIS
Michaelis-Menten

Lineweaver-Burk

E+P
[ ES ][ I ]
[ EIS ]
Vmax
[S]
[I ]
1
Ki
v
Km
[S]
[I ]
1
KI
KI

Km 1
1
1
[I ]

(1
)
v Vmax [ S ] Vmax
KI

54

ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA

1- sem inibidor.
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]

55

ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
I se combina com um grupo funcional, na molcula
da E, que essencial para sua atividade.
Podem promover a destruio do grupo funcional
Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.
Vmax parte da E completamente removida do
sistema e Km permanece a mesma.

E+S
+
I
EI

K1

ES

K2

E+P

56

ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
Graficando Vmax vs a quantidade total de E adicionada
ao meio de reao em presena de I.

57

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
No obedecem a cintica de Michaelis-Menten.
Controlam a etapa limitante em uma cadeia de
reaes enzimticas.
Tem sua atividade cataltica aumentada ou diminuda
em resposta a determinados sinais, molculas
sinalizadoras (pequenos metablicos ou cofatores).
Classes de enzimas reguladoras:
Enzimas alostricas;
Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel.

58

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
Enzimas alostricas
Funcionam atravs da ligao no-covalente e reversvel
de um metablito regulador chamado modulador;
Moduladores podem ser inibidores ou ativadores;
So maiores e mais complexas, possuem duas ou mais
cadeias polipeptdicas.
Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel
Grupos qumicos so ligados covalentemente e
removidos da enzima reguladora por enzimas , podem
ser: fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.

59

ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS

1- Comportamento tipo Michaelis-Menten.

2- Comportamento Alostrico.

60

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Enzimas Livres versus Enzimas Imobilizadas

Livres

Imobilizadas

Instabilidade

Reutilizao

Rpida perda da
atividade cataltica

Maior estabilidade
(faixas mais amplas de
pH e temperatura)

No podem ser
recuperadas

Menor interferncia de
inibidores e/ou
ativadores

61

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

A enzima livre imobilizada em um suporte inerte

como vidro poroso, bentonite, etc.

O principal interesse em imobilizar uma enzima

obter um biocatalisador com atividade e
estabilidade que no sejam afetadas durante o
processo, em comparao sua forma livre.

62

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

63

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Vantagens da utilizao de enzimas imobilizadas

- As enzimas podem ser reutilizadas
- Os processos qumicos podem ser continuamente operados e
prontamente controlados
- Os produtos podem ser facilmente separados
- Os problemas com elfuentes e manipulaes de materiais so
minimizados
- A reprodutibilidade do procedimento analtico pode ser
aumentada
- Em alguns casos, as propriedades enzimticas (atividade e
estabilidade operacionais) podem ser alteradas

64

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Propriedades de Enzimas Imobilizadas

Efeitos sobre a atividade enzimtica:
Modificao da estrutura tridimensional;
Modificao do microambiente;
Fenmenos de difuso no interior do complexo.

65

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Medida da atividade:
Atividade da enzima imobilizada mais fraca que
a das enzima nativa, mas a estabilidade maior.
Influencia das condies operacionais:
pH e temperatura desnaturao parcial ou
total da protena;
imobilizada resistem melhor a variaes de pH
e tratamentos trmicos;
Obs: origem da enzima, suporte utilizado e mtodo de fixao

66

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Aplicaes de Enzimas Imobilizadas

Aplicaes analticas:
Facilita automatizao das cadeias de dosagem e
simplifica as manipulaes.
Biossensores:
Imobilizao de colinesterase e anticorpos
sobre cristal piezeltrico utilizadas na
deteco de pesticidas organofosforados;
Reatores para anlise cromatogrfica;
Kits para titulaes e imunoensaios.

67

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Indstria de alimentos:
Glicose isomerase fixada para a produo de
xaropes com alto teor de frutose;
Celulase Converso de celulose em acares
solveis;
Imobilizao de fermento de po (Sacharomices
cerevisae) lcoois enantiomericamente puros.
Uso Industrial:
Fonte para produo de penicilinas sintticas.

68

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Lipases imobilizadas:
Imobilizadas em organo-gel utilizadas na esterificao
do cido olico com n-pentanol;
Imobilizadas em carvo de coco, bauxita e gel de gar
utilizadas na transformao de leo de soja em
biodisel.
Aplicaes na medicina:
Hidrogel contendo enzimas imobilizadas Substrato
presente - converso enzimtica - produto muda a
conformao do hidrogel liberao da droga.

69

ENZIMAS -

IMOBILIZADAS

Em desenvolvimento:
Estudos de filtros que utilizam enzimas
imobilizadas na superfcie do meio filtrante para o
tratamento do ar dos ambientes.
Recentes avanos na imobilizao de enzimas por
argilas, utilizadas em bioremediao.
Estudos em desenvolvimento: imobilizao,
estabilizao e aplicao da enzima esterase, de
rim de porco, na sntese de produtos de interesse
farmacutico.

70

ENZIMAS APLICAES
Permitem s indstrias usarem processos mais
econmicos, diminuindo o consumo de energia e
recursos; mais confiveis e que poluem menos.
So eficientes;
Muito especficas;
Permite produo segura e ambientalmente amigvel.
ENZIMA

Origem vegetal
Origem animal
Origem microbiana

FONTE

APLICAO

Papana

mamo

Ajuda na digesto, Mdica,

bebidas, carnes

Bromelina

abacaxi

Ajuda na digesto, Mdica,

bebidas, carnes

Diastase

malte

Pepsina

mucosa gstrica
suno

Lipase

Candida rugosa

Panificao, xarope
Amaciamento de carne
Tratamento de efluentes

71

ENZIMAS APLICAES
Proteases
Leite: na preparao do leite de soja.
Carnes e Peixes: recuperao de protenas do osso
ou espinha.
Vinhos: clarificao.
Queijo: coagulao da casena.

72

ENZIMAS APLICAES
Lactase
Sorvete: preveno da cristalizao da lactose.
Leite: estabilizao das protenas do leite em
leites congelados por remoo da lactose.
Hidrlise da lactose, permitindo o uso por
adultos deficientes na lactase intestinal e em
crianas com deficincia em lactase congnita.
Rao: converso da galactose em lactose e
glicose.

73

ENZIMAS APLICAES
-amilase
Fermentados: converso do amido a maltose
por fermentao. Remoo da turbidez do amido
Cereais: converso do amido a dextrinas e
maltose.
Chocolate/cacau: liquefao do amido

74

ENZIMAS APLICAES
Peroxidase
Deteriorao - Frutas: contribui na reao de
escurecimento.

Polifenoloxidase
Ch/Caf: desenvolvimento do escurecimento
durante o amadurecimento e fermentao.
Deteriorao - Frutas e Vegetais: reao de
escurecimento e perda de vitaminas.

75

ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em raes para aves.
Enzima

Substrato

Efeitos

Xilanase

Arabinoxilanas

Reduo da viscosidade da digesta.

Glucanases

-glucanos

Reduo da viscosidade da digesta. Menor umidade

na cama.

Pectinases

Pectinas

Reduo da viscosidade da digesta.

Celulases

Celulose

Degradao da celulose e liberao de nutrientes

Proteases

Protenas

Suplementao das enzimas endgenas. Degradao

mais eficiente de protenas.

Amilases

Amido

Suplementao das enzimas endgenas. Degradao

mais eficiente do amido.

Fitase

cido ftico

Melhora a utilizao do fsforo dos vegetais.

Remoo do cido ftico.

Galactosidases

Galactosdios

Remoo de Galactosdios

Lipases

Lipdios e
cidos graxos

Melhora a utilizao de gorduras animais e vegetais

76

ENZIMAS APLICAES
Tratamento de efluentes
Preocupao ambiental desencadeou uma

procura por outras alternativas, as chamadas

"tecnologias limpas.
Enzimas substituir muitos componentes
qumicos utilizados nos processos industriais atuais.

77

ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em tratamento de efluentes.
Enzima e fonte

Poluentes e efluentes

Azorredutase (Pseudomonas luteola)

Indstria de tinta

Catalase (Baccilus sp.)

Remoo de H2O2 presente em efluentes de

branqueamento de tecidos

-glicosidase e Mangans peroxidase

Remoo de corantes azo na industria de alimentos e

da industria txtil

Polifosfatase e Fosfotransferase

Remoo de fosfato biolgico de efluentes

Protease pronase (Pseudomonas aeruginosa)

Inativao de vrus bacterifago Cox A9 de efluentes,

para reutilizao da gua

Naftaleno-dioxigenase

Remoo de naftaleno

Lipase (Penicillium P4)

Remoo do teor de DQO de efluentes de leo de oliva

(Candida rugosa)

Reduo do teor de lipdeos e DQO efluentes avcolas

(pncreas de porco)

Reduo do teor de lipdeos e SS de efluentes da

indstria de derivados lcteos

78

ENZIMAS APLICAES
Industria de lcool;
Industria de detergentes;
Industria txtil;
Industria de papel e celulose;
Curtumes;
Produo de cido ctrico, cido glutmico, insulina,
vacinas, esterodes, vitaminas e antibiticos;
Bioremediao: de polmeros, de hidrocarbonetos e
clorados.

79

ENZIMAS APLICAES
Aplicao da Lipase no tratamento de guas
residurias com elevados teores de lipdeos
JUSTIFICATIVA

Efluentes com teores de gorduras e leos e que

utilizam o processo anaerbio, a 1 etapa m.o. para
degradar as gorduras a produo de enzimas
capazes de hidrolisar os triglicerdeos.
Etapa lenta e nem sempre h m.o. especficos
para a produo de lipase no consegue atingir
bons resultados.
Gorduras se solidificam a baixas temperaturas:
formao de uma camada gordurosa sobre as lagoas,
caminhos preferenciais e arraste da biomassa.

80

ENZIMAS APLICAES
OBJETIVO

Viabilizar tecnicamente a aplicao de um prtratamento enzimtico para remoo de gorduras,

utilizando preparaes de lipases pancreticas fornecidas
pelas empresas Kin Master (LKM) e Nuclear (LNU).
Caracterizar o efluente
Caracterizar as propriedades catalticas das enzimas
Testar tempos de hidrolise na formao de cidos
graxos (2h, 4h, 8h, 12h e 24h)
Avaliar o impacto do tratamento enzimtico por
meio de testes de biodegradabilidade expressa pela
formao de metano, DQO e atividade metanognica.

81

ENZIMAS APLICAES
MATERIAIS E MTODOS

Determinao da Atividade Hidroltica

Substrato:Controle = azeite de oliva
Efluente = efluente de indstria de
produtos avcolas
Tampo e soluo enzimtica (5mg/mL). Branco
Incubados em banho-maria sob agitao
Soluo de etanol:acetona parar a reao
cidos graxos liberados titulados com KOH (0,02M) e
indicador fenolftalena

(Va Vb ).M.106
U
t.m

(moles/mg.min)

82

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

83

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

84

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

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ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

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ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

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ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS

88

ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS
Influncia da concentrao de substrato na atividade
hidroltica das lipase LKM e LNU
900

Lipase Pancreatina (LKM)

Atividade (U)

800

700

600

500

Lipase Pancreatina (LNU)

400

300

10

20

30

40

concentrao (%)

50

60