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UNIVERDIDAD NACIONAL AUTONOMA

DE MEXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA
LABORATORIO DE HEMATOLOGIA

PRUEBA DE COOMBS
MIGUEL NGEL REYES LEN
HERNNDEZ ARAIZA

S. ESCARLETT

VILLA REYES ODRA BERENISSE

EQUIPO: 9
GRUPO: 1802

Prueba de Coombs
Introducida en medicina
transfuncional hasta 1945
por Coombs, Mourant y Race,
quienes demostraron que por
medio de esta se poda
detectar anticuerpos anti-Rh
en el suero.

LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
HUMANA

Es til para poner de manifiesto anticuerpos incompletos o

sensibilizantes.

FINALIDAD
* Deteccin de Anticuerpos Incompletos (IgG)
dirigidos contra antgenos del Glbulo Rojo.

LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA
HUMANA

FINALIDA
D
* Deteccin de Fracciones de Complemento
Fijados en la membrana del Glbulo Rojo.
C3d
C3d

C3b

C3d
C3b

COOMBS Directa
Determina la existencia de glbulos rojos con inmunoglobulinas o
complemento ya pegados a estas.
Empleada en diagnstico de laboratorio para anemia hemoltica,
enfermedades hemolticas del recin nacido, investigacin de reacciones
dudosas en una transfusin y enfermedades autoinmunes.

Fuentes de error de la PAD: falsos positivos y

falsos negativos.

Fasos positivos

Falsos negativos

Contaminacin bacteriana Clulas viejas no permiten

de las muestras o
una buena actividad entre
reactivos.
antgenos y anticuerpos.
Exceso de centrifugacin.
Contaminacin de las
clulas con protenas.
Reticulocitosis.
Elucin del anticuerpo
cuando el procedimiento
no es continuo

COOMBS Indirecta
Determinar la presencia de anticuerpos, localizados en el suero, que no estn
necesariamente en los glbulos del paciente pero pueden estar en otro
individuo.
Empleada para el screening de suero de donantes y pacientes para
anticuerpos irregulares, en pruebas de compatibilidad previas a una
transfusin y para identificar el fenotipo de glbulos rojos.

Enfermedades confirmatorias
con COOMBS
Una prueba de Coombs directa positiva indica la presencia de Ab contra sus
glbulos rojos, pudiendo deberse a:
Anemia hemoltica
Leucemia linfoctica crnica
Eritroblastosis fetal
Mononucleosis infecciosa
Infeccin por micoplasma
Sfilis
Reaccin a transfusincomo la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de
manera impropia

Variables que afectan la sensibilidad

de la prueba de Coombs indirecta
Temperatura de incubacin
Medio de reaccin ( LISS o albmina)
Tiempo de incubacin
Residuo de Solucin salina fisiolgica
Velocidad y tiempo de centrifugacin
Modo de lectura

Anemia Hemoltica Inmunitaria

Se presenta cuando se forman anticuerpos contra los glbulos rojos del
propio cuerpo y son destruidos, esto debido a que el sistema inmunitario
reconoce errneamente a estos glbulos como extraos.
Causada por ciertas sustancias qumicas, drogas o toxinas, por infecciones,
transfusin sangunea de un donante con un tipo de sangre que no es
compatible y ciertos tipos de cncer, complicacin de otra enfermedad,
transfusin de sangre vieja y embarazo.

Una prueba de Coombs indirecta positiva indica la presencia de Ab contra los

glbulos rojos que el cuerpo interpreta como extraos, debido a:
Anemia hemoltica autoinmunitaria o inducida por frmacos
Eritroblastosis fetal
Incompatibilidad sangunea

Enfermedad hemoltica del recin nacido o

Incompatibilidad sangunea materno-fetal
Trastorno sanguneo que se presenta cuando la madre y el producto no
comparten grupos sanguneos, pudindose dar incompatibilidad ABO y Rh,
resultando la causada por ABO en una anemia ligera y la causada por Rh
llegando a ser potencialmente mortal.

En esta enfermedad la madre produce Ab que atacaran a los glbulos rojos

del producto al reconocerlos como extraos siendo la mayor incidencia
cuando la madre es Rh negativo y el padre Rh positivo, heredando el Rh
positivo al producto, este reconocimiento no ocurre a todo lo largo del
embarazo, exclusivamente en el parto cuando la placenta se desprende la
sangre del bebe entra en contacto con la sangre de la madre produciendo
una respuesta lo que complicara un posterior embarazo.

Causa de falsos positivas Coombs indirecta

Contaminacin bacteriana de muestras de sangre y/o reactivos

Hemates previamente sensibilizados in vivo
Contaminacin de solucin salina fisiolgica con slice coloidal
Contaminacin del material de vidrio

Reactivo de COOMBS
Contiene una base de solucin tampn, albumina bovina con azida sdica
como conservador y colorante verde, contiene Ab dirigidos contra IgG, IgM
y/o Complemento formando un sistema antgeno-anticuerpo produciendo una
aglutinacin.

Reactivo

Poliespecifico

Contiene anti-IgG y anti-C3d

Poliespecifico

Contiene anti-IgG, anti-C3d y anti-C3b

Anti-IgG

Contiene anti-IgG sin anti-complemento

Anti-C3d y anti-C3b, anti-C3d

Contiene solo anticuerpos que reaccionan

con uno o varios componentes del
complemento sin actividad anti-globulina

GR al 5%

colocar de una a 2 gotas de sangre en un tubo de ensayo de entre 3 y 5ml y

llenar a 3/4 partes de solucion salina fisiologica y con la pipeta pasteur o
gotero con el que se vacio la gota de sangre homogenizar la solucin hasta
que tome un color rojo sandia.
(4.75 ml. de solucin salina fisiolgica ms 0.25 ml. de eritrocitos)

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Por qu el reactivo de AGH

Poliespecfico debe contener anti-C3d?

Porque es muy importante en la prueba directa ya que se usa en la investigacin

de la anemia hemoltica autoinmune debido a que el C3d puede ser la nica
globulina que pueda detectarse sobre los eritrocitos en dicha enfermedad.

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A qu se debe que en algunos casos se prefiera utilizar un reactivo anti-IgG, a un

reactivo AGH Poliespecfico?
Debido a que no reacciona con el complemento unido a las clulas mediantes
autoanticuerpos fros, que son clnicamente poco significativos.
Para qu se utilizan los reactivos AGH monoespecficos?
Para determinar las protenas responsables del resultado positivo en la prueba
directa de AGH con AGH poliespecfica.

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Qu es el Control Coombs y para que se utiliza?

Son clulas sensibilizadas con anticuerpos anti-D de tipo IgG y se utiliza para
validar todas las pruebas negativas.

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Clulas
sensibilizadasSe preparan
por
In vivo
Reaccin del antgeno
y el anticuerpo se
efecta en el
organismo mientras
ambos estn circulando
Anemia hemoltica
autoinmune
Enfermedad
hemoltica del recin
nacido

In vitro
La sensibilizacin de los
GR se efecta en un tubo
de ensayo. Donde se
mezclan e incuban
eritrocitos adecuados con
el suero en estudio, si en
el suero existen
anticuerpos contra
antgenos presentes en los
eritrocitos se llevara a
cabo la reaccin antgeno
anticuerpo

Mtodo
Fase I

Centrifugar a
1500
revoluciones
por 1 minuto

Agitar el
sedimento
suavemente

Tomar una
muestra de
sangre con
anticoagulante

Agregar 1
gota de GR al
5% y 1 gota
de antisueroD a un tubo

Observar si
hubo
aglutinacin

Lavar GR con
SSF,
centrifugar a
3000
revoluciones
por 5 minutos

Preparar
suspensin de
GR al 5% en
SSF

Realizar 4
lavados

Eliminar
sobrenadante

Fase II

Agregar 2
gotas de
antiglobulina
humana a los
2 tubos

Tubo de la
fase I agitar e
incubar a
37C por 30
minutos

Lavar con
solucin
salina 4 veces

En otro tubo
agregar 2 gotas de
suspensin de GR
al 5% e incubar a
37C por 30
minutos (control
negativo)

Agregar gotas
de solucin
salina para
resuspender

Centrifugar
los 2 tubos a
3000
revoluciones
por 2 minutos

Decantar el
sobrenadante

Centrifugar a
1000
revoluciones
por 1 minuto
Resuspender
y observar si
existi
aglutinacin

Procedimiento de la variante Du en el sistema Rh

FASE I

Interpretacion:

indicaciones

Tubos de 13X100

1
2

3
4

Antgeno D

CONTROL

INTERPRETACION

Antisuero comercial D (Rho)

1 gota

nada

Suspensin de eritrocitos del paciente al

5%

1 gota

nada

Centrifugar el tubo N 1 a 1500 rpm

Interpretar aglutinacin
Si el resultado es Positivo la prueba aqu
termina.

Si el resultado es negativo hay que

continuar Coombs

(+)

(-)*

nada

Rh POSITIVO

Seguir con FASE II*

Procedimiento de la variante Du en el sistema Rh

FASE II

indicaciones
Antgeno CONTROL
D

Tubos de 13X100
1
5
Suspensin de eritrocitos del paciente al 5
*Este
% (la misma muestra que la que utilizada
tubo
en el paso N2)
viene del
paso N4

INTERPRETACION
2
1 gota

6
7
8

Incubar a 37C los tubos N 1 y 2 durante 30 min.

Centrifugar ambos tubos a 3000 revoluciones por 2 min.
Decantar el sobrenadante de ambos tubos.

Resuspender los botones de ambos tubos hasta partes con salina.

10

Centrifugar ambos tubos a 3000 revoluciones por 2 min. (Repetir el paso 8 al 10 tres
veces ms hasta obtener ambos tubos finalmente decantados)

11

Suero de Coombs (Frasco verde)

12

Centrifugar a 3400 revoluciones por 15 min. o a 1000 revoluciones por 1 min.

13

Interpretacin de la Aglutinacin

Rh NEGATIVO

Rh POSITIVO 26

11/15/15

1 gota

(-)

(+)

1 gota

(-)

(-)

Interpretacin de la variante Du en el sistema Rh

Tubo con anti-Rh

11/15/15

Interpretacin

Tubo con control

anti-Rh
-

Rh POSITIVO

Prueba no valida
Bloqueo in vivo por
anticuerpos.
Se debe a la prueba
Rh usando suero
anti-D, de molcula
igG modificado

Rh NEGATIVO

27

11/15/15

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Referencias
Rojas O. Inmunologa de memoria. 3. Ed. Mxico: Mdica Panamericana,
2001
B. Rodak. Hematologa: fundamentos y aplicaciones clnicas. 2ed. Buenos
Aires: Mdica Panamericana,2004
V. Dueas. El Banco de sangre. 2 Ed. Colombia: Universidad del Valle, 2003
A Garibay. Manual de Practicas de Inmunologa. Sonora: UniSon,2006