Monitoreo

de
las
caractersticas
cinticas-enzimticas
de
clulas
perifricas
mononucleares
en
pacientes con cncer de mama
Banca Erika Lizeth
Granados Len Dellanira
Nambo Arcos Mnica Esther
Paniagua Picasso Lilia Eritania
Reyes Cisneros Andrea
Ros Mireles Francisco

El cncer de mama, caractersticas bsicas

Es un tumor maligno que se origina en las
clulas del seno.
Un tumor maligno es un grupo de clulas
cancerosas que pueden crecer invadiendo
los tejidos cercanos o que pueden
propagarse (metstasis) a partes distantes
del cuerpo.
La incidencia es mayor en mujeres pero
tambin los hombres pueden padecerlo.
Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de2 clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Existen
dos
principales:

tipos

Carcinoma ductal (la

mayora son de este
tipo )

Carcinoma lobulillar

*En raras ocasiones, el

cncer de mama puede
comenzar en otras
reas de la mama.
3

Factores de riesgo

Edad y sexo
Ciclo menstrual
Antecedentes familiares
Genes (BRCA1 y BRCA2)
Raza y origen tnico
Consumo de alcohol
Parto
Ingesta de DES (dietilestilbestrol)
Hormonoterapia
Obesidad
Radiacin
Afecciones benignas de los senos
2015

Caractersticas bsicas

Introduccin
El estudio del proceso de oncognesis de cncer
de mama demostr una sucesiva acumulacin de
anormalidades:

genticas, bioqumicas e
inmunes
durante la progresin de la enfermedad antes de
la aparicin de tumores detectables; por lo que se
han realizado grandes esfuerzos para hacer uso
de stas en la deteccin temprana del cncer.
Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de5 clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

 los mtodos de investigacin clnica y

diagnstico (en particular, la mamografa de
cribado) estn limitados en su capacidad de
pronstico debido a importantes tasas de
resultados falsos.

2015

Las condiciones de la membrana y el

citoplasma de linfocitos difieren
estructuralmente y funcionalmente entre
individuos con y sin tumores malignos.
(Microviscosidad intracelular)
Introduccin

Objetivo

Determinar
la
posible
correlacin
entre
las
caractersticas bsicas (Km y Vmax) de las reacciones
enzimticas bioqumicas en clulas mononucleares
perifricas en pacientes con BC y signos clnicopatolgicos comunes en pacientes con BC.

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de7 clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Metodologa del estudio

Deteccin de signos de activacin

temprana de linfocitos basados en el
clculo de la intensidad de fluorescencia
de clulas sanguneas
mononucleares
perifricas marcadas con fluorescena. La
estimacin de la cintica de este proceso
fue conducida va las constantes de
Michaelis-Menten.
Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de8 clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Materiales y mtodos
28
pacientes
con BC

10
pacientes
con cncer
de colon

23
pacientes
sanos

Fueron examinados para el anlisis de Km y los valores de

su Vmax para clulas individuales.
Las muestras de sangre y el tejido tisular fueron obtenidos a
partir de departamentos quirrgicos del centro mdico de
Assaf Harofeh y el centro mdico Rabin.
Los exmenes del tejido tumoral se realizaron a cargo del
departamento de patologa de dichos hospitales.

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de9 clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de10clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

 Lavadas 2 veces con PBS (pH 7.2) y

resuspendidas completamente en RPMI
1640.

FDA, mtodo para identificacin

monocitos
sanguneos
mediante
utilizacin de estereasas inespecficas.

de
la

Se incubaron por media hora

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de11clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Mediciones
La hidrlisis enzimtica de la FDA y la acumulacin intracelular de fluorescena por
PBMCs individuales se midieron por el escner clula individual en una bandeja de la
clula.
El control de la uniformidad celular se llev a cabo por examen microscpico en la
bandeja de la clula desarrollado y patentado por laboratorios.
Uso de la FDA mide los parmetros cinticos de la actividad esterasa de PBMCs
derivadas de pacientes con cncer y pacientes sanos.
Km y Vmax de la reaccin bioqumica para las clulas individuales (max 300 clulas /
paciente) se calcularon despus de las mediciones peridicas repetidas de las mismas
clulas, las cuales fueron expuestas a diferentes concentraciones de sustrato (0,6M,
1,2M, 2,4 M y 3,6M).
Por cada concentracin de sustrato, las clulas fueron medidas 6 veces en intervalos
aprox. de 40 s.
Bajo la exposicin secuencial FDA, la pendiente de la intensidad fluorescente entre las
concentraciones sucesivas era casi cero, lo que significa que Vo se dej caer a cero

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de12clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Resultados
Tabla 2. Caractersticas enzimticas generales de las PBMCs
en pacientes con cncer y en donadores sanos
Parmetros

Donadores
sanos (n=23)

P. Con cncer
de mama
(n=28)

P. Con cncer
de colon (n=10)

Sin tratamiento

1.730.18

1.930.24

2.020.2

PHA

2.410.21

2.520.25b

3.220.4b

Tejido tumoral

1.560.12

2.950.47b

3.450.72b

Sin tratamiento

633.887.9

476.799.2

338.980.1

PHA

1995360.3b

1094.5131.8b

513.694.8

Tejido tumoral

612.5112.6

722.9269.1

422.196.3

Km (M)

Vmax

Nota- b: P<0-05, representa la diferencia significativa entre clulas sin

tratamiento y clulas incubadas con PHA o tejido tumoral
Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de13clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Valores promedio en grupos con distintos

grados histopatolgicos tumorales
Se encontr diferencia significativa en
los valores de Km de las clulas no
tratadas (se encontr entre los
pacientes con cncer de mama con
alta (grado 1, y) y grado 2

3.5

2.5

El aumento de Los valores de Km

despus de la incubacin con el tejido Km M 2
del
tumor
es
estadsticamente
1.5
significativa en pacientes con cncer
de
mama
con
1
moderadamente diferenciado ( grado
2), en comparacin con el donante
0.5
En
los
pacientes
con
baja
sano
diferenciacin de tumor (
) el
clulas
0
aumento del valor promedio de Km
despus de la exposicin del tejido
tumoral no fue estadsticamente
significativa.

1clulas tratadas de

Clulas sin tratar

tejido tumoral

14

Tabla 3. Los cambios de la Vmax (au) en varios grupos de

pacientes con cncer de mama dependiendo del grado
histopatolgico del tumor
Clulas sin
tratamiento

Clulas tratadas
con tejido
tumoral

Clulas tratadas
con
fitohemaglutinin
as

Tumores bien
diferenciados

224.964.8

254.993.7

1071.8316.9a

Tumores
moderadamente
diferenciados

648.6186.3

1111.7479.8

1124.8193.9

Tumores poco
diferenciados

321.5106.0

303.5123.7

1109.2254.9a

a P< 0.02 representa la diferencia significativa entre las clulas sin

tratamiento
y las
incubadas
con fitohemaglutininas.
Monitoreo
de clulas
las caractersticas
cinticas
enzimticas de clulas
15

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

Tabla 4 Caractersticas bioqumicas de los varios grupos de pacientes

con cncer de mama de acuerdo a los factores de riesgo
Significado de los valores de Km (M)
Factores
de riesgo

Positivo
Clulas
sin
tratamien
to

Tejido
tumoral

Negativo
Pa

Clulas
sin
tratamie
nto

Tejido
tumoral

Pa

Metstasi 1.740.16 1.810.

s
37

<0.85

1.680.0
16

3.70.67

<0.009

Sobreexp
resin de
la
protena
Her2/neu

<0.20

1.90.18

3.370.6
7

<0.04

1.410.27 2.430.
7

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de clulas

16
Estrgen
1.850.16
2.940.en pacientes
<0.04 con1.310.2
5.282.0
perifricas
mononucleares
cncer de mama

<0.09

A) La reaccin enzimtica intracelular

tal como se comprueba por la
intensidad
fluorescente
de fluorescena acumulada (la
ordenada) en la sangre perifrica
individuo.
clulas mononucleares en uno de los
pacientes de cncer de mama .
A, las clulas no tratadas; B, las
clulas se incubaron con tejido
tumoral autlogo.
Cada grupo se define por las seis
mediciones
de
intensidad
de
fluorescencia tomadas a seis puntos
de tiempo por las mismas clulas
individuales
2013

17

Discusin y conclusiones
En primer lugar, en la exposicin al tejido
tumoral, las reacciones enzimticas de
clulas
perifricas
sanguneas
en
pacientes con cncer de mama fueron
marcadamente distintas a las reacciones
enzimticas en los pacientes sanos,
basados en los signos clsicos de Km y
Vmax.
Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de18clulas
perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

 En segundo lugar, valores ms altos de Km

en tejido tumoral activado de PBMCs
fueron asociados a un mejor pronstico de
pacientes con cncer de mama.

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de19clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

 Finalmente, las caractersticas bsicas, Km

y Vmax, de las reacciones enzimticas de
glbulos
blancos
mononucleares
perifricos vivos puede servir como un
criterio adicional para el monitoreo y
pronstico de cncer de mama.

Monitoreo de las caractersticas cinticas enzimticas de20clulas

perifricas mononucleares en pacientes con cncer de mama

 Se desarroll una nueva metodologa

para la deteccin temprana de la
activacin de linfocitos basados en
mediciones en estado estacionario
de la intensidad de fluorescencia de
clulas mononucleares de sangre
perifrica marcados con
fluorescena.
2015

21