SIEMBRA BACTERIANA Y

MEDIOS DE AISLAMIENTO
Objetivo
s
Manejar
el material

que se emplear en la
siembra e inoculacin
de cepas microbianas,
Saber llevar a cabo
los diferentes
mtodos utilizados en
siembra e
inoculaciones.
Conocer los diferentes
tipos de siembras que
pueden realizarse

Materiales
Asas de kolle
Hisopos estriles
Gradillas
Mechero Fisher
Marcadores de cera o
indelebles
Medios de cultivo en
placa
Medios de cultivo en
tubo
bacterias

Siembra Bacteriana y Medios de

Es poner
en contacto los microorganismos o la muestra
Aislamiento
bacteriologica con los medios de cultivo.

Hay diferentes metodos dependiendo de los objetivos que

se persiga con la siembra
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como: Temperatura, grado de humedad y
presion de oxigeno adecuada, asi como un grado correcto
de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener
los nutrientes y factores de crecimiento necesarios.

SIEMBRA DEL INOCULO EN MEDIO

SLQUIDO
se realiza con asa de siembra, sta se carga

con la
muestra problema slida o a veces liquida en
condiciones de esterilidad y se adiciona al medio lquido
agitndola.
Si se realiza con pipeta se toma un volumen de muestra
problema y se vierte al medio de cultivo lquido
agitndose hasta su homogeneizacin.
Si se realiza con escobilln o hisopo el mtodo es igual

SIEMBRA DEL
INOCULO EN
MTODOS
SIEMBRA EN
MEDIO DE
SOLIDO

CAJAS PETRI
a.Tcnica de Barry
b.Siembra de muestra lquida
en placa con asa de Digralsky
c.Siembra por agotamiento o
aislamiento en estra.
d.Siembra por agotamiento
e.Tcnica de los cuatro
cuadrantes.
f.Tcnica de los 3 giros.
g.Tcnica de siembra por
dilucin

Tcnica de Barry

Siembra previa al vertido

del medio en la placa.
Para ello en el medio de
cultivo
previamente
fundido (de 20 a 25
mililitros de medio a una
temperatura de 45 a 50
C)
en
tubo,
se
adicionar la cantidad de
inoculo que oscila entre
0,1
a
0,4
y
se
homogeniza la muestra
en el tubo mediante el
vibrador.
Una
vez,
constituida la muestra,
se vierte sta en la placa
Petri estril y se dejar

Siembra de
muestra lquida en
placa con asa de
Digralsky

Consiste en adicionar
al medio slido un
inoculo que puede
oscilar entre 0,2 y 1
ml segn los casos
con pipeta graduada
estril,
y
posteriormente
se
extiende con el asa
de Digralsky tambin
estril. Esta tcnica
se suele utilizar para
el .recuento viables,
antibiogramas, etc.

Siembra por
agotamiento o
Seaislamiento
tomar conen
el estra
asa de
siembra
(previamente
esterilizado por flameado)
una cantidad adecuada de
muestra
problema
depositando el inoculo en
uno
de
los
extremos
superiores de la placa; a
partir de aqu se realizarn
movimientos en zig-zag de
un extremo a otro de la
placa no tomndose en
ningn
momento
nuevo
inoculo y no levantndose el
asa
hasta
concluir
la

Siembra por
agotamiento
Aislamiento en
estra mltiple. Se tomar muestra
problema con asa de siembra estril y dicho inoculo
se depositar en el extremo superior de la placa,
extendindose de un extremo a otro de sta, slo en
la parte superior. Flameamos el asa de platino y
giramos ligeramente dicha placa repitiendo el
proceso anterior que nos permitir arrastrar la
muestra desde uno de los bordes donde qued la
muestra hasta el otro extremo superior de la placa.
se repite la operacin hasta un total de 4 o 5 veces,
teniendo en cuenta que el ltimo tramo se efectuar
hacia el interior de la misma. El resultado son
colonias
cada
vez
ms
separadas
como
consecuencia de que cada vez se va arrastrando y
separando ms la muestra. Es importante que para
separar estas colonias se realice en cada estra un
flameado previo del asa de siembra

Tcnica de los cuatro cuadrantes

Con un rotulador, por ejemplo, para vidrio, en la base

de la placa (reverso) se dibujan dos lneas
perpendiculares que debern cruzarse en el centro de
la placa de tal forma que sta quede dividida en 4
cuadrantes iguales. Se tomar con el asa de siembra
estril una cantidad de inoculo y se adicionar en el
extremo superior de uno de los cuadrantes
extendindose por todo ese cuadrante en forma de zigzag. Realizaremos la misma operacin sin flamear en
todos los dems cuadrantes siguiendo un orden de tal
forma que iremos arrastrando el microorganismo
problema, observndose en el ltimo cuadrante las
colonias ms aisladas o separadas.

Tcnica de los 3 giros

Se rotula la placa de forma anloga al caso anterior. Se
toma inoculo con el asa de platino y se siembra por
estra la mitad superior de la placa. Sin flamear el asa
de platino giraremos la placa unos 90 y volveremos a
sembrar una segunda vez. As sucesivamente hasta
completar toda la siembra (girando de nuevo la placa
90). Esta tcnica no es muy utilizada porque no
permite buenos aislamientos.

Tcnica de siembra por dilucin

Se dispondr de una batera de tubo con medio de cultivo especfico o
agua estril segn los casos. Se adicionar una cantidad de muestra
slida o lquida en los tubos sabiendo la cantidad de muestra o inoculo
que se aade en el tubo inicial. Se agitar hasta homogeneizacin. Con
pipeta estril se tomar una cantidad especfica o exacta y se adicionar
al segundo tubo, que se homogeneza. Repetimos la operacin anterior
con el tercer tubo y as sucesivamente hasta obtener la dilucin
deseada, inocular en placas de cultivo 1ml, extender con asa de
Digralsky previamente estril. Incubar a temperatura precisa durante
unas 24 horas y posteriormente recontar. Existen muchas variaciones de
este mtodo.

MTODOS DE
SIEMBRA DEL
INOCULO EN TUBO
a. Siembra por
estra
en
tubos
con
medio slido
inclinado
b. Siembra por
picadura
c. Siembra por
picadura
y
estria

Siembra por estra en

tubos con medio slido
Se inclinado
toma con asa de siembra
previamente esterilizada por
flameado
una
cantidad
de
muestra adecuada. Se aade al
tubo desde el fondo de la
superficie de este, realizando
movimientos ascendentes en
zig-zag hasta completar toda la
superficie
del
medio.
Este
mtodo
es
utilizado
para
conservar cepas durante largos
periodos, as como para la
realizacin de ciertas pruebas
bioqumicas,-como, por ejemplo,