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T E S I S:
MELAZA
Industria agro-azucarera
BIOETANOL
Lder en el sector
primario agrcola
S. cerevisiae
Microorganismos responsables en
la fermentacin
Z. mobilis
Gnecco, 2004; Vzquez y Dacosta, 2007
Biocombustibles
Ley de Promocin y Desarrollo de los Biocombustibles
Los
Tipos
de
biocombustibles
carburantes
renovables
son
productos
Bioetanol
Biogs
(SAGARPA, 2011)
2008
Segunda generacin
Tercera generacin
(SAGARPA, 2011)
96 %
99.5 % al
99.9 %
5%
Reemplazando
al oxigenante
Altamente
contaminante
del suelo y del
agua
subterrnea
TIPOS DE MELAZA:
A (Primera etapa de cristalizacin y
centrifugacin)
B (sometida a nueva cristalizacin y
centrifugacin)
C (modo anlogo)
Aprovechamiento de la melaza de
caa
UTILIZACIN
Alimentos
GENERALIDADES
Propicia una alimentacin rica en hidratos de carbono
adems de vitaminas del grupo B y abundantes minerales.
Animales
Fermentacin
Saccharomyces cerevisiae
Clasificacin taxonmica
Reino
Fungi
Divisin
Ascomycota
Clase
Hemiascomycetes
Orden
Saccharomycetales
Familia
Saccharomycetacea
e
Gnero
Saccharomyces
Especie
cerevisiae
subproductos
Osmotolerante
Presenta alta viabilidad celular
Temperatura
ptima
de
crecimiento es de 25 a 30 C
Fermenta:
Glucosa, Galactosa, Sacarosa y Maltosa
No Fermenta:
Lactosa
Asimila: Rafinosa
En presencia de
oxgeno pueden
metabolizar
glicerol, etanol y
lactato
Crecimiento Microbiano
Fructosa
11 Alcohol deshidrogenasa
Produccin de Etanol
JUSTIFICACIN
Debido al agotamiento de los combustibles fsiles y el gran impacto
ambiental que estos ejercen, el desarrollo de la tecnologa de los
Biocombustibles busca, adems de solucionar el problema energtico
actual, un combustible renovable y con menor emisin de gases
contaminantes. Por ello, el bioetanol puede ser considerado un buen
recurso energtico potencialmente sostenible, de alta vialidad tcnica para
su produccin y que puede ofrecer ventajas tanto ambientales como
econmicas a largo plazo. La utilizacin de Bioetanol tambin podra
generar un gran impacto sobre el problema del cambio climtico y el
calentamiento global, ya que sta es una fuente energtica limpia y
renovable, que ayudara a reducir la emisin de los gases de efecto
invernadero.
HIPTESIS
El medio de cultivo a base de
melaza diluida y
OBJETIVOS
Objetivos
Especficos
Objetivo General
Caracterizar la composicin de la melaza: contenido de
Determinar la tasa de dilucin de melaza en agua que
humedad, azcares totales, azcares reductores,
permite constituir, en conjunto con fosfato de amonio, un
slidos suspendidos, nitrgeno, fosfato y cenizas.
medio de cultivo idneo para producir un alto contenido
Determinar las cinticas de consumo de azcares
de etanol en un cultivo sumergido de Saccharomyces
totales, azcares reductores, nitrgeno y fosfato, y las
cerevisiae 424A (LNHST) a nivel matraz.
cinticas de produccin de biomasa y etanol para cada
tratamiento experimental.
Determinar la tasa de dilucin de melaza en agua que
maximiza la produccin de biomasa.
Determinar la tasa de dilucin de melaza en agua que
maximiza el contenido de etanol producido.
MATERIALES
Y
MTODOS
MATERIAL BIOLGICO
El
Estemicroorganismo
proyecto de investigacin
utiliz
utilizado fue
unamelaza
cepa
obtenida del Ingenio
en la
sobreproductora
de S.Eldorado,
cerevisiaesituado
424A (LNH
sindicatura
de Eldorado
de la ciudad
ST),
un cultivo
proporcionado
por de
el
Culiacn, Sinaloa;
de la cosecha
Laboratorio
de Biotecnologa
y 2013-2014.
Bioingeniera
del Instituto Tecnolgico de Celaya.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Propagacin de
Saccharomyces
cerevisiae
Fermentacin:
150 g L-1, 200 g L-1,
250 g L-1 y 300 g L-1
de melaza diluida
Muestreo,
preparacin de
muestras y anlisis
MEDIOS DE CULTIVO
Medio
Medio de
de fermentacin
propagacin
Compuesto
TRATAMIENTOS
Medios de Melaza
Extracto de
levadura
Cantidad (g)
10
NH4Cl
5 g L-1 de (NH4100
)H2PO4
2.5
2.91
250 g L-1 Na2HPO47H21Og L-1 de MgSO
47H2O
300 g L-1
Centrifugacin
por 30 min a
4000 rpm
KH2PO4
MgSO47H2O
0.25
CaCl2
0.08
C6H8O7H2O (cido
ctrico
monohidratado)
4.3
Se recolect el
medio y se
afor a 500 mL
C6H5Na3O7XH2O
(citrato de sodio
3
Los medios se esterilizaron en
tribsico
autoclave durante 15 min a 15 lbf/plg2
hidratado)
2
1992)
Los medios se esterilizaron en autoclave durante(Thatpamala
15 min a 15ylbcol.,
f/plg
CONDICIONES DE CULTIVO
Resuspencin de
levadura con 10
mL de NaCl (0.9
%)
Inoculacin con
8 mL en 250 mL
de medio de
propagacin
-28 C
-280 rpm
-16 horas
Inoculacin en
una relacin del
10 % v/v inculo
respecto al
medio de cultivo
Fermentacin
-28 C
-150 rpm
-96 horas
MUESTREO
Inmediatamente:
Tratamiento y Anlisis
METODOLOGA APLICADA
Sobrenadante
Destilacin
Determinacin de
Bioetanol
(Sumbhate, 2012)
Filtracin
Membrana
0.45 m
Centrifugacin por
20 min a 3500 rpm
Determinacin de:
Azcares Totales
(Dubois y col., 1956)
Azcares Reductores
(Miller, 1959)
Nitrgeno
(Solrzano, 1969)
Fosfato (Jurez y
Rochn, 1966)
Determinacin
de Biomasa
(Ros-Iribe, 2011)
Determinacin de Etanol
0.4 mL de
destilado
15 mL de
filtrado
Destilacin
0.8 mL de Sln.
de Dicromato
de Potasio
10 mL de
destilado
10 min
585 nm
4 mL de
HO
destilada
(Sumbhate, 2012)
RESULTADOS Y
DISCUSIONES
Caracterizacin de la Melaza
Determinacin
Humedad
21.84
Cenizas
6.43
Slidos en
suspensin
1.23
Azcares totales
57.81
Azcares reductores
26.01
Nitrgeno
0.0013
Fosfatos
0.1742
Medios de fermentacin
35.53 g L-1
(4.45 % v/v)
9.38 g L-1
80
60
40
20
24
48
72
-1
-1
100
Nitrgeno [ g L ] Fosfatos
Nitrgeno
Fosfatos
-1
10
Azcares totales
Produccin de biomasa [ g L ]
Biomasa
Etanol
96
Tiempo de fermentacin [ h ]
20
34.90 g L-1
(4.36 % v/v)
17.61 g L-1
80
14
12
60
10
40
6
4
20
2
0
-2
0
24
48
72
-1
-1
100
16
-1
Produccin de biomasa [ g L ]
18
Nitrgeno
Fosfatos
Nitrgeno [ g L ] Fosfatos
Azcares totales
Azcares reductores
Biomasa
Etanol
Tiempo de fermentacin [ h ]
16
15.2 g L-1
140
12
120
10
100
-1
-1
Produccin de biomasa [ g L ]
160
34.86 g L-1
(4.36 % v/v)
14
4
Nitrgeno
Fosfatos
80
60
40
20
24
48
72
-1
Azcares totales
Azcares reductores
Nitrgeno [ g L ] Fosfatos
Biomasa
Etanol
96
Tiempo de fermentacin [ h ]
30.2 g L-1
(3.79 % v/v)
200
180
160
14
140
12
120
-1
10
80
60
40
20
0
-20
0
24
48
72
96
-1
100
[gL ]
-1
Produccin de biomasa[ g L ]
16
16.6 g L-1
Fosfatos
18
Nitrgeno
Nitrgeno
Fosfatos
Azcares totales
Azcares reductores
Etanol
Azcares reductores [ g L ]
Biomasa
Azcares totales
Tiempo de fermentacin [ h ]
Produccin de biomasa
Medio de 150 g L
-1
Medio de 200 g L
-1
Medio de 250 g L
-1
Medio de 300 g L
-1
20.0
-1
Produccin de biomasa [ g L ]
17.5
15.0
12.5
10.0
7.5
5.0
2.5
0.0
24
48
72
96
Tiempo de fermentacin [ h ]
Consumo de azcares
-1
200
180
80
160
-1
-1
Medio de 150 g L
Medio de 200 g L
-1
-1
Medio de 250 g L
Medio
de 300 g L
-1
-1
Medio de 150 gL
Medio de 200 gL
-1
-1
Medio de 250 gL
Medio de 300 gL
140
60
120
100
40
80
60
20
40
20
00
-20
00
24
24
48
48
72
72
96
96
Tiempo
Tiempo de
de fermentacin
fermentacin [[ h
h ]]
Cinticas
dede
consumo
dede
azcares
reductores
empleando
diferentes
Cinticas
consumo
azcares
totales empleando
diferentes
concentraciones de melaza
Produccin de bioetanol
-1
-1
Medio de 150 g L
-1
Medio de 250 g L
Medio de 200 g L
-1
Medio de 300 g L
24
48
72
96
Tiempo de fermentacin [ h ]
Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Suma de
Cuadrados
Grados de
Libertad
Cuadrado
Media
4.12683
1.37561
48.3224
52
0.929277
52.4493
55
Entre
grupos
Dentro de
los grupos
Total
(Corregido)
H0 = 1 = 2 = 3 = 4
H1 2 3 4
SE ACEPTA
Razn-F
Valor-P
1.48
0.2307
-1
Medio de 150 g L
-1
Medio de 250 g L
Medio de 200 g L
-1
Medio de 300 g L
24
48
72
96
Tiempo de fermentacin [ h ]
Investigacin
Produccin
de etanol
Siqueira y col.
(2008)
Lau y col. (2010)
Govindaswamy y
Vane (2007)
Pea y Arango
(2009)
Condiciones de fermentacin
37.8 g L
(4.7 % v/v)
Melaza de soya
S. cerevisiae (LPB-SC)
20 Brix
Sin adicin de MgSO4 y NH4NO3
46.9 g L-1
(5.9 % v/v)
24 g L-1
(3 %v/v)
31 g L-1
(3.9 % v/v)
39.89 g L-1
(5 % v/v)
-1
CONCLUSIONES
AGRADECIMIENTOS
PROFAPI 2013
Laboratorios del Posgrado en Biotecnologa:
Laboratorio de Nutracuticos
AGRADECIMIENTOS
DIRECTORES DE TESIS:
Dra. Erika Yudit Ros Iribe
Dr. Oscar M. Hernndez Caldern
COMIT DE EVALUACIN:
Dra. Edith Oliva Cuevas Rodrguez
Dra. Maritza Elizabeth Cervantes Gaxiola
AGRADECIMIENTOS
AGRADECIMIENTOS
AGRADECIMIENTOS
MI GRAN AMOR
AGRADECIMIENTOS
UN BUEN EQUIPO!!!
AGRADECIMIENTOS
Gra
cias
por su
atenci
n !!!